枯草芽孢桿菌XM16菌株抗真菌蛋白的分離純化及性質(zhì)結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、本文研究了枯草芽孢桿菌菌株XM16產(chǎn)生抗菌蛋白的發(fā)酵條件，從其發(fā)酵液中分離純化出了抗菌蛋白，并對(duì)抗菌蛋白的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步的探討，對(duì)抗菌蛋白的應(yīng)用打下了良好的基礎(chǔ)。 采用不同的溫度、不同的發(fā)酵時(shí)間、不同的搖床轉(zhuǎn)速、不同的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)基的不同pH值對(duì)拮抗菌株XM16進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)酵，檢測(cè)其發(fā)酵液的抗菌活性，得到了產(chǎn)生抗菌蛋白的最佳條件：在pH值7的BYP培養(yǎng)基中，以30℃的溫度，搖床轉(zhuǎn)速為200r/m震蕩培養(yǎng)48h，以30％和7

2、0％飽和度的硫酸銨進(jìn)行分級(jí)鹽析，可得到大量的抗菌蛋白。 采用上述的培養(yǎng)條件，通過硫酸銨分級(jí)沉淀，經(jīng)過透析除鹽，濃縮蛋白粗提液經(jīng)過SephacrylS-100HR凝膠柱層析分離純化到一種對(duì)棉花枯萎病菌具有抑制用的蛋白質(zhì)，凝膠層析的峰Ⅰ和峰Ⅱ都有抑菌活性，說明此拮抗菌株不止分泌一種抗菌蛋白，通過SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳可以看出含有兩種蛋白。 通過對(duì)抗菌蛋白進(jìn)行溫度、pH、蛋白酶、氯仿的敏感性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)該抗菌蛋白對(duì)熱

3、穩(wěn)定性較好，經(jīng)過100℃熱處理30min，活性未喪失；該抗菌蛋白在不同的酸堿情況下比較穩(wěn)定，但在強(qiáng)堿條件下活性會(huì)下降；經(jīng)氯仿處理后的抗菌蛋白溶液，仍具有明顯的抗菌活性，說明其對(duì)氯仿不敏感；在各種蛋白酶處理下，發(fā)現(xiàn)用蛋白酶E處理過的蛋白質(zhì)溶液?jiǎn)适б志钚裕鞍酌窴和胰蛋白酶處理過的仍具有部分活性。 通過研究發(fā)現(xiàn)該抗菌蛋白含有兩種蛋白，其分子量分別為21KD和30KD，這兩種抗菌蛋白的質(zhì)譜分析表明：分子量為21KD的蛋白共含有19