不同HER-2水平的人乳腺癌MCF-7細胞內miRNAs表達譜及相關miRNAs對癌細胞生物學行為的影響.pdf

1、背景：表皮生長因子受體包含有多個不同類型的受體，含有膜酪氨酸激酶活性的人表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）屬于其中。當HER-2基因被激活，可導致細胞增生活躍和阻礙細胞的凋亡，這為腫瘤在乳腺癌中的發(fā)展提供主要的驅動力。一類內源性的、保守的、非編碼的、蛋白單鏈小RNA（約含有22個核苷酸），稱微小RNAs（MicroRNAs，miRNAs）。miRNAs主要

2、通過腫瘤生物學如細胞增殖、分化、細胞凋亡和轉移等方面調節(jié)細胞的發(fā)生發(fā)展。目前，miRNAs既可作為癌基因又可作為抑癌基因參與細胞的調控。近些年有關HER-2和miRNAs之間的報道日益增多，其中有些研究提示乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與HER-2的過表達和miRNAs的失調相關聯(lián)。因此關于探究miRNAs和HER-2之間的聯(lián)系極為重要。
　　目的：通過對比觀察人乳腺癌 MCF-7細胞和MCF-7穩(wěn)定轉染HER-2（MCF-7/HER-2）細胞

3、中miRNAs的表達差異，初步篩選出與HER-2表達相關的miRNAs表達譜，為miRNAs通過參與HER-2信號通路從而參與調控乳腺癌細胞生物學行為的機制提供研究基礎。
　　方法：
　?。?）本研究采用miRNAs芯片技術，培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細胞和MCF-7/HER-2細胞，檢測兩株細胞內miRNAs的表達，以MCF-7細胞為基準，篩選出與HER-2表達相關且差異大于兩倍的miRNAs。
　　（2）選取MCF-7

4、/HER-2細胞較MCF-7細胞上調的hsa-miR-181a-5p和下調的hsa-miR-877-3p為對象，采取實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應（quantitative real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction，qRT-PCR）驗證其在MCF-7細胞和MCF-7/HER-2細胞中的表達量。
　?。?）選取MCF-7/HER-2細胞，分別轉染hsa-miR-18

5、1a-5p阻遏物（miR-181a-5p ASO）和hsa-miR-877-3p模擬物（miR-877-3p mimic），通過細胞劃痕實驗，MTT實驗和Transwell侵襲遷移實驗檢測細胞功能學的改變。
　　（4）運用生物信息學方法對這兩個miRNAs可能的靶基因進行預測。
　　結果：
　　（1）利用miRNAs微陣列，篩選獲得217個與HER-2相關的miRNAs，其中MCF-7/HER-2細胞較MCF-7細胞上

6、調的miRNAs有123個，下調的miRNAs有94個。
　?。?）qRT-PCR結果顯示，MCF-7/HER-2細胞與MCF-7細胞相比，hsa-miR-181a-5p的表達顯著上調，hsa-miR-877-3p的表達顯著下調（P<0.01）。
　　（3）hsa-miR-181a-5p對HER-2陽性乳腺癌細胞的增殖、侵襲、遷移的活性有促進作用，hsa-miR-877-3p對HER-2陽性乳腺癌細胞的增殖、侵襲、遷移的活性

7、有抑制作用。
　　結論：
　　（1）MCF-7細胞和MCF-7/HER-2細胞 miRNAs的表達有差異。
　　（2）hsa-miR-181a-5p的表達在MCF-7/HER-2細胞中較MCF-7細胞表達顯著上調。在HER-2陽性的乳腺癌細胞中hsa-miR-181a-5p可促進細胞的增殖、侵襲和遷移。
　?。?）hsa-miR-877-3p的表達在人乳腺癌細胞MCF-7/HER-2中較MCF-7表達顯著下調。在