2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩66頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、原生質(zhì)體培養(yǎng)及體細胞雜交技術(shù)為柑橘遺傳育種工作開辟了一條新思路,它已成為柑橘砧木及接穗品種改良的重要手段。目前,柑橘原生質(zhì)體主要由愈傷組織和葉片分離而來,但只有來于前者的原生質(zhì)體能持續(xù)分裂并再生,而葉肉原生質(zhì)體目前還不能單獨用于柑橘遺傳改良。迄今,這兩種類型原生質(zhì)體再生能力差異的機制尚不清楚。已有研究表明,活性氧(ROS)引起的氧化脅迫可能是造成不可再生型原生質(zhì)體再生難的原因,然而另一方面ROS作為信號分子,對原生質(zhì)體再生具有重要的調(diào)控

2、作用,抑制其產(chǎn)生會導(dǎo)致原生質(zhì)體不可分裂再生?;诖?,本論文以椪柑愈傷組織和葉片為起始材料,采用熒光標記法分析了ROS在椪柑原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)中的動態(tài)變化,同時通過NADPH氧化酶特異性抑制劑DPI和過氧化物酶抑制劑NaN3處理探究了其ROS的來源;分析了NADPH氧化酶基因家族成員在椪柑原生質(zhì)體分離培養(yǎng)過程中的表達情況,克隆了一個特異表達的NADPH氧化酶基因(Crrboh10);構(gòu)建了Crrboh10的過表達載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法

3、獲得了轉(zhuǎn)基因愈傷組織,并測定了椪柑轉(zhuǎn)基因愈傷組織和非轉(zhuǎn)基因愈傷組織的可溶性蛋白含量和H2O2含量。主要研究結(jié)果如下:
  1.選取椪柑愈傷組織與葉肉原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)過程中5個時間點:即酶解2小時、4小時、6小時,培養(yǎng)4天、8天的原生質(zhì)體,進行ROS熒光探針染色并用共聚焦顯微鏡觀察檢測。結(jié)果表明,在愈傷組織原生質(zhì)體培養(yǎng)階段,細胞膜上出現(xiàn)明顯的ROS信號,而葉肉原生質(zhì)體中ROS信號無明顯差異;分離階段愈傷組織原生質(zhì)體其ROS水平顯著

4、低于葉肉原生質(zhì)體,但在培養(yǎng)階段顯著高于葉肉原生質(zhì)體。
  2.選取椪柑愈傷組織原生質(zhì)體體分離與培養(yǎng)過程中4個時間點:即酶解2小時、培養(yǎng)4天、8天、12天的原生質(zhì)體,進行DPI和NaN3處理。結(jié)果表明,兩種抑制劑處理均降低了原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)過程中的ROS水平,表明椪柑愈傷組織原生質(zhì)體其活性氧產(chǎn)生源有NADPH氧化酶和過氧化物酶。
  3.利用半定量RT-PCR方法分析了13個柑橘NADPH氧化酶基因在原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)過程中

5、的表達情況。結(jié)果表明,中共檢測到9個基因(Crrboh1、Crrboh2、Crrboh5-6、Crrboh8-9及Crrboh10-12)的表達,且變化趨勢有明顯差異;不表達的基因是Crrboh3、Crrboh4、Crrboh7、crrboh13。
  4.克隆了椪柑Crrboh10基因,并對其進行表達分析。該基因全長2812 bp,開放閱讀框2748 bp,編碼915個氨基酸;該基因編碼的蛋白分子量為103.51 kD,理論等電

6、點為9.11。使用實時定量PCR分析Crrboh10基因在椪柑組織中表達情況,發(fā)現(xiàn)其在根、莖、葉、愈傷組織中均有表達,表達量由高到低依次為愈傷組織、葉、根、莖。
  5.將椪柑Crrboh10基因?qū)胫参镫p元表達載體pMD1301上,構(gòu)建了pMD1301-Rboh10超表達載體以及將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105。以椪柑愈傷組織為外植體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進行遺傳轉(zhuǎn)化,采用GUS組織化學(xué)染色和實時定量PCR技術(shù)對轉(zhuǎn)化材料進行鑒定,成功獲得

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論