產(chǎn)纖維素酶菌株的分離、誘變及生物學特性研究.pdf

1、本研究從河南省洛陽、商丘、周口、漯河等8個地市周圍的秸桿、稻草垛下層5-10cm的土壤58份。在加有羧甲基纖維素鈉和微晶纖維素粉為底物的選擇性培養(yǎng)基上進行產(chǎn)纖維素酶菌株的分離，利用剛果紅平板法篩選透明圈較大的菌株。采用3，5-二硝基水楊酸法測定纖維素酶活力。對篩選出的菌株進行菌落特征、顯微形態(tài)、生理生化試驗和16S rDNA序列進行鑒定確定其種屬。
　　對篩選出的高產(chǎn)纖維素酶活的菌株進行生物學特性的研究。使用紫外誘變以及亞硝酸鹽誘

2、變對篩選的菌株進行誘變，得到的菌株用3，5-二硝基水楊酸法測定纖維素酶活力。
　　將芽孢桿菌和酵母菌菌液按5％的濃度接種于秸稈發(fā)酵培養(yǎng)基中，分別于72h、96h和120h取樣進行測定。通過平板滴種法測定秸稈中微生物數(shù)量，測定降解后秸稈的粗纖維以及粗蛋白含量來衡量菌株的降解能力。
　　試驗結果表明：從不同樣品中共分離出具有纖維素酶酶活的菌株42株，通過初篩篩選出10株酶活較高的菌株。測定濾紙酶活和羧甲基纖維素鈉酶活，得到一株二

3、者活力都較高的菌株B.LY02，分別為0.5351U/mL和0.3654 U/mL。顯微鏡觀察表該菌株呈短桿狀，有芽孢形成，生理生化鑒定初步確定為芽孢桿菌屬的菌株，16S rDNA分子鑒定B.LY02為地衣芽孢桿菌。
　　對菌株 B.LY02進行了生物學特性研究，發(fā)現(xiàn)最適其生長溫度為37℃，最適生長時間為24h，最適其生長 pH為5.0。將菌株 B.LY02作為出發(fā)菌株進行紫外誘變和亞硝酸鹽誘變，酶活力分別為0.7187U/mL和

4、0.7437U/mL，較出發(fā)菌株提高了34.31%和39%。
　　秸桿發(fā)酵后，在72h、96h、120h物料中的芽孢桿菌和酵母菌均較對照組差異極顯著（P<0.01），發(fā)酵96h后物料中兩種菌的數(shù)量均已達到峰值，發(fā)酵120h時的微生物的數(shù)量與96h差異不顯著（P>0.05）。而物料中粗纖維的含量在120h時降解率最高可達11.65％，粗纖維的含量比原料降低了3.9個百分點；粗蛋白的含量在120h時提高率最高可達44.80%，粗蛋白的