益氣活血養(yǎng)陰解毒方對(duì)放射性肺損傷中TGF-β1、TNF-α表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:據(jù)報(bào)道，目前肺癌的發(fā)病率和死亡率均較高，位于惡性腫瘤的首位。由于肺癌的發(fā)現(xiàn)一般都是中晚期，有將近30％的患者失去手術(shù)的機(jī)會(huì)。因此，放、化療成為肺癌的主要治療方法。
　　放療是乳腺癌、肺癌、食管癌等胸部惡性腫瘤的治療方法之一。由于肺臟對(duì)X線比較敏感，故放射性肺損傷（radiation-induced lung injury，RILI）為其常見(jiàn)并發(fā)癥，發(fā)生率從10％-50％不等。
　　放射性肺損傷為胸部惡性腫瘤照射時(shí)

2、肺野內(nèi)的正常肺組織發(fā)生的炎性及纖維化樣變化。其大致分為潛伏期、放射性肺炎和放射性肺纖維化三個(gè)階段。其主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，咳嗽，胸痛，呼吸困難，最終導(dǎo)致呼吸衰竭，嚴(yán)重影響患者的生活治療，而且制約著放射劑量的提高。因此亟需尋求對(duì)放射性肺損傷有效的防治方法。雖然有用激素、血管內(nèi)皮抑制素等治療放射性肺損傷的報(bào)道，但是其有效性低、毒副作用大，所以在臨床上的應(yīng)用受到限制。目前放射性肺損傷的發(fā)病機(jī)理尚不明確，藥物治療效果差，因此探討其發(fā)病機(jī)理，對(duì)尋求

3、新的治療措施有重要意義。
　　近些年來(lái)，中草藥在放射性肺損傷中的應(yīng)用得到越來(lái)越多的關(guān)注。中醫(yī)認(rèn)為，放射線為熱毒之邪，熱毒瘀滯、氣陰兩虛為放射性肺損傷的發(fā)病病機(jī)，因此治療以益氣活血、養(yǎng)陰解毒為主。益氣活血養(yǎng)陰解毒方(Yiqihuoxue-Yangyinjiedu recipeYYR)由黃芪309，當(dāng)歸129，雙花309，甘草69，南沙參159，麥冬159，生地109，赤芍159，紫苑109，冬花109，桔梗69，仙靈脾109，女貞子

4、15g，白果109，桑葉109，根據(jù)一般的煎藥法煎制而成。
　　很多研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1)、腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）既參與放射性肺損傷早期的炎癥反應(yīng)，又可通過(guò)調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞的增殖、分化及膠原纖維的沉積來(lái)影響后期纖維化過(guò)程。
　　本研究通過(guò)構(gòu)建放射性肺損傷動(dòng)物模型，應(yīng)用益氣活血養(yǎng)陰解毒中藥進(jìn)行干

5、預(yù)，觀察炎癥、纖維化改變，探討益氣活血、養(yǎng)陰解毒方對(duì)放射性肺損傷的防預(yù)作用及可能的作用機(jī)制。
　　方法:1.放射性肺損傷模型的建立:小鼠全肺單次12Gy照射，觀察小鼠一般情況和不同時(shí)相的組織病理學(xué)變化，通過(guò)HE染色、Masson染色等確定成功建立放射性肺損傷模型。
　　2.對(duì)放射性肺損傷炎癥、纖維化的影響:小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（35只）、中藥對(duì)照組（35只）、照射組（35只）、治療組（照射+治療）（35只），用直線加速器對(duì)

6、后2組小鼠的全肺進(jìn)行單次照射，分別于照射后1h、24h、72h、2w、4w、8w、24w處死小鼠取標(biāo)本進(jìn)行HE染色、Masson染色及羥脯氨酸的測(cè)定。
　　3.機(jī)制的研究:免疫組織化學(xué)方法測(cè)定TGF-β1、TNF-α蛋白的表達(dá)，實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定TGF-β1、TNF-α mRNA的表達(dá)。
　　4.結(jié)果統(tǒng)計(jì):選用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，選用單因素方差分析比較各組間的差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　

7、結(jié)果:1.動(dòng)物模型的建立:通過(guò)HE染色、Masson染色的結(jié)果顯示，空白對(duì)照組小鼠的肺泡、毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)完整清晰，無(wú)滲血滲液等表現(xiàn)。模型組小鼠肺組織病理學(xué)變化是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，由初期肺組織間質(zhì)充血水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，到后期的膠原纖維和細(xì)胞外基質(zhì)的廣泛沉積。
　　2.基本情況:空白對(duì)照組及中藥對(duì)照組小鼠皮毛有光澤，活潑強(qiáng)壯，進(jìn)食正常;照射組小鼠的皮毛從照射后第4周開(kāi)始變白，第8周全部變白，一直到24周，咳喘，精神萎靡，進(jìn)食減少;治

8、療組（照射+治療）小鼠早期有咳喘，進(jìn)食減少，精神萎靡，后期精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，進(jìn)食量也有所增加，咳喘癥狀也有所改善。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)小鼠死亡。
　　3.組織學(xué)變化及病理評(píng)分:HE染色、Masson染色結(jié)果顯示空白對(duì)照組和中藥對(duì)照組中小鼠的肺泡壁、毛細(xì)血管壁完好無(wú)缺，無(wú)滲血滲液，結(jié)構(gòu)完整清晰。照射組小鼠早期的病理變化為滲血滲液，炎性細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)等，后期可見(jiàn)肺組織有大量的膠原纖維、細(xì)胞外基質(zhì)沉積等病變。治療組（照射+治療）小鼠的病理學(xué)變化均較照

9、射組減輕。治療組（照射+治療）肺泡炎評(píng)分從照射后第72h后較照射組減輕(72h，P＜0.05;2w，4w，8w，P＜0.O1);治療組（照射+治療）的纖維化評(píng)分第24w時(shí)較照射組明顯降低(24w,P＜0.01)。空白對(duì)照組和中藥對(duì)照組各個(gè)時(shí)相病理學(xué)評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.羥脯氨酸的測(cè)定:第1h各組羥脯氨酸的含量無(wú)明顯變化;第24h、72h照射組小鼠羥脯氨酸含量較空白對(duì)照組升高，但之間的差異無(wú)顯著區(qū)別(P＞0

10、.05)，照射組小鼠羥脯氨酸含量從第2w開(kāi)始明顯增高，而治療組（照射+治療）小鼠羥脯氨酸的含量呈低水平增高趨勢(shì)，第4w、8w、24w治療組（照射+治療）小鼠羥脯氨酸含量與照射組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);空白對(duì)照組和中藥對(duì)照組各個(gè)時(shí)相方差分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5.TGF-β1、TNF-α的表達(dá):TGF-β1、TNF-α的表達(dá)在空白對(duì)照組和中藥對(duì)照組中各個(gè)時(shí)相無(wú)顯著差異(P＞0.05)。照射組中TGF-β

11、1、TNF-α各個(gè)時(shí)相的表達(dá)都比空白對(duì)照組及中藥對(duì)照組中的高(P＜0.05)，而經(jīng)過(guò)益氣活血養(yǎng)陰解毒方治療后各個(gè)時(shí)相的表達(dá)水平均降低(P＜0.05)，除照射后1h、24h時(shí)相外。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)小鼠全肺單次12Gy照射成功建立了放射性肺損傷動(dòng)物模型，病變典型，而且無(wú)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性高。TGF-β1、TNF-α在放射性肺損傷中發(fā)揮重要的作用，而且相互影響。益氣活血、養(yǎng)陰解毒方能夠抑制在照射刺激下TGF-β1、TNF-