ChABC緩釋微球促大鼠損傷脊髓再生修復的實驗研究.pdf

1、目的：①制備ChABC緩釋微球，考察其外觀形態(tài)、粒徑分布、載藥量、包封率及體外釋藥特性以用于進一步的大鼠脊髓損傷動物實驗研究。②探討ChABC緩釋微球促進大鼠損傷脊髓再生修復的作用。 方法：①通過復乳法制備ChABC緩釋微球，使用掃描電鏡及激光粒度分布儀觀察微球形態(tài)并測定其粒徑分布；考察微球載藥量、包封率等指標；并以生理鹽水作為體外降解介質(zhì)，采用酶活性測定方法初步研究ChABC緩釋微球體外釋藥特性。②采用大鼠T<,10>脊髓完全

2、橫斷傷模型，將大鼠分為正常組(N)、假手術組(S)、單純損傷組(L)、ChABC單劑組(C)、ChABC緩釋微球組(M)。N組：不進行任何干預處理；S組：只咬除T<,8～9>椎板，不損傷脊髓；L組：脊髓橫斷后，斷端局部使用生理鹽水；C組：脊髓橫斷后，斷端局部使用ChABC； M組：脊髓橫斷后，斷端局部使用ChABC緩釋微球。于大鼠脊髓損傷術后每周行BBB運動功能評分。損傷后4w，每組行CS56免疫組化染色，損傷后10w，每組行TMRDA

3、順行示蹤，CSEP誘發(fā)電位檢查，及NF200、GAP43、GFAP免疫組化檢查，并采用免疫組化圖像分析系統(tǒng)進行定量分析。 結果：①采用復乳法制備的ChABC的PLGA緩釋微球，其表面光滑圓整，顆粒規(guī)則無粘連，微球大小較均勻，粒徑分布較窄；微球的平均載藥量為15.55±0.90％，平均包封率為53.884±1.45；微球冷凍干燥后，.再分散性良好，外形美觀；微球體外釋藥研究表明，載藥微球在3w內(nèi)的累積釋藥分數(shù)為0.8514，釋藥過

4、程較為平穩(wěn)，其體外釋藥符合Weibull方程并能達到有效的治療濃度。②BBB運動功能評分：術后10w，三組比較具有統(tǒng)計學差異：兩兩比較，M組與L組、C組與M組具有統(tǒng)計學差異。③CSEP誘發(fā)電位檢查：正常組大鼠CSEP檢測，主反應潛伏期為14.76±1.454ms、主反應峰峰值為0.200±0.0318mv。M組主反應潛伏期為25.53±2.215ms、、主反應峰峰值為0.028±0.003mv，兩組差異有統(tǒng)計學意義。其它各組均未檢測出C

5、SEP波型。④脊髓標本一般觀察：術后10w取材及HE染色，見各組脊髓橫斷處斷端均已連接，但瘢痕范圍及色澤不同，脊髓橫斷處大量膠質(zhì)細胞浸潤。⑤TMRDA順行示蹤：各組的熒光含量、強度、形態(tài)分布具有不同特點：正常組大鼠及各脊髓損傷組大鼠的脊髓橫斷傷頭側可見與脊髓縱軸平行排列的大量強烈連續(xù)線狀熒光；L組脊髓橫斷傷尾側可見少量中等強度的點狀熒光和稀疏微弱的間斷線狀熒光；C組脊髓橫斷傷尾側可見中等量中等強度的點線狀熒光和稀疏微弱的間斷線狀熒光；

6、M組脊髓橫斷傷尾側可見中等量中等強度的連續(xù)線狀熒光。⑥免疫組化結果及圖像分析顯示：CS56染色：M組總陽性總面積大于C組，差異有統(tǒng)計學意義；NF200染色：M組總陽性面積大于L組，差異有統(tǒng)計學意義；GAP43染色：M組總陽性面積大于L組，差異有統(tǒng)計學意義；GFAP染色：L組、C組、M組之間差異無統(tǒng)計學意義。 結論：①本實驗采用復乳法，成功制備得到ChABC的PLGA緩釋微球，制備的ChABC緩釋微球各項指標達到預期要求，可用于進