基于化學(xué)振蕩的酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)胰島素.pdf

1、胰島素可以通過(guò)其免疫特異性，與被堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體結(jié)合成免疫復(fù)合物，發(fā)生酶聯(lián)免疫反應(yīng)，堿性磷酸酶是一種水解酶，它可以催化磷酸單酯類化合物進(jìn)行水解，而磷酸單酯水解產(chǎn)物又可以被化學(xué)振蕩檢測(cè)。本論文的設(shè)計(jì)思路可以通過(guò)找到一種本身對(duì)化學(xué)振蕩沒(méi)有影響，但是其堿性磷酸酶催化的水解產(chǎn)物卻可以直接擾動(dòng)化學(xué)振蕩，堿性磷酸酶又可以發(fā)生酶聯(lián)免疫反應(yīng)，所以用化學(xué)振蕩去檢測(cè)酶聯(lián)免疫的生成物。
　　本論文提出建立一種新型的微量的B-Z振蕩體系來(lái)檢測(cè)酶聯(lián)免疫

2、分析中的胰島素濃度。不同濃度的胰島素與被堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)，利用此免疫生成物上的堿性磷酸酶，催化一定濃度的維生素C磷酸酯鈉溶液發(fā)生水解反應(yīng)，反應(yīng)生成的維生素C可以直接用新型的微量的B-Z振蕩體系進(jìn)行測(cè)定，在特定條件下，不同濃度的堿性磷酸酶催化生成的維生素C的量不同，從而引起微量的B-Z振蕩體系的振幅或周期的改變量不同，根據(jù)化學(xué)振蕩的這種參數(shù)的改變量就可以對(duì)酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的胰島素進(jìn)行濃度測(cè)定。
　　建立一種新型的微

3、量的蘋(píng)果酸體系的B-Z化學(xué)振蕩，通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)其微量體系中的各組分濃度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，當(dāng)這種微量的蘋(píng)果酸體系的B-Z化學(xué)振蕩的個(gè)組分濃度為：[H2SO4]=1.05mol/L，[NaBrO3]=0.60 mol/L,[[CuL](ClO4)2]=2.21*10-3mol/L，[DL-蘋(píng)果酸]=0.6mol/L時(shí)，維生素C對(duì)體系的擾動(dòng)最大。當(dāng)維生素C的濃度在0.5*10-9～1*10-7mol/L范圍內(nèi)，此振蕩周期的該變量與log[VC]

4、呈良好的線性關(guān)系，檢出限為3.15*10-10mol/L(3δ)，最低檢測(cè)量為7.875*10-17mol；加入維生素C后第一個(gè)電極電勢(shì)的最高值與log[VC]呈良好的線性關(guān)系，檢出限為3.95*10-10mol/L(3δ)，最低檢測(cè)量為9.875*10-17mol。微量蘋(píng)果酸體系的B-Z化學(xué)振蕩對(duì)堿性磷酸酶的測(cè)定：當(dāng)堿性磷酸酶的活度在1～16U/L范圍內(nèi)時(shí)，振蕩振幅的該變量與log[ALP]呈良好的線性關(guān)系，檢出限為0.59U/L(3

5、δ)，最低檢測(cè)量為1.475*10-7U；振蕩周期的該變量與log[ALP]也呈線性關(guān)系，檢出限為0.56U/L(3δ)，最低檢測(cè)量為1.40*10-7U。
　　建立一種新型的微量的葡萄糖-丙酮體系的B-Z化學(xué)振蕩檢測(cè)體系，并且對(duì)其組分的各濃度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，當(dāng)體系中各組分的濃度分別為：[H2SO4]=1.05mol/L，[葡萄糖]=0.06mol/L，[丙酮]=0.65mol/L，[[CuL](ClO4)2]=0.05mol

6、/L，[NaBrO3]=0.08mol/L，維生素C對(duì)振蕩的擾動(dòng)最大。當(dāng)維生素C的濃度在0.5*10-9～1*10-7mol/L范圍內(nèi)時(shí),振蕩振幅的該變量與log[VC]呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為2.6*10-10mol/L(3δ)，最低檢測(cè)量為6.5*10-16mol；振蕩周期的該變量與log[VC]呈良好的線性關(guān)系與，最低檢測(cè)限為2.7*10-10mol/L，最低檢測(cè)量為6.75*10-17mol。用微量葡萄糖-丙酮體系的B-Z

7、化學(xué)振蕩對(duì)堿性磷酸酶進(jìn)行定量分析，當(dāng)酶活度在1～32U/L時(shí)，振蕩振幅的該變量與log[ALP]呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為0.57U/L，最低檢測(cè)量為1.425*10-7U。
　　將不同濃度的胰島素與被堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體直接進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)，用上述兩種微量的B-Z振蕩體系對(duì)其進(jìn)行定量分析，最后實(shí)現(xiàn)對(duì)胰島素的測(cè)定。結(jié)果表明，當(dāng)胰島素在0.5*10-9～1*10-7g/L范圍內(nèi)時(shí)，用蘋(píng)果酸體系的微量B-Z化學(xué)振蕩對(duì)胰島素進(jìn)項(xiàng)檢測(cè)

8、，振蕩振幅的該變量與log[ISN]呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為2.35*10-10gl/L(3δ)，最低檢測(cè)量為5.875*10-17g；用葡萄糖-丙酮體系的B-Z化學(xué)振蕩檢測(cè)時(shí)，振蕩振幅的該變量與log[ISN]呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為1.85*10-10g/L(3δ)，最低檢測(cè)量為4.625*10-17g。
　　不同濃度的胰島素通過(guò)親和素-生物素與被堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)，通過(guò)這兩種微量的B-Z化學(xué)振蕩

9、對(duì)其免疫生物進(jìn)行測(cè)定，實(shí)現(xiàn)對(duì)胰島素的定量檢測(cè)。結(jié)果表明，當(dāng)胰島素在0.5*10-9～1*10-7g/L范圍內(nèi)時(shí)，用蘋(píng)果酸體系的B-Z化學(xué)振蕩檢測(cè)胰島素時(shí)，振蕩振幅的該變量與log[ISN]呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為2.00*10-10g/L(3δ)，最低檢測(cè)量為5.0*10-17g；用葡萄糖-丙酮體系的B-Z化學(xué)振蕩檢測(cè)胰島素時(shí)，振蕩振幅的改變量與log[ISN]呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為1.90*10-10g/L(3δ)，最低

10、檢測(cè)量為4.75*10-17g。
　　本論文的意義，首先是建立了兩種不同體系的微量（總體積為1ml）B-Z化學(xué)振蕩，這樣就比常量將常量(總體積為40ml)的B-Z振蕩檢測(cè)的靈敏度提高了40倍，這就為微量物質(zhì)的檢測(cè)擴(kuò)展了范圍；其次，本論文采用微量的B-Z化學(xué)振蕩對(duì)酶聯(lián)免疫分析中胰島素進(jìn)行定量分析，形成一種新的檢測(cè)免疫產(chǎn)物的方法，這將為酶聯(lián)免疫分析技術(shù)注入了一股新的力量；最后，這種新型的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法不僅可以對(duì)胰島素的濃度進(jìn)行，而且