OATP1B1 521T＞C基因多態(tài)性與血脂異常的相關(guān)性研究.pdf

1、血脂是血漿中所含的脂肪類物質(zhì),主要成分包括總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、磷脂及游離脂肪酸等。血脂異常主要是指血中 TC、TG 和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的升高以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的降低。已有的證據(jù)表明,血清 TC、TG 及LDL-C 水平過(guò)高、HDL-C 水平過(guò)低等血脂異常在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展中起重要作用。大量的流行病學(xué)研究顯示血中 TC、TG 以及 LDL-C 和HDL-C 水平與冠心病的發(fā)病關(guān)系密

2、切。美國(guó)Framingham研究證實(shí) LDL-C 升高與冠心病發(fā)病呈正相關(guān),HDL-C 升高則與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)。越來(lái)越多的資料顯示,血中 TG、LDL-C 水平升高和HDL-C 水平的降低,對(duì)冠心病發(fā)病危險(xiǎn)有協(xié)同作用,同一水平的HDL-C 和LDL-C 所表現(xiàn)的冠心病危險(xiǎn),取決于血清 TG 水平的高低。病理研究顯示,脂質(zhì)在血管壁的積聚是動(dòng)脈粥樣硬化的重要病理基礎(chǔ),而且脂質(zhì)的含量多少與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性關(guān)系密切。脂質(zhì)含量多、炎性

3、細(xì)胞浸潤(rùn)明顯、纖維成分少的斑塊穩(wěn)定性較差,容易發(fā)生破裂,引起急性心肌缺血、梗塞和猝死。臨床上可以見(jiàn)到隨著血脂異常的改善,不穩(wěn)定性心絞痛、急性心肌梗死等冠狀動(dòng)脈事件的發(fā)生率,以及對(duì)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)及冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)的需求都有明顯的減少。通過(guò)藥物或非藥物的方法對(duì)血脂水平進(jìn)行干預(yù),可顯著地降低冠心病發(fā)病和死亡的危險(xiǎn)。
　　 血脂異常與遺傳、飲食、生活習(xí)慣等因素有關(guān),其中遺傳因素的影響越來(lái)越引起人們的重視

4、。研究血脂異常的遺傳易感基因?qū)τ陂_(kāi)展針對(duì)性的人群預(yù)防,延緩或防止血脂異常的發(fā)生具有重要的意義。隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展及人類基因組計(jì)劃的進(jìn)行,尋找血脂異常易感基因并從基因水平闡明血脂異常發(fā)病機(jī)制成為醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。早在1985年,諾貝爾獎(jiǎng)獲得者 Goldstein 和Brown發(fā)現(xiàn)了 LDL 受體基因突變而導(dǎo)致的家族性高膽固醇血癥。后來(lái)多種載脂蛋白和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、膽固醇 7α-羥化酶等的基因多態(tài)性與血脂異常的相關(guān)性陸續(xù)被報(bào)道,而有機(jī)

5、陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽 1B1(organic anion transporting polypeptide1B1,OATP1B1)基因多態(tài)性與血脂異常是否具有相關(guān)性尚少報(bào)道。
　　 OATP 是攝入型轉(zhuǎn)運(yùn)體中的一大類,隸屬于溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體超家族(superfamilyof solute carriers,SLC),對(duì)于內(nèi)、外源性物質(zhì),尤其是藥物的吸收、分布、消除具有重要影響,其編碼基因統(tǒng)稱為SLCO基因。OATP家族成員轉(zhuǎn)運(yùn)的底物廣泛而具

6、有重疊性,即某種底物通?？赏ㄟ^(guò)一種以上的轉(zhuǎn)運(yùn)體進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。除膽汁酸等內(nèi)源性物質(zhì)外,OATP 轉(zhuǎn)運(yùn)體還參與多種外源性物質(zhì)和藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)。尤其是OATP1B1 作用最為重要,它們特異性表達(dá)于人肝細(xì)胞基底外側(cè)膜上,可從門(mén)脈系統(tǒng)吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)多種內(nèi)源性物質(zhì)和藥物進(jìn)入肝細(xì)胞進(jìn)而代謝和清除,包括膽紅素、膽汁酸、甲狀腺激素、白三烯、前列腺素、硫酸鹽和葡萄糖醛酸結(jié)合產(chǎn)物、肽類、甲氨蝶呤、瑞格列奈和他汀類藥物。
　　 人類 OATP1B1 基因定位于 1

7、2 號(hào)染色體短臂21區(qū)2帶,全長(zhǎng)10.86kb,包括15個(gè)外顯子和14個(gè)內(nèi)含子,其編碼基因SLCO1B1的cDNA 包含 2073 個(gè)堿基,編碼 691 個(gè)氨基酸,存在 20 個(gè)以上的功能遺傳多態(tài)性。近年來(lái),SLCO1B1基因上已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP),其中有些SNP已經(jīng)在體外或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中證實(shí)與轉(zhuǎn)運(yùn)功能異常有關(guān),研究多集中在388A>G和521T>C 兩個(gè)位點(diǎn)的突變。
　　 在 OATP1B1 轉(zhuǎn)運(yùn)的眾多底物中,膽

8、紅素、膽汁酸、甲狀腺素等均與血脂異常的發(fā)病相關(guān)。膽紅素能干擾膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn),降低血脂,卵磷脂膽固醇酯酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)在 HDL的膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中起重要作用,而有文獻(xiàn)報(bào)道低膽紅素水平可致 LCAT 活性減弱,從而推斷出膽紅素能影響體內(nèi)血脂代謝；膽汁酸是膽固醇在肝臟中代謝的產(chǎn)物,肝內(nèi)膽固醇的主要去路是通過(guò)肝細(xì)胞合成膽汁酸,同時(shí)膽汁酸進(jìn)入膽汁排泄后,又促進(jìn)膽固醇的有效乳化,形成混合微團(tuán),幫助消化吸收,因此,膽汁酸的合成與分泌的質(zhì)和量都對(duì)膽

9、固醇在體內(nèi)的含量有明顯影響,且與脂類代謝密切相關(guān)；甲狀腺素能刺激脂蛋白脂肪酶受體活性,甲減時(shí)其清除率下降,血清 LDL 顆粒的清除被延遲,LDL 水平即升高,血清 TC 水平亦隨之升高,所以甲減常合并血脂異常；綜上所述,OATP1B1 轉(zhuǎn)運(yùn)的部分內(nèi)源性底物均參與了血脂的調(diào)節(jié),從功能意義上可考慮 OATP1B1 與血脂異常的發(fā)病機(jī)制相關(guān),推測(cè) OATP1B1521T>C 基因和血脂異常的易感性可能存在聯(lián)系。而且人們?cè)趯?duì)健康志愿者的研究顯示

10、 OATP1B1521T>C 增加膽固醇的合成率,推測(cè)OATP1B1 基因多態(tài)性與高膽固醇血癥具有相關(guān)性。有研究表明,OATP1B1 中分布較低的c.521CC 基因型(在白種人中占2-5％)比 c.521TT 基因型更能增加人體內(nèi)普伐他汀、瑞舒伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀的血藥濃度,已有大量的研究證明了 OATP1B1 對(duì)他汀類藥物的藥代動(dòng)力學(xué)的影響,但很少研究了解OATP1B1 基因多態(tài)性是否對(duì)血脂的發(fā)生產(chǎn)生影響,本研究采用實(shí)時(shí)熒光

11、定量Taqman MGB 探針?lè)▽?duì) 321 名血脂異?；颊吆?59 名正常對(duì)照者進(jìn)行了OATP1B1521T>C 基因的基因分型研究,試圖尋找 OATP1B1521T>C 基因突變型在兩者間可能的不同分布,從而初步尋找 OATP1B1521T>C 基因的遺傳多態(tài)性與血脂異常間可能存在的關(guān)聯(lián)性,從基因角度來(lái)了解血脂異常的發(fā)病機(jī)制,為尋找血脂異常的易感基因建立一定的臨床證據(jù)。
　　 目的
　　 探討 OATP1B1521T>

12、C基因多態(tài)性與血脂異常的發(fā)病是否存在相關(guān)性。
　　 對(duì)象及方法
　　 對(duì)象
　　 所有研究對(duì)象均來(lái)自廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院2008年10月至2009年6月心血管內(nèi)科的住院病人及體檢中心的體檢人群。入選標(biāo)準(zhǔn):1、血脂異常組:a 符合血脂異常診斷標(biāo)準(zhǔn),即禁食 12 小時(shí)后測(cè)血清 TC≥5.72mmol/L 或LDL-C≥3.36mmol/L 或者 TG≥1.70mmol/L,或者 HDL-C≤0.9 mmol/L,血脂中

13、 TG、TC、LDL-C、HDL-C 至少2個(gè)或2個(gè)以上指標(biāo)異常才被入選；b 肝腎功能正常；c 無(wú)煙酒嗜好；d 無(wú)糖尿病等內(nèi)分泌代謝疾病以及其它嚴(yán)重的全身性疾病。2、對(duì)照組:各項(xiàng)血脂指標(biāo)正常、血尿常規(guī)、凝血功能、胸部X光及血生化、心電圖等檢查正常,無(wú)肝腎疾病,無(wú)煙酒嗜好,無(wú)糖尿病等內(nèi)分泌代謝疾病及其它嚴(yán)重的全身性疾病。兩組研究對(duì)象近期均無(wú)服用任何降脂藥物,女性近期無(wú)使用鈣劑及圍絕經(jīng)期激素替代治療。本實(shí)驗(yàn)共抽取1500份血標(biāo)本,經(jīng)篩選符合

14、納入標(biāo)準(zhǔn)的共有580份,其中血脂異常組321例,男162例,女159例,年齡53.54±12.06歲；對(duì)照組 259 例,男 111 例,女 148 例,年齡 52.63±11.68歲。對(duì)所有對(duì)象均詢問(wèn)病史、吸煙史、酗酒史、體檢、實(shí)驗(yàn)室檢查及輔助檢查。兩組性別構(gòu)成、年齡具有可比性,血脂異常組及對(duì)照組所有研究對(duì)象均為漢族,研究個(gè)體間無(wú)血緣關(guān)系。
　　 方法
　　 實(shí)驗(yàn)對(duì)象空腹12小時(shí)以上,取靜脈血采用標(biāo)準(zhǔn)酶比色法測(cè)定TC、

15、TG、LDL-C和HDL-C,用免疫濁度法測(cè)定載脂蛋白 Al(apoAl)和載脂蛋白B(apoB)及脂蛋白(a)。另取 5ml 靜脈血置于 EDTA-K2抗凝管按人血液 DNA 提取試劑盒操作步驟提取白細(xì)胞基因組 DNA,所提 DNA 采用 Rotor-Gene Q 6000 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR儀檢測(cè),運(yùn)用核酸擴(kuò)增結(jié)合雙色熒光標(biāo)記的TaqMan MGB 探針來(lái)檢測(cè)OATP1B1521T>C 位點(diǎn)的基因型。采用卡方檢驗(yàn)對(duì)血脂異常組和對(duì)照

16、組OATP1B1521T>C 基因型及等位基因分布頻率進(jìn)行比較,再用方差分析分別分析兩組中 OATP1B1521T>C 基因多態(tài)性同TC、TG、LDL-C、HDL-C 各個(gè)血脂水平間的關(guān)系,最后用 Logistic 回歸分析對(duì)影響血脂異常的相關(guān)因素進(jìn)行回歸分析,P<0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論
　　 1.漢族人群中可檢測(cè)到OATP1B1521T>C 基因型:TT 野生型、TC 雜合突變型和CC 純合突變型共三種