經(jīng)典型瞬時感受器電位通道在鼻息肉中的作用及機制研究.pdf

1、鼻息肉(nasal polyps)是上呼吸道常見疾病，發(fā)病率約為1-2％。現(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)鼻息肉的病理生理基礎是重度鼻粘膜組織水腫和慢性炎癥反應，但其具體機制至今仍未闡明。
　　 近年來人們發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)鈣離子在免疫細胞的活化、增殖、分泌細胞因子和脫顆粒反應等功能中起關鍵作用，但是其具體調(diào)節(jié)機制尚未清楚。經(jīng)典型瞬時感受器電位（canonical transient receptor potential，TRPC）通道是果蠅TRP蛋白的

2、哺乳動物同系物。TRPC通道能被IP3激活而產(chǎn)生持續(xù)的鈣內(nèi)流。研究發(fā)現(xiàn)TRPC通道表達于中性粒細胞、嗜酸性細胞和T淋巴細胞等免疫細胞，介導免疫細胞鈣庫操縱性鈣內(nèi)流機制;而在TRPC6敲基因鼠研究發(fā)現(xiàn)TRPC6的缺失減少了由卵清蛋白激發(fā)的支氣管嗜酸性細胞數(shù)量。然而TRPC通道在鼻息肉發(fā)生發(fā)展中的的作用及分子機制尚未深入研究。因此我們提出如下假說:鼻息肉組織中TRPC通道以TRPC5通道表達增高為主，高表達的TRPC5通道可能通過激活NF-

3、κB信號轉(zhuǎn)導通路增加嗜酸性粒細胞浸潤和致炎介質(zhì)的增加，從而在鼻息肉的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。
　　 目的:
　　 1.觀察鼻息肉組織中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道家族表達情況;
　　 2.探討經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道與鼻息肉嗜酸性粒細胞浸潤和炎癥反應的關系;
　　 3.探討經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道與核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的關系。
　　 方法:
　　 1.鼻息肉患者的入選及標本收集:從201

4、1年5月至2011年12月在山東大學齊魯醫(yī)院耳鼻咽喉科隨機收集行息肉切除術患者58例和接受鼻中隔偏曲矯正術的患者的下鼻甲黏膜35例做正常對照。
　　 2.應用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(real time RT-PCR)檢測鼻息肉患者組織中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道m(xù)RNA表達水平。
　　 3.應用病理組織學和免疫組織化學技術檢測鼻息肉組織標本中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道的分布和嗜酸性粒細胞數(shù)量，分析它們之間的關系。

5、
　　 4.應用蛋白免疫印跡（Western Blot）技術檢測鼻息肉患者組織中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道的蛋白表達、炎癥因子IL-6和核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB表達，分析他們之間的關系。
　　 結果:
　　 2.1一般臨床資料分析
　　 鼻息肉患者和鼻中隔偏曲患者在年齡和性別方面無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 2.2 TRPC通道m(xù)RNA和蛋白表達水平
　　 鼻息肉組織中TRPC5通道m(xù)

6、RNA表達水平明顯高于正常對照組(P＜0.05)，其他成員表達變化不明顯。鼻息肉組織TRPC5通道蛋白表達水平明顯高于對照組（P＜0.05）。
　　 2.3鼻息肉組織中嗜酸性粒細胞數(shù)量
　　 嗜酸性粒細胞在HE染色成明顯的嗜伊紅特性，顯示為胞漿內(nèi)呈反光強的鮮紅色。鼻息肉組織中嗜酸性粒細胞數(shù)量明顯高于正常鼻甲粘膜(P＜0.01)。
　　 2.4鼻息肉組織IL-6的蛋白表達水平
　　 鼻息肉患者IL-6蛋白表

7、達水平明顯高于正常鼻甲粘膜(P＜0.05)。免疫組化顯示鼻息肉組織中IL-6蛋白陽性產(chǎn)物主要位于細胞漿和細胞間質(zhì)，陽性區(qū)域所占面積也明顯增高（P＜0.05）。
　　 2.5鼻息肉組織NF-κB的蛋白表達水平
　　 Western blot結果顯示:鼻息肉組織NF-κB的非活性形式p65表達量與正常鼻甲粘膜無顯著差別(P＞0.05)，但是NF-κB的活性形式磷酸化水平的p65(p-p65)表達量比正常鼻黏膜顯著增高(P＜0

8、.05)。
　　 2.6 TRPC通道表達量與鼻息肉組織中各項指標的相關分析
　　 鼻息肉組織中TRPC5通道表達水平與嗜酸性粒細胞數(shù)量、致炎因子IL-6表達量和NF-κB的活性形式p-p65表達量成正相關(P＜0.01)。
　　 結論:
　　 1.鼻息肉組織中TRPC5通道表達增高;
　　 2.高表達的TRPC5通道可能通過激活NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路增加嗜酸性粒細胞浸潤和IL-6的表達，從而在鼻