硼替佐米單用或聯(lián)合其他化療藥物對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株KM3細(xì)胞的影響體外實驗研究.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤(MM)是漿細(xì)胞克隆性惡性增殖性疾病，主要特點是瘤細(xì)胞在骨髓中惡性增生、浸潤并合成大量單克隆免疫球蛋白，而正常免疫球蛋白受抑制，臨床上出現(xiàn)骨骼病變、感染、出血、貧血以及腎功能損害、高粘滯綜合癥等。雖然傳統(tǒng)化療及后續(xù)的自體造血干細(xì)胞移植使部分患者能夠取得一定的療效，達(dá)到此次治療的平臺期或獲得緩解，但不強(qiáng)調(diào)緩解的程度，疾病最終復(fù)發(fā)或者耐藥，不被治愈。泛素-蛋白酶體通路(UPP)是真核細(xì)胞中蛋白質(zhì)降解的重要途徑，阻斷UPP通路是近

2、年來對腫瘤靶向治療的熱點之一。蛋白酶體抑制劑硼替佐米(Bortezomib)，商品名萬珂(Velcade)，是一種合成的高選擇性26S硼酸鹽蛋白酶體抑制劑，可作用于包括MM在內(nèi)的多種人腫瘤細(xì)胞系。已有臨床研究報道，硼替佐米+地塞米松、硼替佐米+地塞米松+脂質(zhì)體阿霉素治療MM患者，獲得較高的緩解率，完全緩解(CR)率及接近完全緩解(nCR)率高達(dá)30％以上，提高了緩解和患者的生活質(zhì)量。目前，有關(guān)硼替佐米治療復(fù)發(fā)性、難治性MM的報道較多，而

3、其基礎(chǔ)研究的結(jié)果較少。本文旨在研究在體外實驗條件下，單用硼替佐米及其聯(lián)用地塞米松、柔紅霉素，尤其聯(lián)用三氧化二砷、對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株KM3細(xì)胞增殖的影響，并初步探討其作用機(jī)理，冀為該藥的臨床應(yīng)用提供較翔實，有一定新意的，可靠的實驗依據(jù)，從而為臨床設(shè)計新的治療方案拓寬思路。 采用MTT比色法檢測結(jié)果顯示，硼替佐米、三氧化二砷、地塞米松、柔紅霉素對KM3細(xì)胞生長的抑制作用均呈濃度依賴性，與空白對照組相比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義。硼替佐米

4、、三氧化二砷、地塞米松、對KM3細(xì)胞生長的抑制作用呈時間依賴性。當(dāng)藥物溶度為0.1μmol/L時，抑制率達(dá)18.61％，藥物溶度為5.O μmol/L時，抑制率達(dá)80.87％。硼替佐米的IC50為0.27 μmol幾，僅次于柔紅霉素(0.16 μmol/L)，而明顯地低于地塞米松(8.01μmol/L)及三氧化二砷(3.10 μmol/L)。本研究結(jié)果證實，硼替佐米對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞具很強(qiáng)的抑制作用。此外，與地塞米松比較，三氧化二砷的抑

5、制作用更強(qiáng)，值得臨床醫(yī)務(wù)人員注意。 在本研究中，與單用硼替佐米比較，聯(lián)用柔紅霉素時對KM3細(xì)胞的抑制率明顯地提高(13.18±1.29％vs 46.93±5.33％)。與聯(lián)用地塞米松或三氧化二砷比較，硼替佐米與地塞米松和三氧化二砷共同處理處理細(xì)胞72小時，抑制率明顯地提高(34.51±0.51％ vs 23.80±O．78％；34.51±0.51％ vs 25.39±0.90％)。硼替佐米與柔紅霉素聯(lián)用對KM3細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)

6、。提示，硼替佐米與柔紅霉素有明顯的協(xié)同，可能與硼替佐米的增敏作用有關(guān)。這些結(jié)果值得設(shè)計臨床治療方案時，加以考慮。 為探討硼替佐米的作用機(jī)制，在本研究中，采用光學(xué)顯微鏡及透視電鏡觀察硼替佐米作用前后KM3細(xì)胞的形態(tài)變化。結(jié)果顯示，經(jīng)過硼替佐米處理后KM3細(xì)胞表現(xiàn)為典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征，如胞漿空泡化，細(xì)胞體積縮小，核染色質(zhì)固縮和碎裂，核邊集，胞膜皺縮，凋亡小體形成等。 為了對細(xì)胞凋亡現(xiàn)象進(jìn)行準(zhǔn)確地定性或定量分析，采用了瓊

7、脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞分析技術(shù)研究細(xì)胞DNA含量及磷脂酰絲氨酸(PS)轉(zhuǎn)位。結(jié)果顯示，0.25 μmol/L硼替佐米作用KM3細(xì)胞24h，見到典型的梯形條帶。一定濃度(0.125μmol/L-O．25 μ mol/L)硼替佐米具有誘導(dǎo)KM3細(xì)胞凋亡的作用。 為了探討硼替佐米引起凋亡的機(jī)制，采用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測線粒體跨膜電位。結(jié)果顯示，一定濃度(0.125 μmol/L-0.5μmol/L)硼替佐米能引起KM3細(xì)胞線粒體跨膜電

8、位下降。 小結(jié): (1)硼替佐米、三氧化砷、地塞米松、柔紅霉素對塒細(xì)胞株KM3細(xì)胞均有抑制增殖的作用，呈濃度和時間依賴性。IC50值在硼替佐米、三氧化砷、地塞米松、柔紅霉素分別為0.27 μmol/L、3.10μmol/L、8.01 μmol/L、0.1 6μmol/L。表明，硼替佐米對MM細(xì)胞增殖的抑制作用，僅次于柔紅霉素；三氧化砷的抑制作用比地塞米松的強(qiáng)。 (2)與單用硼替佐米比較，聯(lián)用柔紅霉素時，在不同時間

9、點，對細(xì)胞的抑制率均為最高。 (3)當(dāng)與地塞米松及三氧化二砷共同處理細(xì)胞時，在不同時間點的抑制率均呈高于僅聯(lián)用地塞米松。提示，在目前臨床常采用的VD(硼替佐米、地塞米松)治療方案中，加用三氧化二砷，可能有助于療效提高。 (4)0.125 μmol/L-0.25 μmol/L硼替佐米處理一定時間后可明顯地誘導(dǎo)KM3細(xì)胞凋亡，呈濃度依賴性。其與其他藥物聯(lián)用有不同的協(xié)同作用。凋亡率在硼替佐米與地塞米松和三氧化二砷時高于在硼替佐