巨噬細胞極化與弓形蟲感染相關(guān)性的研究.pdf

1、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）簡稱弓形蟲，它是一種專性細胞內(nèi)寄生原蟲，幾乎可感染所有的恒溫動物。弓形蟲病是全世界范圍內(nèi)感染最為普遍的人獸共患寄生蟲病之一。弓形蟲的生活史較為復(fù)雜，可寄生宿主眾多，造成確診困難，嚴重威脅了人類及畜牧業(yè)的發(fā)展。作為機體抵抗病原的第一道屏障，巨噬細胞在防御過程中是最容易受到感染的細胞之一，也是弓形蟲急性感染中在全身散播的主要載體細胞，同時也為弓形蟲的繁殖提供了有利場所，而弓形蟲與巨噬細胞之間相

2、互作用的研究是揭示弓形蟲感染、傳播和致病機制的重要基礎(chǔ)。同時巨噬細胞又是重要的免疫細胞，弓形蟲感染后對巨噬細胞極化產(chǎn)生什么樣的影響，以及巨噬細胞極化對弓形蟲增殖有何影響，這個問題的闡明無疑對進一步防控和治療弓形蟲病提供理論依據(jù)。本實驗以小鼠骨髓來源的巨噬細胞為研究對象，通過用 M-CSF體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細胞分化為巨噬細胞后，分別用LPS+IFN-γ和IL-4刺激靜息狀態(tài)的巨噬細胞向M1型和M2型極化，并通過半定量PCR、western

3、blot和FCM檢測極化相關(guān)的標記分子表達水平，同時利用Griess法和精氨酸酶活性試驗檢測iNOS和Arginase-1兩種酶的活性，建立小鼠骨髓來源巨噬細胞的體外極化模型。結(jié)果顯示，LPS+IFN-γ刺激的巨噬細胞 M1型相關(guān)基因在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平均顯著上調(diào)表達，而 IL-4刺激的巨噬細胞M2相關(guān)基因均顯著高表達?；跇O化模型的成功建立，一方面研究體外小鼠巨噬細胞在弓形蟲感染后極化的方向以及參與極化的信號通路活化狀態(tài)。弓形蟲感染巨

4、噬細胞后0h、6h、12h、24 h、36 h、48 h收集細胞和上清，Griess法和精氨酸酶活性試驗檢測iNOS和Arginase-1兩種酶的活性，以及通過real-time PCR、western blot和FCM檢測不同時間點極化相關(guān)基因表達的動態(tài)變化，結(jié)果表明，弓形蟲感染后巨噬細胞具有高水平的精氨酸酶活性，而iNOS的酶活性沒有明顯變化，核酸和蛋白水平證明M2型標記分子顯著高表達，而部分M1型標記分子只在核酸水平有短暫上調(diào)，蛋

5、白水平?jīng)]有顯著變化。進一步通過 western blot分析極化相關(guān)的 JAK-STAT、Akt-mTOR信號通路的激活狀態(tài)，結(jié)果表明弓形蟲感染后激活了JAK-STAT6和Akt-mTOR信號通路。以上結(jié)果表明弓形蟲感染后能夠誘導(dǎo)巨噬細胞向M2型極化。另一方面為了評價M1、M2對弓形蟲感染和增殖的影響，通過免疫熒光試驗和western blot測定弓形蟲的感染和增殖情況，結(jié)果表明，不同亞型巨噬細胞對弓形蟲感染沒有顯著影響，但M1型巨噬細