T細胞非霍奇金淋巴瘤6號染色體長臂雜合性缺失的研究.pdf

1、T細胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)是一種相對少見的淋巴瘤，在歐美人群的發(fā)生率約占10％-15％，在亞洲人群中發(fā)生率稍高，達到30％。T-NHL是一種異質(zhì)性的惡性淋巴腫瘤，目前國內(nèi)外對T-NHL的病理形態(tài)學、免疫學或細胞分子遺傳學特征的研究，以及臨床治療研究都十分有限。 人類腫瘤的發(fā)病是一個多步驟多基因異常積累的過程，包括原癌基因的激活、抑癌基因的失活。目前已知人類腫瘤基因或基因組的不穩(wěn)定性有多種形式，其中有二種類型研究較多：微衛(wèi)

2、星不穩(wěn)定性(MSI)，主要以DNA錯配修復(fù)基因缺陷為主；另一種為雜合性缺失(LOH)，主要以腫瘤抑制基因(TSGs)失活為主。LOH是指細胞有絲分裂異常導致一個與突變基因相對應(yīng)的正常等位基因丟失。表現(xiàn)為一個位點兩條等位基因中任一條的丟失。現(xiàn)代研究表明LOH是人類腫瘤發(fā)生過程中導致抑癌基因失活的主要機制之一，LOH分析常用于在染色體基因排列的遺傳圖譜中標識出假定的或已知的TSGs。 6號染色體長臂(6q)LOH在許多實體腫瘤中已有

3、報道，如卵巢癌、胸腺癌、惡性黑色素瘤、腎細胞癌、小細胞肺癌、前列腺癌和甲狀旁腺腺瘤等腫瘤中均有6q的缺失，而在T-NHL中的報道相對較少。為此，我們檢測48例T-NHL6q14-26上12個高度多態(tài)性微衛(wèi)星標記物的LOH情況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系，確定與T-NHL相關(guān)的6q上的最小缺失區(qū)(RMDs)，為進一步尋找與T-NHL發(fā)病相關(guān)的抑癌基因提供有意義的信息，以求進一步闡明T-NHL發(fā)病的分子學機制。 本研究獲浙江省科技

4、廳科學研究基金和衛(wèi)生廳科學研究基金資助腫瘤的發(fā)展是多步驟多基因異常積累的過程，T-NHL的發(fā)生發(fā)展同樣也需要多種機制的參與，這些機制可以相互相關(guān)，也可相互獨立存在。P53和Ki67是傳統(tǒng)認為與T-NHL發(fā)生發(fā)展有關(guān)的兩種蛋白，ZAP-70是參與T細胞信號轉(zhuǎn)導途徑的非常重要的酪氨酸蛋白激酶(PTK)家族成員之一，目前研究發(fā)現(xiàn)其在不成熟的正常B細胞和部分B細胞淋巴瘤中也有表達，不同淋巴細胞中此種蛋白表達的差異成為研究的一個熱點，ZAP-70

5、蛋白在T-NHL中是否完全表達還需進一步探索，故本研究運用免疫組織化學(IHC)方法檢測48例T-NHL中ZAP-70、P53以及Ki67蛋白表達水平變化，并分析與T-NHL發(fā)生發(fā)展可能有關(guān)的這些蛋白的異常表達及6qLOH之間是否存在一定的相關(guān)性，以求更深入地探索T-NHL發(fā)病的多個復(fù)雜機制及這些機制的相關(guān)性。 材料與方法: 1.材料收集 1997-2005年間該醫(yī)學院附屬醫(yī)院及省內(nèi)其他醫(yī)院病理科初步診斷為T細胞

6、淋巴瘤的48例病例以及相對應(yīng)的正常對照組織48例；其中男35例，女13例，平均年齡50歲。全部標本經(jīng)中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，常規(guī)HE染色，免疫組織化學標記確定腫瘤的免疫表型，根據(jù)2001年WHO診斷標準，對所有T細胞淋巴瘤進行分類，同時參照1992年Keil標準進行組織學分類，低度惡性組15例，高度惡性組33例。 2.方法 (1)免疫組織化學方法檢測T細胞淋巴瘤中CD3，CD4，CD8，Bcl-2，CD20，CD

7、45RO，LMP-1，CD30的表達，確定腫瘤的免疫表型。 (2)常規(guī)蛋白酶K-酚氯仿法提取腫瘤組織和正常對照組織DNA。 (3)選取6q14-26區(qū)段上的12個多態(tài)性微衛(wèi)星標記，行聚合酶鏈式反應(yīng)—單鏈長度多態(tài)性(PCR-SSLP)分析，選取信息性樣本比較腫瘤組織和正常對照組織等位基因條帶的光密度值變化，以檢測LOH的發(fā)生，確定發(fā)生缺失的最小重疊區(qū)段，同時分析6qLOH與腫瘤樣本臨床病理特征的關(guān)系。 (4)選擇2

8、個可能與T細胞淋巴瘤發(fā)病相關(guān)的基因(ZAP-70，P53)以及一個能反映細胞增5殖活性的標記物Ki67，運用免疫組織化學方法檢測這3種蛋白在T細胞淋巴瘤中的表達水平變化，并分析3種蛋白之間以及各蛋白與6qLOH的相關(guān)性。 (5)統(tǒng)計學處理：實驗結(jié)果均使用SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計學分析，行x2檢驗和(或)Fisher's精確概率法檢驗，t檢驗以及Spearman's相關(guān)性分析。 結(jié)論: 1.6qLOH與T-NH

9、L的惡性程度及EBV感染情況在統(tǒng)計學上有一定的相關(guān)性。 2.6q21-22和6q25區(qū)段可能存在一個或者多個候選腫瘤抑制基因，這些抑癌基因的失活可能在T-NHL的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。 3.ZAP-70蛋白表達的缺失作為一種異常的T細胞免疫受體表型對于惡性T細胞淋巴瘤的診斷具有一定的輔助作用。 4.P53、Ki67與T-NHL的惡性進展呈正相關(guān)，且兩個指標之間存在相關(guān)性。 5.P53與6qLOH之間存在