睪丸支持細(xì)胞對(duì)大鼠原位肝移植術(shù)后急性排斥的抑制作用.pdf

1、目的(1)簡(jiǎn)化、改進(jìn)睪丸支持細(xì)胞(Sertolicell)的分離方法，減少分離細(xì)胞的制作成本、提高細(xì)胞的純度。(2)改良制作大鼠原位肝移植模型的方法，減少術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，提高生存率；建立穩(wěn)定的肝移植急性排斥模型。(3)通過(guò)不同途徑行Sertoli細(xì)胞—肝臟聯(lián)合移植，探討Sertoli細(xì)胞是否可為移植肝提供免疫保護(hù)。 方法(1)Sertoli細(xì)胞分離中省去以剪刀剪碎、DNAS消化、39℃下培養(yǎng)等程序，以200目網(wǎng)過(guò)濾，2步消化后

2、直接進(jìn)入37℃培養(yǎng)。(2)采用“二袖套管法”，通過(guò)建立Wistar→Wistar或SD→SD大鼠肝移植模型熟練建立大鼠肝移植模型的技能，對(duì)術(shù)前用藥、麻醉、術(shù)中操作等細(xì)節(jié)加以改進(jìn)。對(duì)照研究Wistar→SD、SD→Wistar、Wistar→Wistar配對(duì)組合的肝移植術(shù)后排斥反應(yīng)，選取排斥反應(yīng)強(qiáng)烈、穩(wěn)定的組合建立排斥反應(yīng)模型。(3)以肝移植急性排斥模型Wistar→SD不干預(yù)組(A組n=14)為對(duì)照組，通過(guò)三種途徑進(jìn)行Sertoli細(xì)胞

3、—肝臟聯(lián)合移植，分別為：受體術(shù)后腹腔注射組(B組n=14)、陰莖背靜脈注射組(C組n=14)及供體移植前門靜脈注射組(D組n=14)。分別觀察術(shù)后各組癥狀、體征、肝功能變化、移植肝病理特征等的變化。(4)供體門靜脈注射Sertoli細(xì)胞，為使細(xì)胞在肝內(nèi)有效嵌存，采用注射后門靜脈、肝上下腔靜脈阻斷15min，分別檢測(cè)阻斷前及阻斷后24h、7d肝功能變化(n=14)。(5)采用免疫組化、凋亡等技術(shù)檢測(cè)Sertoli細(xì)胞功能及作用，探討其對(duì)肝

4、移植急性排斥的影響。(6)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用均數(shù)、方差分析、T檢驗(yàn)等方法。 結(jié)果(1)簡(jiǎn)化的細(xì)胞分離方法可保證細(xì)胞活率、純度、產(chǎn)量及功能，縮短細(xì)胞分離的時(shí)間，降低細(xì)胞分離的制作成本。(2)后期制作的肝移植模型Wistar→Wistar或SD→SD長(zhǎng)期存活率達(dá)90％以上，幾乎無(wú)排斥反應(yīng)。肝移植急排模型以Wistar→SD組排斥最強(qiáng)烈。(3)肝移植急排模型Wistar→SD不干預(yù)組14只，13只在14d內(nèi)死亡，1只存活超過(guò)14d。Ser

5、toli細(xì)胞腹腔注射組、陰莖背靜脈注射組和供體移植前門靜脈注射組分別有5、8、7只存活超過(guò)14d。各干預(yù)組存活率分別為：35.7％、57.1％、50.0％，與對(duì)照組(7.1％)比較：后兩組有顯著性差異(P＜0.05)，腹腔注射組差別不顯著(P＞0.05)；各干預(yù)組之間存活率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。供肝病理檢查顯示各干預(yù)組排斥反應(yīng)較對(duì)照組輕。(4)門靜脈注射Sertoli細(xì)胞后，門靜脈、肝上下腔靜脈阻斷15min，阻斷前及阻斷后

6、24h、7d肝功能無(wú)明顯改變(P＞0.05)。(5)免疫組化及凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肝移植后14d，Sertoli細(xì)胞仍存活并表達(dá)FasL，Sertoli細(xì)胞周圍有淋巴細(xì)胞集聚及凋亡的淋巴細(xì)胞。 結(jié)論(1)修改、簡(jiǎn)化的Sertoli細(xì)胞分離、培養(yǎng)方法有效、周期短、創(chuàng)傷小、制作成本低、獲得的細(xì)胞功能良好。(2)Wistar→SD肝移植模型具有強(qiáng)烈、穩(wěn)定的急性排斥反應(yīng)特征，可用于相關(guān)研究。(3)門靜脈注射Sertoli細(xì)胞后，門靜脈、肝上下腔