超大劑量氯沙坦對于大鼠單側輸尿管梗阻模型的腎保護作用.pdf

1、[背景與目的] 腎間質纖維化是慢性進展性腎病的重要組織學表現(xiàn)，是導致終末期腎功能衰竭的最終共同通道。近年來，隨著對腎間質纖維化研究的不斷深入，認為腎間質纖維化是一個獨立于病因之外的進展過程，涉及到腎小管上皮細胞和間質細胞的損傷、炎癥介質和細胞因子的產生、炎癥細胞的浸潤、成纖維細胞的增殖、細胞外基質的增多等一系列相互關聯(lián)的過程。眾多促纖維化因子通過激活炎癥反應和改變細胞表型造成損傷，主要包括：(1)小管細胞外基質蛋白的表達增加；(

2、2)單核巨噬細胞的激活；(3)小管上皮細胞向間充質細胞的轉分化。其中最為關鍵的是TGF-β及其下游生長因子CTGF。氯沙坦是一種血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體拮抗劑(ARB)，對AT1受體具有高度選擇性，在受體水平特異性地拮抗循環(huán)或局部組織的AngⅡ。氯沙坦能降低體循環(huán)和腎小球毛細血管內壓力、改善高血壓的血流動力學，減少血流剪切力(SS)引起的TGF-β表達增強，減少AngⅡ介導的TGF-β生成增加，減少腎組織中巨噬細胞和單核細胞的浸潤，

3、減少ECM的沉積等，延緩腎間質纖維化，改善炎癥狀態(tài)。ARB通過降低腎小球毛細血管跨膜壓及直接減小毛細血管內皮的窗孔降低濾過膜的通透性，從而減輕尿蛋白致腎間質纖維化的作用也已非常明確。在以往的臨床研究和動物實驗中已觀察到ARB直接對炎癥細胞和細胞因子的影響，這是該類藥物具有抗炎和抗纖維化的重要作用途徑。由于ARB的上述作用，包括氯沙坦在內的許多ARB所做的動物實驗和臨床試驗均表明了較好的降壓降蛋白尿效果，部分延緩腎臟疾病的進展，顯示腎保護

4、作用。而且其中一些實驗顯示ARB的作用和劑量有關，探討腎保護的合適劑量及常規(guī)劑量和大劑量ARB的作用差異的機制成為當前腎臟病學研究的熱點。為此，本實驗以單側輸尿管梗阻(UUO)大鼠模型為研究對象，初步探討超大劑量氯沙坦能否優(yōu)于常規(guī)劑量，起到更多的腎臟保護作用。 [方法]選擇清潔級健康雄性Sprague-Dawl ey大鼠63只，體重180～200g，隨機分為4組：假手術組9只、UUO組18只、常規(guī)劑量氯沙坦組(50mg/kg/d

5、)(L50)18只、超大劑量氯沙坦組(500mg/kg/d)(L500)18只。麻醉后打開腹腔，雙結扎左側輸尿管；假手術組大鼠只打開腹腔不結扎輸尿管。各藥物治療組均于術后第三天開始用相應藥物等量灌胃。假手術組和UUO組以等量生理鹽水灌胃。術后第7、14和21天測鼠尾動脈血壓，處死前一天單只置于代謝籠內收集24h尿液。假手術組殺3只大鼠，其余組各殺6只。取左側部分腎組織于4％多聚甲醛固定，石蠟包埋；其余腎組織液氮冷凍，-80℃保存，待行R

6、T-PCR。24小時尿蛋白(UalbV)采用全自動生化儀測定。鼠尾袖帶血壓(TCP)采用RBP-1B測壓系統(tǒng)，測量大鼠在安靜、清醒狀態(tài)下的尾動脈壓，測定3次，取其平均值。石蠟切片行HE、Masson和PAS染色，動態(tài)觀察腎臟病理學變化，評定各組大鼠腎小管損害百分比、腎間質纖維化程度。免疫熒光染色法測定腎間質中巨噬細胞數(shù)的變化，應用圖像分析系統(tǒng)進行定量分析結果。逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測腎臟轉化生長因子(TGF)-β1 mRN

7、A的變化。應用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。 [結論] 1．UUO大鼠腎間質炎性細胞浸潤，腎小管擴張、萎縮、壞死，腎間質相對面積增寬，腎間質纖維化；血壓增高，尿蛋白增多，TGF-β1mRNA表達顯著增強，單核巨噬細胞數(shù)增多。 2．氯沙坦能有效降低UUO大鼠血壓、減輕蛋白尿，隨著梗阻時間的延長，超大劑量治療組較常規(guī)劑量能更顯著降低蛋白尿。 3．兩氯沙坦治療組通過抑制大鼠單側輸尿管梗阻后