TRAIL誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、我們實(shí)驗(yàn)室在以往研究中,采用差減雜交的方法,分析了人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat經(jīng)rsTRAIL處理前后細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的變化,發(fā)現(xiàn)erbin的mRNA表達(dá)水平顯著降低.Erbin,是LAP(LRR和PDZ)家族的新成員,其分子中包括氨基端的16個(gè)富含亮氨酸的重復(fù)序列以及羧基端的PDZ(最早在PSD-95/SAP、Discs-large、Zo-1蛋白中被發(fā)現(xiàn),故用三個(gè)蛋白質(zhì)開頭字母縮寫表示)結(jié)構(gòu)域,這兩種結(jié)構(gòu)域均可與其它蛋白結(jié)合.E

2、rbin最早是作為ErbB<,2>結(jié)合蛋白被發(fā)現(xiàn),隨后又找到了一些Erbin的結(jié)合蛋白,如緊密連接成分p0071,δ-catenin和ARCVS,以及半橋粒成分β<,4>-integrin和類天皰瘡抗原1等.Erbin在細(xì)胞內(nèi)還扮演許多重要的角色.在PC12細(xì)胞中,Erbin的LRR結(jié)構(gòu)域選擇性地與突變激活的Ras結(jié)合,從而阻斷其與Raf-1的聯(lián)系,導(dǎo)致這條信號(hào)通路被抑制.因此,Erbin不僅能定位受體和傳遞細(xì)胞刺激信號(hào),而且參與建立并

3、維持細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基底膜之間的粘合.進(jìn)一步研究Erbin在信號(hào)通路中的作用對(duì)于我們理解細(xì)胞的體內(nèi)平衡及癌變有重要的意義.本研究以對(duì)TRAIL敏感和不敏感的乳腺癌細(xì)胞株(MDA-MB-231和MCF-7)為模型,比較其敏感性不同的分子機(jī)制,分析MCF-7細(xì)胞的耐藥機(jī)理.為了研究Erbin在rsTRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中的作用及其和ErbB<,2>的關(guān)系,我們分析了rottlerin和rsTRAIL聯(lián)合作用對(duì)Erbin和ErbB<,2>

4、表達(dá)的影響,結(jié)果顯示rottlerin本身就能下調(diào)Erbin和ErbB<,2>的表達(dá).相反,抑制Mek1/2或PI3K對(duì)于Erbin和ErbB<,2>的表達(dá)沒有影響.為了進(jìn)一步研究這兩個(gè)因子間的關(guān)系,我們采用RNAi技術(shù),分別抑制這兩個(gè)基因的表達(dá),結(jié)果顯示抑制Erbin和ErbB<,2>后都能增加MCF-7細(xì)胞對(duì)TRAIL的敏感性,并且抑制Erbin后能夠下調(diào)ErbB<,2>,Erbin的PDZ結(jié)構(gòu)域過表達(dá)能夠增加ErbB<,2>蛋白的