噬菌體肽庫(kù)中乳腺癌腫瘤抗原的篩選.pdf

1、目的：為獲得新的乳腺癌腫瘤抗原，用乳腺癌患者血清抗體對(duì)噬菌體隨機(jī)12 肽庫(kù) 進(jìn)行篩選，以期獲得能夠模擬乳腺癌腫瘤抗原并能與乳腺癌患者血清抗體特異結(jié)合的活性小肽。 方法：利用乳腺癌患者血清抗體對(duì)噬菌體隨機(jī)12 肽庫(kù)進(jìn)行液相Bio-panning，篩選能與乳腺癌患者血清抗體特異性結(jié)合的小肽(P)。將編碼小肽的DNA 片段克隆到表達(dá)載體Pgex-4T-1 中。經(jīng)大腸桿菌BL21 表達(dá)GST-P 融合蛋白。擴(kuò)大血清樣本例數(shù)，行

2、ELISA檢測(cè)融合蛋白與乳腺癌血清抗體結(jié)合的特異性。用融合蛋白免疫BALB/c 小鼠，制備抗GST-P 的小鼠抗血清。利用親和吸附技術(shù)，除去多抗血清中抗GST 成分增強(qiáng)其抗小肽的特異性后行免疫組織化學(xué)檢查，初步了解小肽在乳腺惡性腫瘤組織的表達(dá)情況。利用生物信息學(xué)技術(shù)，尋找與小肽同源性最高的人源蛋白及其他相關(guān)蛋白，并通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)初步檢測(cè)其同源蛋白在乳腺癌組織的表達(dá)情況。 結(jié)果：從噬菌體隨機(jī)12 肽庫(kù)中篩得3 例與乳腺癌患

3、者血清結(jié)合活性較高的小肽P3、P4 和P15。構(gòu)建并表達(dá)純化了相應(yīng)的融合蛋白GST-P3、GST-P4 和GST-P15。ELISA檢測(cè)顯示融合蛋白GST-P3、GST-P4 和GST-P15 與乳腺癌患者血清抗體的結(jié)合活性整體較強(qiáng)。制備抗GST-P3、抗GST-P4 和抗GST-P15 的小鼠抗血清，去除非特異抗體成份后，通過(guò)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)小肽P3、P4 和P15 在乳腺癌組織的表達(dá)水平較高。用BLAST在線分析軟件從Gen

4、Bank 中得到與小肽P3、P4 和P15 同源性較高的蛋白CDC27、PTPN22 和HCV。設(shè)計(jì)合成了cdc27 片段的引物，利用RT-PCR 技術(shù)初步證實(shí)了cdc27在乳腺癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織。 結(jié)論：從噬菌體隨機(jī)12 肽庫(kù)中獲得了與乳腺癌患者血清抗體結(jié)合活性較強(qiáng)的小肽P3、P4 和P15。3 例小肽在乳腺惡性組織中的表達(dá)水平較高。這一結(jié)果為尋找新的乳腺癌腫瘤抗原奠定了基礎(chǔ)。小肽P3 的同源蛋白CDC27 在乳腺癌