小檗堿與梓醇及其配伍改善胰島素抵抗的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀(guān)察比較小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)胰島素抵抗（IR）脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取和利用的影響，對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖與分化以及這一過(guò)程中對(duì)PPARγmRNA表達(dá)及脂質(zhì)積聚的影響，從藥效學(xué)及藥理學(xué)途徑初步探討千金黃連丸方劑配伍的科學(xué)內(nèi)涵，以及中藥與PPARγ激活劑改善IR的異同性。
　　 方法：
　　 第一部分、小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)IR 3T3-L1脂肪細(xì)胞的影響。
　　 采用地塞米松（1mM）誘導(dǎo)IR脂肪細(xì)胞模型，將IR

2、脂肪細(xì)胞分為模型組及藥物干預(yù)組（分別給與羅格列酮、小檗堿、梓醇、小檗堿＋梓醇進(jìn)行干預(yù)），另設(shè)正常脂肪細(xì)胞對(duì)照組。在含或不含10nmol/L胰島素條件下干預(yù)48h，以葡萄糖氧化酶法檢測(cè)培養(yǎng)液中葡萄糖消耗量，以2-脫氧-3H-D-葡萄糖攝入法觀(guān)察葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)率。
　　 第二部分、小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響。
　　 1.小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響培養(yǎng)3T3-L1前脂

3、肪細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到70%融合時(shí)，將其分為羅格列酮、小檗堿、梓醇、小檗堿＋梓醇干預(yù)組，另設(shè)空白對(duì)照組，采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）方法檢測(cè)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖。
　　 2.小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞糖代謝和分化的影響 培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)分化，將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為羅格列酮、小檗堿、梓醇、小檗堿＋梓醇干預(yù)組，另設(shè)空白對(duì)照組，以葡萄糖氧化酶法檢測(cè)藥物干預(yù)后培養(yǎng)液中葡萄糖消耗量，并以油紅O染

4、色檢測(cè)細(xì)胞分化過(guò)程中胞漿脂質(zhì)的堆積，以RT-PCR檢測(cè)這一過(guò)程中PPARγmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分、小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)IR 3T3-L1脂肪細(xì)胞的影響。
　　 1.小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)IR 3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗的影響。含或不含10nmol/L胰島素條件下，藥物處理48小時(shí)后，IR模型組葡萄糖的消耗較正常對(duì)照組顯著減少（P<0.01）；與模型組比，羅格列酮、小檗堿、梓醇及其配伍

5、組葡萄糖消耗量增加（P<0.05，P<0.01），其中，羅格列酮組在含胰島素條件下葡萄糖消耗較不含胰島素條件下顯著增高，而各中藥組作用有無(wú)胰島素的存在條件下均極顯著增高。此外，小檗堿+梓醇組效應(yīng)優(yōu)于小檗堿、梓醇單藥組（P<0.01）。
　　 2.小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)IR 3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。含或不含10nmol/L胰島素條件下，藥物處理48小時(shí)后，IR模型組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)率較正常對(duì)照組顯著降低（P<0.01）；與

6、模型組比，羅格列酮、小檗堿、梓醇及其配伍組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)率增加（P<0.01），其中，羅格列酮組在含胰島素條件下葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)較不含胰島素條件下顯著增高，而在含或不含胰島素條件下，小檗堿、梓醇及其配伍干預(yù)后葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)都得到顯著提高（P<0.01），小檗堿+梓醇組效應(yīng)優(yōu)于小檗堿、梓醇單藥組（P<0.01）。
　　 第二部分、小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響。
　　 1.小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)3T3-L1

7、前脂肪細(xì)胞增殖的影響。與空白對(duì)照組比較，小檗堿組前脂肪細(xì)胞MTT值增加（P<0.05），而小檗堿加梓醇組、梓醇組、羅格列酮組均無(wú)差異。
　　 2.小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞糖代謝和分化的影響。小檗堿，梓醇及其配伍組均能顯著增加成熟脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗（P<0.01）；小檗堿組及配伍組處理脂肪細(xì)胞胞漿脂質(zhì)堆積明顯低于空白對(duì)照組（P<0.01），而羅格列酮組細(xì)胞胞漿脂質(zhì)堆積明顯高于空白對(duì)照組（P<0.01），梓醇組

8、與空白對(duì)照組無(wú)差異。
　　 3.小檗堿與梓醇及其配伍對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARγmRNA的表達(dá)的影響。與空白對(duì)照組相比，羅格列酮組脂肪細(xì)胞PPARγmRNA表達(dá)增多（P<0.01），小檗堿組及小檗堿+梓醇組PPARγmRNA表達(dá)減少（P<0.05，P<0.01），梓醇組與空白對(duì)照組無(wú)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.小檗堿、梓醇及其配伍均能增加IR脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗和轉(zhuǎn)運(yùn)，其作用不依賴(lài)胰島素的存在，提示上述中