蘇云金芽孢桿菌WB9的研究.pdf

1、V7 7 4 9 4 0分類號(hào)：S 4 8 2 ．2 9 2密級(jí)：福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文單位代碼：1 0 3 8 9學(xué) 號(hào)：B 0 0 l 5 0 3蘇云金芽孢桿菌W B 9 的研究學(xué)科專業(yè)：研究方向：研究生：指導(dǎo)教師：完成時(shí)間：農(nóng)藥學(xué)檄生物農(nóng)藥黃志鵬關(guān) 雄 教授二o o 五年四月福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文摘 要本文對(duì)土壤中分離的蘇云金芽孢桿菌W B 9 菌株的生理生化特性、小菜蛾和甜菜夜蛾的致病力測(cè)定、編碼活性因子的基因分析、殺蟲蛋白

2、基因的克隆和表達(dá)、工業(yè)培養(yǎng)基的室內(nèi)搖瓶?jī)?yōu)化篩選以及茶尺蠖的室內(nèi)外防治試驗(yàn)等進(jìn)行了較為系統(tǒng)深入的研究。采用醋酸鈉法加熱處理和抗生素的分離方法，對(duì)收集自武夷山自然保護(hù)區(qū)非耕作區(qū)的2 0 0 個(gè)土壤樣品進(jìn)行了分離，得到1 2 株蘇云金芽孢桿菌菌株，出菌率為6 ．0 ％。對(duì)W B 9 菌株的室內(nèi)致病力測(cè)定結(jié)果表明其對(duì)小菜蛾具有高致病力、對(duì)甜菜夜蛾具有較高的致病力。以庫(kù)斯塔克亞種的8 0 1 0 和8 3 1 l 菌株以及鲇澤亞種的N o ．1

3、菌株為對(duì)照，對(duì)新分離的W B 5 、W B 7 和W B 9 菌株的1 2 項(xiàng)經(jīng)典生理生化指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)定。測(cè)定結(jié)果顯示W(wǎng) B 9 和W B 5 分別與庫(kù)斯塔克亞種8 0 1 0 和鲇澤亞種N o ．1 的生理生化反應(yīng)特性表現(xiàn)相同，僅在個(gè)別反應(yīng)上有強(qiáng)弱差異。由此推測(cè)，W B 9 和W B 5 可能分屬庫(kù)斯塔克亞種和鲇澤亞種。采用P C R 及P C R - R F L P 技術(shù)對(duì)W B 9 的I C P 、V I P 、幾丁質(zhì)酶和腸毒素4

4、 種活性因子的編碼基因進(jìn)行了分析。結(jié)果表明：該菌株含有編碼I C P 蛋白的e r y l A a 、c r y l A b 、c r y l C b 、c r y l F a 和c r y l G a 5 個(gè)c r y l 基因型，編碼V i p 3 A 蛋白的v i p 3 A基因以及編碼3 種腸毒素的肋n 、b e e T 和e n t S 基因，不含編碼幾丁質(zhì)酶的基因。將v i p 3 A 、h b l A 、b e e T 和

5、e n t S 基因的P C R 產(chǎn)物回收純化后直接測(cè)序，利用在線的B l a s t 軟件進(jìn)行同源性分析，前兩個(gè)基因片段的核苷酸序列與蘇云金芽孢桿菌已公布基因序列的相應(yīng)片段同源性分別為9 9 ％和9 6 —9 8 ％，b e e T 基因片段與蠟質(zhì)芽孢桿菌已公布基因序列的相應(yīng)片段同源性為9 7 ％，e n t S 基因片段與蘇云金芽孢桿菌和蠟質(zhì)芽孢桿菌已公布基因序列的相應(yīng)片段同源性為9 4 —9 9 ％。設(shè)計(jì)可擴(kuò)增出e r y l A