膠體金免疫層析法及其在氯霉素快速檢測中的初步研究.pdf

1、膠體金免疫層析試紙條（Colloidal Gold Immunochromatographic Strips）檢測法是利用抗原和抗體的特異性結合反應對微量抗原或抗體進行測定的方法。本文以食品中禁用的抗生素----氯霉素（CAP）為檢測對象，主要開展了以下工作：
　　 (1)采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金（Colloidal Gold），根據(jù)檸檬酸三鈉加入量的不同，考察加熱不同時間對膠體金制備的影響，并通過分光光度法、激光粒度儀法

2、，透射電鏡法對合成的膠體金進行質量鑒定。并以粒徑大小作為考察因素，對分光光度法、激光粒度儀法、透射電鏡法進行比較。
　　 (2)采用體內誘生腹水法生產了氯霉素單克隆抗體，并通過蛋白G親和層析柱對單抗進行純化，然后通過蛋白經(jīng)驗公式OD280/1.35對單抗含量進行初步測定，接著通過間接競爭ELISA法對單抗效價進行測定以及活性進行鑒定，最后建立了間接競爭ELISA法測定CAP的標準曲線。
　　 (3)采用分光光度法確定膠體

3、金和氯霉素單抗偶聯(lián)的最適pH 值以及單抗的最小加入量，并通過高速離心法對偶聯(lián)物進行純化，接著通過分光光度法，激光粒度儀法，透射電鏡法對偶聯(lián)物的粒徑大小，分布情況進行表征，最后通過間接競爭ELISA法和試紙條法對偶聯(lián)物活性進行鑒定。
　　 (4)采用EDC法將琥珀氯霉素和BSA 進行偶聯(lián)，通過分光光度法進行偶聯(lián)率的測定，并通過間接競爭ELISA法對偶聯(lián)物的活性進行鑒定。
　　 (5)對試紙條所用溶液以及試紙條耗材進行篩選和

4、處理，將各部件組裝成試紙條，對陰性樣品和陽性樣品（10ng/mL CAP）進行檢測。
　　 通過以上研究獲得以下結果：
　　 (1)檸檬酸三鈉加入量1.0mL時，最優(yōu)加熱時間為15min；檸檬酸三鈉加入量1.5mL時，最優(yōu)加熱時間為12min；檸檬酸三鈉加入量為4.0mL時，最優(yōu)加熱時間為9min。
　　 (2)通過體內誘生腹水法共生產氯霉素單抗約6.147mg，根據(jù)蛋白含量的高低，把單抗分裝成兩管，低濃度管單抗

5、效價1：3000，IC50為0.368ppb，檢出限為0.047ppb；高濃度單抗效價1：50000，IC50為0.426ppb，檢出限為0.055ppb。
　　 (3)膠體金和氯霉素單抗偶聯(lián)的最適pH 值為8.0，200uL 膠體金對應的最小蛋白含量為1.92ug。偶聯(lián)物粒徑比膠體金大，并具有生物活性。
　　 (4)CBSA/CCAP=34.4，即每個BSA分子上連接了34.4個氯霉素分子，偶聯(lián)物具有活性，包被抗原用于