瘢痕疙瘩1號染色體短臂微衛(wèi)星雜合性缺失的研究分析及精細作圖.pdf

1、[目的]
　　 大量的遺傳流行病學研究和分子遺傳學研究均表明，瘢痕疙瘩的形成與遺傳具有非常密切的關系。尋找瘢痕疙瘩的相關調(diào)控基因已成為當前瘢痕研究的熱點之一。因此深入研究以期從基因水平闡明瘢痕疙瘩的發(fā)病機制，篩選出瘢痕疙瘩形成或抑制的相關調(diào)控基因，為臨床研究和指導臨床治療提供線索和依據(jù)顯得十分必要。既往研究顯示，1號染色體的短臂末端匯集了許多與細胞生長、增殖、分化相關的基因，已有大量報道在許多腫瘤中該區(qū)存在缺失，其缺失頻率位于3

2、6％～80％之間。本課題組在前期研究中應用比較基因組雜交(comparativegenomic hybridization，CGH)分析結果示瘢痕疙瘩1號染色體短臂存在DNA拷貝數(shù)高頻率缺失。隨后進一步尋找1號染色體短臂末端存在的瘢痕疙瘩相關調(diào)控基因示1pter-36.21區(qū)域的D1S243-D1S468-D1S507為瘢痕疙瘩的LOH缺失區(qū)域。且D1S507位點出現(xiàn)高頻率缺失，提示該處存在與瘢痕疙瘩相關的單個或多個抑制基因。DNA測序

3、(DNA sequencing)技術是一種最為精確的分子診斷技術，在遺傳性疾病和腫瘤的診斷領域內(nèi)占有重要地位，目前主要應用于鑒定基因、檢測突變、分析噬菌體文庫等方面。因此，本研究在對1號染色體短臂末端缺失最明顯的區(qū)域(D1S468-D1S507區(qū)域)作微衛(wèi)星雜合性缺失的分析及DNA序列測定，以探索瘢痕疙瘩相關基因DNA序列的變化，篩選出瘢痕疙瘩形成相關的調(diào)控基因，進一步精確繪制圖譜及分析將可能找出潛在的瘢痕抑制基因(scarsuppre

4、ssor gene，SSG)的丟失區(qū)域，從基因水平闡明瘢痕疙瘩的發(fā)病機制，為最終揭開瘢痕疙瘩形成的奧秘，尋求瘢痕疙瘩最有效的防治方法打下堅實的基礎。
　　 [方法]
　　 在經(jīng)瘢痕疙瘩染色體變異頻率圖譜和微衛(wèi)星多態(tài)分析證實的DNA拷貝數(shù)高頻率缺失的1號染色體短臂末端區(qū)域(D1S468-D1S507區(qū)域)，選取最大雜合度為65％以上的微衛(wèi)星標記13個：D1S468、D1S2845、D1S2660、D1S2633、D1S26

5、42、D1S2663、D1S2694、D1S508、D1S450、D1S2736、D1S2667、D1S228、D1S507。收集6例患者瘢痕疙瘩組織和血液標本，分別抽提出相應基因組DNA，進行PCR擴增。瓊脂糖凝膠電泳分離PCR產(chǎn)物，回收純化后進行基因組DNA測序，以軟件DNAStar、GeneScan、Genotyper分析，將瘢痕疙瘩組織的DNA序列分別與血液和Genebank的對應序列進行比較、分析各微衛(wèi)星位點的LOH情況。

6、r>　　 [結果]
　　 研究顯示，所選取的13個微衛(wèi)星標記位點在血液標本中均未發(fā)現(xiàn)突變。而瘢痕疙瘩組織經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)有多個LOH，而且是多位點、多類型的。D1S2845和D1S450的突變率均為83.3％(5/6)，其次為D1S2663，突變率為66.6％(4/6)。D1S468、D1S2660、D1S2633、D1S2667、D1S507的突變率均為50％，突變率最低的為D1S2694和D1S2736為33.3％。其中D1

7、S2642、D1S508、D1S228的統(tǒng)計數(shù)據(jù)P>0.05，沒有統(tǒng)計學意義。
　　 [結論]
　　 瘢痕疙瘩組織選取的13個微衛(wèi)星位點中均發(fā)生不同程度的雜合性缺失，有10個發(fā)生突變，其中D1S2845和D1S450發(fā)生高頻突變，以AC堿基缺失及G/A轉(zhuǎn)換為主。D1S2845中移碼突變占60％，點突變占40％。D1S450中移碼突變占43.4％，點突變占56.6％，堿基突變導致瘢痕疙瘩的形成，提示D1S2845和D1S4