重組腺相關病毒介導klotho基因轉導對2型糖尿病大鼠腎臟肥大及纖維化的作用和機制.pdf

1、目的:觀察重組腺相關病毒(rAAV)介導的克老素(KL)基因表達對2型糖尿病(T2DM)大鼠腎臟肥大及纖維化的影響及機制。
　　 方法:采用高脂飲食STZ誘導2型糖尿病SD大鼠模型，用腺相關病毒構建重組小鼠全長klotho(mKL) cDNA(rAAV.mKL)及GFP空質粒報告基因(rAAV.GFP)，將雄性SD大鼠隨機分為4組，隨機選3組建立T2DM大鼠模型，分別經尾靜脈注射rAAV.mKL(T2DM-mKL組)、rAAV.

2、GFP（T2DM-GFP組）和PBS(T2DM-PBS組)，正常對照組SD大鼠注射PBS(SD-PBS組)，實驗12周后處死動物，收集血液及組織標本。腎臟冰凍切片檢測GFP蛋白表達，稱取雙側腎重及體重計算腎肥大指數(KHI)，PAS染色、Masson染色觀察腎臟肥大、膠原纖維表達及病理變化，RT-PCR檢測腎臟mKL、ROCKI基因表達情況，ELISA檢測血清KL蛋白表達量，免疫組化分析腎臟KL蛋白、纖連蛋白(FN)及波形蛋白(VIM)

3、表達情況，Western blot檢測ROCKI蛋白活性。
　　 結果:(1) T2DM-mKL組和T2DM-GFP組大鼠腎臟均有強烈GFP熒光蛋白表達;(2)與T2DM-PBS組相比，T2DM-mKL組大鼠腎臟有小鼠KL基因特異性表達，且血清及腎臟KL蛋白表達顯著增加;(3) T2DM-PBS組腎肥大指數顯著高于T2DM-mKL組;(4)T2DM-mKL組腎臟腎小球體積及總腎小球細胞數較T2DM-PBS組顯著減少;(5) T2

4、DM-mKL組腎臟系膜區(qū)及腎小管間質區(qū)膠原纖維表達較T2DM-PBS組顯著降低;(6)T2DM-mKL組腎臟病理改變較T2DM-PBS組明顯減輕;(7)T2DM-mKL組腎臟FN及VIM蛋白表達較T2DM-PBS組顯著減少;(8)與T2DM-PBS組相比，T2DM-mKL組ROCKI基因表達及蛋白活性明顯降低。
　　 結論:rAAV.mKL轉染可顯著增加T2DM大鼠腎臟KL基因的表達，且KL基因表達上調能延緩糖尿病腎肥大及纖維化