廣西部分家養(yǎng)反芻動物EHD血清學(xué)及傳播媒介的調(diào)查與病原分離鑒定.pdf

1、鹿流行性出血熱(epizootic hemorrhagic disease，EHD)是由呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬鹿流行性出血熱病毒(EHDV)引起的一種蟲媒病毒病。廣泛分布于熱帶和溫帶地區(qū)。
　　本研究采用針對EHDV群特異性抗原VP7蛋白設(shè)計的競爭ELISA(C-ELISA)抗體檢測試劑盒在廣西境內(nèi)開展牛、羊反芻動物EHDV血清學(xué)調(diào)查。通過對廣西8個縣區(qū)217份山羊血清，313份黃牛血清進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)廣西境內(nèi)家養(yǎng)反芻動物普遍存

2、在EHDV感染，總陽性率達到36.2％(192/530)，其中，黃牛的血清陽性率高達55％(172/313)，明顯高于山羊(9.2％;20/217)。廣西家養(yǎng)反芻動物EHDV感染具有地域差異和海拔高度的差異，表現(xiàn)為桂南地區(qū)明顯高于桂北地區(qū);平原地區(qū)＞丘陵地區(qū)＞山地地區(qū)。
　　為了解廣西地區(qū)EHDV傳播媒介庫蠓的種類及優(yōu)勢群體，在血清學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上選擇低海拔、高濕度、適宜媒介昆蟲繁殖、EHDV血清學(xué)陽性率高且牛羊密集的廣西馬山縣設(shè)立

3、牛羊蟲媒病監(jiān)控點，在蚊蟲活躍的八月底連續(xù)三天捕獲媒介庫蠓進行形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果在所鑒定的326只庫蠓中，以邊緣庫蠓(33.1％)和尖喙庫蠓(27.3％)為優(yōu)勢庫蠓。
　　通過在監(jiān)控點篩選EHDV抗體陰性的10頭牛和5只山羊作為哨兵動物，分別混養(yǎng)在EHDV抗體陽性的牛群及羊群中，采用白天放牧，夜間趕回欄舍的方式飼養(yǎng)。1～4月每月采血一次，5～12月每周采血一次，采用C-ELISA試劑盒監(jiān)測其抗體轉(zhuǎn)陽情況，取哨兵動物EHDV

4、抗體轉(zhuǎn)陽時間點及前、后兩周的肝素鈉抗凝血紅細胞，采用直接接種BHK-21細胞及先在C6/36細胞傳一代后再接BHK-21細胞兩種方法同時分離EHDV。以RT-PCR、病毒中和試驗等對分離株進行鑒定，結(jié)果在3頭哨兵牛抗體轉(zhuǎn)陽時間前后共8份血樣中分離到3株病毒，TCID50分別為10-2.5/0.1mL，10-2.83/0.1 mL，10-2.5/0.1 mL，經(jīng)血清型鑒定均為EHDV-5型。這是首次在廣西牛群中分離到EHDV，說明廣西反芻