大麥根尖和邊緣細(xì)胞鋁毒生物學(xué)特性及其機(jī)理研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文大麥根尖和邊緣細(xì)胞鋁毒生物學(xué)特性及其機(jī)理研究姓名：潘建偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：朱睦元2002.5.1不可逆的過程。通過基因工程方法導(dǎo)入凋亡抑制基因是作物抗逆性遺傳改良的一條新策略，也是細(xì)胞凋亡研究成果的具體應(yīng)用，目前國內(nèi)仍未見正式報道。本研究試圖通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將凋亡抑制基因ced09導(dǎo)入煙草，獲得高耐鋁性的轉(zhuǎn)基因植株。結(jié)果表明，利用pGEM一7z“)載體上的SacI和XbaI位點(diǎn)，將pBS載體上的

2、ced9基因成功地克隆到表達(dá)載體pBIl21(含CaMV35S)上，定名為pBIted一9。通過農(nóng)桿菌感染煙草葉盤，經(jīng)篩選、誘導(dǎo)和分化后，共獲得96株再生植株(To)。經(jīng)PCR檢測和Southern雜交表明，目的基因ced9已整合到煙草基因組中。有關(guān)轉(zhuǎn)基因植株的ced9表達(dá)活性及其對生長發(fā)育的影響、耐鋁性鑒定將在Tl、T2、T3代進(jìn)行。根邊緣細(xì)胞(BC)研究是最近幾年植物學(xué)和遺傳學(xué)的新領(lǐng)域之一。本實(shí)驗(yàn)表明，大麥CVHang981BC發(fā)育

3、啟動與根發(fā)育幾乎同步，這與豆科植物BC發(fā)育不同。在懸空氣培中，大麥BC發(fā)育屬于非組成型表達(dá)的過程。在水培中，每個根每天仍釋放300350個BC，屬于組成型表達(dá)過程。根冠PME活性檢測表明，大麥BC發(fā)育與PME活性具有密切的相關(guān)性，PME活性在BC游離過程中起著重要作用。溫度對大麥根伸長有明顯的抑制作用，但對BC發(fā)育影響不大。鋁毒對離體收集的BC活性影響非常明顯。大麥耐鋁品種CVHumai16的BC經(jīng)20和501tmoI／LAI處理后，其

4、活性無顯著性差異，而敏感品種CV20002的BC活性卻受到顯著抑制，說明BC的耐鋁性與其個體植株水平的耐鋁性相一致。到目前為止，國內(nèi)外有關(guān)鋁毒對植物BC發(fā)育的影響仍未見正式報道。本實(shí)驗(yàn)表明，鋁毒對大麥BC發(fā)育有明顯的抑制作用。20“m01／LAI對cv20002的BC發(fā)育有顯著性抑制(PO05)，但對CVHumai16的BC發(fā)育的影響不大。50umol／LAl對這兩個品種的BC發(fā)育均有顯著性抑制(P(Ooi)。PME活性檢測表明，鋁毒很