殺松材線蟲海洋細菌的分離、鑒定及其活性物質的分析.pdf

1、松材線蟲[Bursaphelenchus xylophilus(Steiner&Buhrer) Nickle]是危害松屬植物的重要病原物。尋找具有殺線活性的微生物并對其活性代謝產物進行研究，是開發(fā)效果好、毒性低和環(huán)境相容性好的微生物源殺線蟲劑的一條重要途徑。為篩選對松材線蟲具有較強殺線活性的海洋細菌，本文對采自于青島近海海域的樣品進行細菌分離，得到49株細菌，以松材線蟲為靶標線蟲，采用浸漬法對這些菌株的培養(yǎng)液進行殺線蟲活性測定，從中篩選

2、出5株具有較高殺線活性的海洋細菌，這5株細菌的培養(yǎng)上清液對松材線蟲處理24 h后校正死亡率均高于80％。
　　結合形態(tài)學觀察、生理生化特征測定以及16S rDNA序列分析結果，將5個菌株分別鑒定為海假交替單胞菌（Pseudoalteromonas marina）、產黑假交替單胞菌(P.nigrifaciens)、Vibrio atlanticus、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)和印度芽孢桿菌（B.i

3、ndicus）。采用單因素法分析菌株H-42、S-16和G-23的最佳培養(yǎng)條件，結果表明，3個菌株產殺線活性物質的最適起始pH分別為7.0、6.0和8.0，最適培養(yǎng)溫度分別為15℃、20℃和25℃;3個菌株的最適接種體菌齡、培養(yǎng)時間和培養(yǎng)基海水濃度分別為19 h、3d和100％。對菌株H-42和S-16的殺線活性物質組分的研究表明，兩株細菌的培養(yǎng)上清液的揮發(fā)物粗提液具有很強的殺線活性，在24 h內的殺線活性高達100％。經SPME-GC

4、/MS(solid-phase microextraction-gaschromatography/mass)分析和鑒定，殺線活性揮發(fā)物成分主要為dimethyltrisulfide(LC90=0.060 mmol/L), benzaldehyde(LC90=0.309 mmol/L), dimethyl disulfide(LC90=0.162 mmol/L),tert-butylamine(LC90=0.366mmol/L)。對菌株