不結(jié)球白菜抗蕪菁花葉病毒的SSR標(biāo)記及非親和互作中病原相關(guān)基因的表達(dá).pdf

1、植物病害是限制農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的主要因素。蕪菁花葉病毒(Turnipmosaicvirus，TuMV)作為植物的主要病原之一，在世界范圍內(nèi)分布極其廣泛，對(duì)大田作物的危害僅次于黃瓜花葉病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）。TuMV是我國十字花科蔬菜的主要病原，病害的發(fā)生嚴(yán)重影響不結(jié)球白菜(Brassicacampestrisssp.chinensisMakino)的產(chǎn)量和品質(zhì)，受到科研工作者、育種工作者和農(nóng)民的廣泛關(guān)注。近年來，

2、人們?cè)诔Ｒ?guī)抗病育種、分子標(biāo)記輔助育種、抗病基因克隆和病害相關(guān)生理指標(biāo)的測(cè)定等方法做了大量工作，對(duì)寄主與病原相互作用的分子機(jī)理有了一定的了解。本研究以不結(jié)球白菜抗病品種‘泰三抗’和感病品種‘香青菜’為材料，篩選到一個(gè)與抗TuMV基因連鎖的SSR標(biāo)記、176個(gè)病原相關(guān)基因和28個(gè)TuMV響應(yīng)基因LRK01的互作基因，對(duì)于分子標(biāo)記輔助育種具有一定的實(shí)用價(jià)值，對(duì)不結(jié)球白菜與TuMV互作的研究具有理論意義。
　　1.利用群體分離分析法和SS

3、R技術(shù)篩選了不結(jié)球白菜中與抗病基因連鎖的分子標(biāo)記，遺傳分析表明不結(jié)球白菜對(duì)TuMV的抗性由顯性單基因控制，得到1個(gè)與抗病基因連鎖的SSR標(biāo)記Ra3E05，連鎖距離為8.7cM。將該標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記SCRa2，用F2群體對(duì)其驗(yàn)證，帶型與原SSR標(biāo)記表現(xiàn)一致，可用于分子標(biāo)記輔助育種。
　　2.通過cDNA-AFLP技術(shù)對(duì)不結(jié)球白菜按種TuMV后基因差異表達(dá)進(jìn)行了分析，得到176條差異表達(dá)基因，分析表明:(1)參與病害或防御反應(yīng)的

4、基因響應(yīng)TuMV系統(tǒng)性侵染;(2)抗性品種和感病品種響應(yīng)TuMV侵染的主要差異在于對(duì)病原識(shí)別的時(shí)間性;(3)非親和互作與親和互作有相同的表達(dá)模式，兩種互作存在動(dòng)態(tài)差異;(4)兩種互作中不結(jié)球白菜基因?qū)uMV的響應(yīng)存在量的差異。
　　3.通過生物信息學(xué)分析和同源克隆，分離了不結(jié)球白菜LRRⅡ亞家族基因，包含6個(gè)家族成員，與擬南芥中功能已知的LRRⅡ基因高度同源。研究了這些基因的表達(dá)情況，結(jié)果表明TuMV侵染能夠誘導(dǎo)LRRⅡ基因的局

5、部和系統(tǒng)性表達(dá)，并且可以調(diào)控內(nèi)源水楊酸(SA)的積累。外施SA可以誘導(dǎo)對(duì)不結(jié)球白菜感病性的抗性，可能是通過抑制TuMV復(fù)制來實(shí)現(xiàn)的。雖然TuMV誘導(dǎo)的SA積累不是調(diào)控基因表達(dá)的主要因子，但是它能夠激發(fā)活性氧作為一條防御途徑。
　　4.利用SMART技術(shù)和酵母雙雜交系統(tǒng)，以TuMV接種的不結(jié)球白菜葉片為材料，構(gòu)建了cDNA文庫。以TuMV響應(yīng)基因LRK01為探針，與文庫雜交，篩選得到28個(gè)陽性克隆，經(jīng)過測(cè)序和同源性比對(duì)，一條編碼真核