我國(guó)部分地區(qū)羊球蟲(chóng)種類(lèi)及梨形蟲(chóng)病分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、寄生蟲(chóng)病(Parasitic disease)是嚴(yán)重危害養(yǎng)羊業(yè)健康發(fā)展的主要疾病之一，而球蟲(chóng)病(Coccidiosis)和梨形蟲(chóng)病(Piroplasmosis)則是常見(jiàn)的寄生蟲(chóng)病。這兩種疾病在世界范圍內(nèi)均有分布，綿羊和山羊均易感染。綿羊和（或）山羊感染球蟲(chóng)（Coccidian）或梨形蟲(chóng)（Piroplasma）后，生長(zhǎng)發(fā)育遲緩和繁殖性能下降，羊肉、羊奶、羊毛（絨）、羊腸衣及皮革的產(chǎn)量和品質(zhì)均降低，嚴(yán)重時(shí)感染甚至死亡。該病在世界范圍內(nèi)造成了

2、巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重阻礙了綿羊和山羊養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。本研究從2011年1月至2012年11月，應(yīng)用飽和蔗糖溶液漂浮法和麥克馬斯特計(jì)數(shù)法對(duì)采自我國(guó)部分地區(qū)的2639份糞便樣品進(jìn)行了檢查，對(duì)球蟲(chóng)陽(yáng)性樣品中的球蟲(chóng)卵囊進(jìn)行收集和培養(yǎng)，并對(duì)球蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行了鑒定。應(yīng)用基于梨形蟲(chóng)18S rRNA基因序列的PCR對(duì)采自我國(guó)部分地區(qū)的465份血液樣品進(jìn)行了檢查，并對(duì)梨形蟲(chóng)陽(yáng)性樣品進(jìn)行蟲(chóng)種鑒定和種系進(jìn)化分析。
　　1.為了解我國(guó)部分地區(qū)羊球蟲(chóng)種類(lèi)感染

3、情況，為羊球蟲(chóng)病的防制提供科學(xué)的參考和依據(jù)，于2011年1月至2012年11月，應(yīng)用飽和蔗糖溶液漂浮法和麥克馬斯特計(jì)數(shù)法對(duì)采自河南省部分地區(qū)、安徽省合肥市、重慶市云陽(yáng)縣、遼寧省朝陽(yáng)市、吉林省雙遼市、山東省東營(yíng)市、內(nèi)蒙古自治區(qū)烏蘭察布市商都縣和錫林郭勒盟蘇尼特右旗、貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū)和黔西南布依族苗族自治州晴隆縣、云南省昆明市等23個(gè)縣市的2639份糞便樣品（其中綿羊糞便樣品1150份，山羊糞便樣品1489份）進(jìn)行了檢查，對(duì)球蟲(chóng)陽(yáng)性樣品中

4、的球蟲(chóng)卵囊進(jìn)行收集和培養(yǎng)，并對(duì)球蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行了鑒定。結(jié)果，球蟲(chóng)總感染率為95.72％(2526/2639)，其中綿羊球蟲(chóng)感染率為96.43％（1109/1150），山羊球蟲(chóng)感染率為95.16％(1417/1489);共檢出13種綿羊艾美爾球蟲(chóng)和12種山羊艾美爾球蟲(chóng)，綿羊艾美爾球蟲(chóng)分別為阿撒他艾美爾球蟲(chóng)(Ei meriaahsata)、巴庫(kù)艾美爾球蟲(chóng)(E.bakuensis)、小型艾美爾球蟲(chóng)(E.parva)、貢氏艾美爾球蟲(chóng)(E.gonza

5、lezi）、蒼白艾美爾球蟲(chóng)（E.pallida）、顆粒艾美爾球蟲(chóng)（E.granulose）、溫布里吉艾美爾球蟲(chóng)(E.weybridg ensis)、類(lèi)綿羊艾美爾球蟲(chóng)(E.ovinoidalis)、馬西卡艾美爾球蟲(chóng)(E.marsica)、槌形艾美爾球蟲(chóng)（E.crandallis）、錯(cuò)亂艾美爾球蟲(chóng)(E.intricale)、浮氏艾美爾球蟲(chóng)(E.faurei）和斑點(diǎn)艾美爾球蟲(chóng)(E.punc(lala))，山羊艾美爾球蟲(chóng)分別為阿普艾美爾球蟲(chóng)(E

6、.apsheronica)、阿氏艾美爾球蟲(chóng)（E.arloingi）、艾麗艾美爾球蟲(chóng)（E.alijevi)、斑點(diǎn)艾美爾球蟲(chóng)(E.puncta(l)a)、蒼白艾美爾球蟲(chóng)(E.pallida)、家山羊艾美爾球蟲(chóng)(E.hirci)、柯察艾美爾球蟲(chóng)（E.kocharli）、克氏艾美爾球蟲(chóng)(E.chrislensseni)、妮氏艾美爾球蟲(chóng)(E.ninakohlyakimovae)、山羊艾美爾球蟲(chóng)(E.caprina）、羊艾美爾球蟲(chóng)(E.caprov

7、ina）和約奇艾美爾球蟲(chóng)（E.jolchiijevi）。羊球蟲(chóng)多為混合感染，其中綿羊?yàn)?1.19％(807/994)，山羊?yàn)?1.39％(604/846);綿羊混合感染2～10種艾美爾球蟲(chóng)，優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為馬爾西卡艾美爾球蟲(chóng)、巴庫(kù)艾美爾球蟲(chóng)和小型艾美爾球蟲(chóng);山羊混合感染2～9種艾美爾球蟲(chóng)，優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為家山羊艾美爾球蟲(chóng)、阿氏艾美爾球蟲(chóng)、克氏艾美爾球蟲(chóng)和艾麗艾美爾球蟲(chóng)。不同地區(qū)、不同年齡、不同月份、不同品種、不同飼養(yǎng)方式的綿羊和山羊感染的球蟲(chóng)種類(lèi)不

8、一，感染率也不相同，但優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種基本一致。本研究首次對(duì)湖羊球蟲(chóng)及其種類(lèi)和不同月份羊球蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行了調(diào)查。研究表明，綿羊和山羊球蟲(chóng)感染普遍，且多為混合感染，嚴(yán)重感染時(shí)可導(dǎo)致疾病的發(fā)生，在生產(chǎn)中，我們應(yīng)該采取綜合的防制措施來(lái)防止羊球蟲(chóng)病的發(fā)生，將其帶來(lái)的損失降到最低。
　　2.為了解我國(guó)部分地區(qū)羊梨形蟲(chóng)感染情況及其分子流行病學(xué)特征，為羊梨形蟲(chóng)病的防制提供科學(xué)的參考和依據(jù)，于2011年11月至2012年11月應(yīng)用血液涂片姬姆薩染色鏡檢法和P

9、CR（常規(guī)PCR和巢式PCR）對(duì)采自河南省部分地區(qū)、貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū)和黔西南布依族苗族自治州晴隆縣、云南省昆明市、山西省運(yùn)城市萬(wàn)榮縣、內(nèi)蒙古自治區(qū)烏蘭察布市商都縣和錫林郭勒盟蘇尼特右旗等22縣市的465份羊血液樣品進(jìn)行了檢查。結(jié)果，血液涂片姬姆薩染色鏡檢法共檢出52份梨形蟲(chóng)陽(yáng)性樣品，感染率為11.18％(52/465);PCR共檢出78份梨形蟲(chóng)陽(yáng)性樣品，感染率為16.77％(78/465)。應(yīng)用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增后證明，所分離的

10、羊梨形蟲(chóng)為呂氏泰勒蟲(chóng)（Theilerialuwenshuni）和莫氏巴貝斯蟲(chóng)（Babesia motasi）。研究表明，PCR比血液涂片姬姆薩染色鏡檢法更敏感，更特異，能夠鑒定到蟲(chóng)種并能檢出血涂片鏡檢呈陰性的羊梨形蟲(chóng)陽(yáng)性樣品;共檢出2種梨形蟲(chóng)，即呂氏泰勒蟲(chóng)和莫氏巴貝斯蟲(chóng)。
　　3.為確定我國(guó)部分地區(qū)羊梨形蟲(chóng)分離株的種類(lèi)，將分離的78株呂氏泰勒蟲(chóng)基因序列和8株莫氏巴貝斯蟲(chóng)基因序列分別在NCB（l）中進(jìn)行Blast比對(duì)，下載相關(guān)核糖核

11、酸序列，應(yīng)用Clustal X2.11軟件分別進(jìn)行比對(duì)及序列拼接，應(yīng)用 DNAStar7.5軟件進(jìn)行同源序列分析，應(yīng)用 Clustal X2.11和MEGA5.0等生物學(xué)軟件分別對(duì)泰勒蟲(chóng)基因序列和巴貝斯蟲(chóng)基因序列進(jìn)行比對(duì)并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果，Blast比對(duì)和同源性分析時(shí)，分離的78株呂氏泰勒蟲(chóng)與 T.huwenshuni(KC429038.1)的同源性為100％;在構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)上,分離的78株呂氏泰勒蟲(chóng)與 T.huwens