致病性鴨源奈瑟菌的分離鑒定及生物學特征研究.pdf

1、2012年4月,安徽省部分規(guī)模化鴨場爆發(fā)一種以鴨眼部腫脹、眼瞼分泌物增多、眼結膜粘合以致失明的急性傳染病。該病傳播速度極快,一旦少數(shù)鴨發(fā)病,1~2天便會擴散至全群。該病發(fā)病率較高,但死淘率較低,約在5％左右。此外,因患病鴨常發(fā)生單目或雙目失明,無法自主采食,導致淘汰率較高,給當?shù)仞B(yǎng)鴨業(yè)造成了較為嚴重的經(jīng)濟損失。
　　本研究從安徽地區(qū)鴨場患病鴨分離2株革蘭氏陰性球菌,對其形態(tài)學觀察、培養(yǎng)特性、生化試驗及16SrRNA序列分析等進行鑒

2、定。電鏡下觀察分離菌呈卵圓形或腎形,菌體長約0.5-0.7μm,寬為0.5μm,呈典型奈瑟菌形態(tài)。分離菌在巧克力平板生長呈灰白色,光滑,圓潤的菌落;生化試驗表明分離菌氧化酶、觸酶和吲哚陽性,葡糖糖發(fā)酵陽性,蔗糖、果糖、木糖、枸櫞酸鹽等呈陰性反應,其16SrRNA基因序列與奈瑟菌屬細菌同源性最高可達到99%。初步鑒定為奈瑟菌屬細菌,并分別命名為AH-N10株和XC株。根據(jù)奈瑟菌asd基因序列保守區(qū)設計引物,用于檢測鴨源奈瑟菌。經(jīng)特異性試驗

3、,敏感性試驗,表明所建立的PCR檢測方法穩(wěn)定有效,敏感性較高,可用于臨床快速檢測鴨源奈瑟菌。
　　為進一步了解鴨源奈瑟菌的生物學特性,對其親緣性、生長培養(yǎng)特性、保存方式、致病性等方面進行研究。對分離菌株的16SrRNA測序分析后,構建了分離菌株基于奈瑟菌屬不同菌種的16SrRNA系統(tǒng)進化樹,分析其同源性。結果表明分離菌株處于奈瑟菌屬進化分枝內(nèi),與黃色奈瑟菌、粘液奈瑟菌同源性較高。分離菌株在含5%胎牛血清的液體培養(yǎng)基中8小時達到穩(wěn)定

4、期,20小時開始進入衰亡期,穩(wěn)定期細菌含量達到109cfu/mL。應用甘油保存法、脫脂牛奶保存法以及冷凍干燥保存法對分離菌進行保存效果試驗,表明甘油保存法不適用于對鴨源奈瑟菌的保存,保存的細菌會失去活性無法復蘇;脫脂牛奶保存法和冷凍干燥保存法均能達到良好的保存效果,復蘇后細菌形態(tài)等特性未發(fā)生變化。
　　通過其對雛鴨及小鼠的感染試驗表明腿部肌肉注射108cfu分離菌,雛鴨會出現(xiàn)與臨床病鴨一致的臨床及剖檢病變,死亡率達到30%左右。分

5、離菌通過腹腔注射至小鼠體內(nèi),亦會出現(xiàn)明顯眼病病征按寇氏法測定2株鴨源奈瑟菌株的半數(shù)死亡量(LD50)分別為3.47×108,3.40×108。
　　藥物敏感性試驗表明兩分離菌株對青霉素、喹諾酮類藥物普遍耐藥,對氨基糖苷類及氯霉素類藥物較為敏感。應用中藥白頭翁,黃連,黃岑,黃柏,石榴皮,訶子,白芍,杖子,荊芥炭等制備了中藥方劑。通過中藥復方對鴨源奈瑟菌的體外抑菌試驗和治療試驗分析其抑菌及治療效果。結果表明,該中藥復方對鴨奈瑟菌的液體