表型無(wú)球少球懸鈴木優(yōu)良單株遺傳變異的ISSR及SSR分析.pdf

1、懸鈴木是世界著名的行道樹(shù)及園林綠化樹(shù)種，但是懸鈴木產(chǎn)生大量的果毛，不僅給人們的生活帶來(lái)極大的不便，而且有對(duì)人類(lèi)的身體健康產(chǎn)生危害。為了解決懸鈴木果毛問(wèn)題，對(duì)懸鈴木從表型變異、跟蹤觀(guān)察上進(jìn)行了研究選育，但是目前在分子水平上的研究比較少。與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)、孢粉學(xué)和同工酶鑒定方法相比，分子標(biāo)記技術(shù)快速準(zhǔn)確、多態(tài)性高，直接以DNA形式表現(xiàn)出來(lái)，不受外界環(huán)境、組織類(lèi)別、發(fā)育時(shí)期等條件的影響。本實(shí)驗(yàn)采用ISSR及SSR分子標(biāo)記對(duì)從自然界選育的無(wú)球少球

2、單株及其插穗、接穗、砧木為材料，從不同的方面入手，對(duì)其進(jìn)行遺傳變異分析，為獲得可以穩(wěn)定遺傳的無(wú)球品種提供依據(jù)，并為優(yōu)良單株的推廣提供依據(jù)。取得的試驗(yàn)結(jié)果主要如下:
　　(1)本試驗(yàn)在傳統(tǒng)CTAB方法的基礎(chǔ)上，對(duì)其加以改良，然后用改良的方法提取懸鈴木葉片DNA，然后對(duì)DNA質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，改良的CTAB方法適合提取高質(zhì)量的懸鈴木基因組DNA。
　　(2)本試驗(yàn)采用ISSR分子標(biāo)記方法對(duì)14株表型無(wú)球少球的懸鈴木優(yōu)良單株

3、進(jìn)行研究，從分子水平上分析它們之間的遺傳變異關(guān)系，進(jìn)而選育無(wú)球、少球懸鈴木。結(jié)果為:篩選出18個(gè)適合懸鈴木的ISSR引物，并應(yīng)用其中的11個(gè)引物進(jìn)行分析;11個(gè)引物擴(kuò)增出條帶總數(shù)105條清晰、穩(wěn)定、多態(tài)性好的可重復(fù)條帶，不同引物擴(kuò)增條帶數(shù)變幅為6-12條，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出9.6條帶，99條具有多態(tài)性，多態(tài)性比率為93.84％，平均每個(gè)引物產(chǎn)生9條多態(tài)性帶，多態(tài)性比例變化范圍81.82％-100.00％;聚類(lèi)時(shí)在0.67處可將14個(gè)單株

4、分為5個(gè)組，根據(jù)課題組多年對(duì)懸鈴木表型的跟蹤觀(guān)察及其他方法試驗(yàn)，暫定6號(hào)為無(wú)球懸鈴，1、2、3、13號(hào)為少球懸鈴木。
　　(3)本試驗(yàn)以懸鈴木單株及其接穗、插穗，還有砧木材料進(jìn)行研究材料進(jìn)行了ISSR標(biāo)記研究，結(jié)果為:應(yīng)用篩選出的18個(gè)引物中的13個(gè)引物進(jìn)行ISSR擴(kuò)增，結(jié)果顯示12個(gè)懸鈴木單株之間的多態(tài)性較高，達(dá)82.35％;將三組材料分別聚類(lèi)分析，第一組材料顯示懸鈴木的插穗與母株沒(méi)有遺傳差異，接穗與母株之間有小程度的遺傳差異;

5、而第二組第三組材料顯示插穗、接穗均與母株之間有遺傳差異。根據(jù)以上三組材料結(jié)果，大致可以推測(cè):懸鈴木的接穗、插穗與母株之間均有遺傳變異，接穗的變異程度大一些。
　　(4)本試驗(yàn)以懸鈴木單株及其接穗、插穗，還有砧木材料進(jìn)行SSR標(biāo)記分析，其結(jié)果為:通過(guò)反復(fù)篩選，共篩選出10對(duì)適合懸鈴木擴(kuò)增的SSR引物;10對(duì)引物對(duì)懸鈴木進(jìn)行擴(kuò)增，10對(duì)引物擴(kuò)增出36條帶，各對(duì)引物條帶變化范圍為2-5個(gè)，各引物多態(tài)性比率分布于66.7％-100.0％，