棗ISSR反應(yīng)體系的建立及其在新鄭棗區(qū)優(yōu)良單株早期鑒定上的應(yīng)用.pdf

1、棗樹(shù)在中國(guó)有著悠久的栽培歷史，河南又是最早栽培棗樹(shù)的地區(qū)之一.為了選育優(yōu)質(zhì)豐產(chǎn)的棗樹(shù)品種，新鄭棗樹(shù)科學(xué)研究所篩選了5株棗樹(shù)優(yōu)良單株，為了探索早期鑒定優(yōu)良單株的方法，本論文選用一種簡(jiǎn)便、快速、可靠的分子標(biāo)記-ISSR技術(shù)，探討其在優(yōu)良單株早期鑒定方面的應(yīng)用.其結(jié)果如下： 1、改良了棗樹(shù)葉片DNA的提取方法，提取出高質(zhì)量的棗樹(shù)基因組DNA，適用于ISSR擴(kuò)增. 2、對(duì)棗樹(shù)ISSR反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化，總體積15μl，引物濃度為

2、0.8μmol/L，2×TaqMastcrMix 7.5μll，45ngDNA.擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性1min；50℃左右退火(隨引物不同變化)1mln；72℃延伸2mln；72℃延伸10min；40個(gè)循環(huán)；4℃保存. 3、從100條ISSR引物中篩選出15條條帶清晰、多態(tài)性豐富的引物用于基因組DNA擴(kuò)增，得到93條條帶，其中多態(tài)性條帶83條，占89.3％. 4、對(duì)5株優(yōu)良單株的ISSR數(shù)據(jù)進(jìn)行

3、了相似系數(shù)和聚類分析，并建立了5個(gè)優(yōu)良單株的樹(shù)狀聚類圖，品種之間的相似系數(shù)在0.43-0.81之間，以相似系數(shù)0.60為界，可以將5株優(yōu)良單株分為兩大類，1-4號(hào)為第一類，5號(hào)為第二類. 5、根據(jù)5株優(yōu)良單株的形態(tài)指標(biāo)，運(yùn)用最短距離法進(jìn)行聚類分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)運(yùn)用與ISSR的結(jié)果并不完全一致，不同之處在于ISSR法將3號(hào)和4號(hào)先分為一個(gè)亞類，1號(hào)和2號(hào)也分為一個(gè)亞類，然后再將它們四種分為一類.但是傳統(tǒng)方法是先將1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)分為一