四種雞球蟲(chóng)多價(jià)DNA疫苗免疫和程序及其穩(wěn)定性研究.pdf

1、雞球蟲(chóng)病是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疾病之一，危害比較嚴(yán)重主要有柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)4個(gè)種，臨床上往往為這4個(gè)種的混合感染，因此研制抵抗這4種雞球蟲(chóng)混合感染的多價(jià)疫苗顯得十分迫切，本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建了抵抗4種球蟲(chóng)的混合多價(jià)DNA疫苗和多價(jià)多表位DNA疫苗，初步顯示了良好的免疫保護(hù)效果，為進(jìn)一步提高多價(jià)DNA疫苗的免疫保護(hù)效果，本研究對(duì)混合多價(jià)DNA疫苗的配比進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)多價(jià)多表位DNA疫苗的免疫程

2、序和穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，如下:
　　 本研究第一部分首先在對(duì)四種雞艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IFN-γ、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-Em8-IL-2和pVAX1.0-3-1E-IFN-γ混合免疫程序基礎(chǔ)上，對(duì)其免疫劑量的最佳配比再進(jìn)行篩選。將柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(E.tenella)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IFN-γ、毒害艾美耳球蟲(chóng)(E.necatrix)免疫調(diào)節(jié)型D

3、NA疫苗pVAX1.0-NA4-IL-2、巨型艾美耳球蟲(chóng)(E.maxima)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-Em8-IL-2和堆型艾美耳球蟲(chóng)(E.acervulina)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-3-1 E-IFN-γ按5μg∶5μg∶5μg∶5μg、10μg∶25μg∶25μg∶10μg、15μg∶35μg∶35μg∶15μg、20μg∶50μg∶50μg∶20μg的劑量混合后免疫雛雞，試驗(yàn)對(duì)各配比劑量設(shè)計(jì)了感染柔嫩艾美耳

4、球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)和四種混合感染各5個(gè)試驗(yàn)組及相應(yīng)的5個(gè)非免疫攻蟲(chóng)對(duì)照組與一個(gè)非免疫非攻蟲(chóng)對(duì)照組，共26組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)免疫劑量混合組15μg∶35μg∶35μg∶15μg組在減少E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和四個(gè)蟲(chóng)種種混合的免疫保護(hù)效果最好，ACI分別為188.50，180.50，180.91和174.59。免疫劑量混合組10μg∶25μg∶25μg∶10μg組對(duì)E.

5、maxima感染組的免疫保護(hù)效果較好，ACI為181.69。
　　 本研究第二部分是將本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2進(jìn)行免疫程序篩選，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。主要包括以下幾個(gè)方面:
　　 1四種雞艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗免疫劑量的篩選
　　 將免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1

6、-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分別以2μg、10μg、25μg、50μg、100μg、200μg免疫雛雞，各劑量分別設(shè)計(jì)了感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和毒害艾美耳球蟲(chóng)各4個(gè)試驗(yàn)組及相應(yīng)的4個(gè)非免疫攻蟲(chóng)對(duì)照組與一個(gè)非免疫非攻蟲(chóng)對(duì)照組，共29組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柔嫩艾美耳球蟲(chóng)組免疫保護(hù)效果最好的免疫劑量為25μg，ACI為184.5。毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)免疫保護(hù)效果最好的免疫劑量均為10μ

7、g，ACI分別為184.58、181.27、181.48。
　　 2四種雞艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗免疫途徑的篩選
　　 將免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分別以肌肉注射、靜脈注射、皮下注射、口服、滴鼻滴眼五個(gè)途徑免疫雛雞，各途徑分別設(shè)計(jì)了感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和毒害艾美耳球蟲(chóng)各4個(gè)試驗(yàn)組及相應(yīng)的4個(gè)非免疫攻

8、蟲(chóng)對(duì)照組與一個(gè)非免疫非攻蟲(chóng)對(duì)照組，共25組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各免疫攻蟲(chóng)組中腿部肌肉注射組ACI均最高。其中腿部肌肉注射攻柔嫩艾美耳球蟲(chóng)組ACI為183.24;攻毒害艾美耳球蟲(chóng)的ACI為184.76;攻巨型艾美耳球蟲(chóng)ACI為181.96;攻堆型艾美耳球蟲(chóng)ACI為174.79。腿部肌肉注射組免疫效果優(yōu)于其他免疫途經(jīng)組。
　　 3四種雞艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗首免日齡和免疫次數(shù)的篩選
　　 設(shè)計(jì)了一周齡首免不加強(qiáng)免疫

9、、一周齡首免二周齡加強(qiáng)免疫、二周齡首免不加強(qiáng)免疫和二周齡首免三周齡加強(qiáng)免疫四個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別免疫DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2。各程序設(shè)計(jì)了感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和毒害艾美耳球蟲(chóng)各4個(gè)試驗(yàn)組及相應(yīng)的4個(gè)非免疫攻蟲(chóng)對(duì)照組與一個(gè)非免疫非攻蟲(chóng)對(duì)照組，共21組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加強(qiáng)免疫組比非免疫組免疫保護(hù)效果好，所有加強(qiáng)免疫組的ACI都大于160;二周齡首免組比一周齡首免

10、組免疫保護(hù)效果好，二周齡首免三周齡加強(qiáng)免疫組效果最好。
　　 4四種雞艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗免疫穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
　　 將免疫調(diào)節(jié)型多價(jià)多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分別在不同的溫度(-20℃、4℃和室溫)下分別保存1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月，分別免疫雛雞，各溫度組分別設(shè)計(jì)了感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和毒害艾美耳球蟲(chóng)各4個(gè)試驗(yàn)組及