雞ADSL和GARS-AIRS-GART基因遺傳變異、表達及其與肌苷酸的相關(guān)分析.pdf

1、肌苷酸是影響肉質(zhì)風味的重要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。本研究采用PCR-SSCP和DNA測序相結(jié)合研究如皋雞、安卡雞、文昌雞和隱性白羽肉雞4個群體2個肌苷酸代謝相關(guān)候選基因ADSL和GARS-AIRS-GART基因的遺傳變異及其與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性;制作2、4、6、8、10和12周齡如皋雞和隱性白羽肉雞胸肌和腿肌肌纖維及脂肪的組織切片,觀察和分析不同品種雞的肌纖維發(fā)育規(guī)律及其與肉質(zhì)之間的關(guān)系;采用實時熒光定量PCR法研究2個基因(ADSL和GART基因

2、)在0(出雛)、2、4、6、8、10和12周齡如皋雞和隱性白羽肉雞10個組織(大腦、心、肝、胸肌、腿肌、小腦、腺胃、腎、大腸和小腸)的表達差異及不同發(fā)育時期的表達規(guī)律,期望對優(yōu)質(zhì)雞的遺傳改良工作提供參考依據(jù),主要結(jié)果如下:
　　 1.組織切片結(jié)果顯示
　　 隱性白羽肉雞肌肉纖維的直徑在每個周齡上都高于如皋雞,且在4和6周齡時達到了極顯著的水平(P＜0.01),在12周齡時達到了顯著的差異(P＜0.05),這與隱性白羽肉雞

3、生長發(fā)育速度快于如皋雞,飼料利用率高的種質(zhì)特性相一致。而隱性白羽肉雞和如皋雞的皮下脂肪細胞體積變化均呈現(xiàn)“上升-下降”的趨勢,分別在8周齡和10周齡出現(xiàn)下降趨勢,在6周齡和8周齡時隱性白羽肉雞高于如皋雞,而10周齡和12周齡時低于如皋雞,但差異并不顯著(P＞0.05)。
　　 2.ADSL基因遺傳變異及其與IMP的關(guān)聯(lián)分析
　　 在文昌、如皋、安卡雞和隱性白羽肉雞的ADSL基因2號外顯子上檢測到g.3713 G＞A和g.

4、3797 C＞T的同義突變,在9號外顯子上檢測到g.10191 C＞T的同義突變。其中文昌雞在10191位點處于Hardy-Weinberg非平衡狀態(tài),其余位點在四個雞種中都處于哈代-溫伯格平衡狀態(tài)。與肌肉肌苷酸含量的關(guān)聯(lián)分析表明:在2號外顯子中的2個SNPs位點,基因型效應、品種效應以及品種與基因型的互作效應均不顯著(P＞0.05);而在9號外顯子的多態(tài)位點上檢測出顯著的基因型效應,BB型個體胸肌IMP含量分別較AA型與AB型低1.1

5、49 mg/g和1.181 mg/g,且差異極顯著(P＜0.01);AB型個體IMP含量稍高于AA型,但二者之間差異不顯著(P＞0.05)。
　　 3.GARS-AIRS-GART基因遺傳變異及其與IMP的關(guān)聯(lián)分析
　　 如皋、文昌、安卡雞和隱性白羽肉雞GARS-AIRS-GART基因21號外顯子中共發(fā)現(xiàn)了4個SNPs:g.29943 G＞A、g.29968 C＞T、g.30011 T＞C、g.30017 C＞T,其中三

6、處為非同義突變,29943處天冬氨酸(Asp)→天冬酰胺(Asn)、30011處色氨酸(Trp)→精氨酸(Arg)、30017處精氨酸(Arg)→半胱氨酸(Cys)。安卡、文昌和如皋雞都處在Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。該多態(tài)位點上存在顯著的基因型效應,與肌肉肌苷酸含量的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明:AE型個體胸肌IMP含量比其他基因型的IMP含量都低,均達到了極顯著水平(P＜0.01),其他基因型之間IMP含量差異均不顯著(P＞0.05)

7、。
　　 4.ADSL和GARS-AIRS-GART基因候選單倍型分析
　　 在ADSL和GARS-AIRS-GART基因編碼區(qū)中共檢測到128種候選單倍型,其中1、21和37號候選單倍型的頻率超過了10％,分別為0.5021、0.1316和0.3159;2、3、5、6、13、31、33、38、39、53、65、85、101號候選單倍型的頻率在1％～10％之間;其余都小于1％。不同單倍型頻率分布的差異可能是由于單核苷酸多

8、態(tài)位點間連鎖不平衡引起。本實驗的四個雞種中,所檢測到的候選單倍型安卡雞最多為80種;隱性白羽肉雞最少為8種;如皋雞和文昌雞居中,分別為32種和62種;而且候選單倍型種類和頻率也各不相同;反映了不同雞種的遺傳結(jié)構(gòu)差異。
　　 5.如皋雞、隱性白羽肉雞ADSL基因的組織表達規(guī)律分析
　　 實時熒光定量PCR法檢測結(jié)果表明:ADSL基因在腿肌和胸肌中表現(xiàn)為高度特異性表達,肝、腎和心表現(xiàn)為中度表達,小腦、大腦、腺胃、小腸和大腸表

9、現(xiàn)為低度表達。各組織之間的表達規(guī)律如下:①大腦組織中兩雞種不同時期的表達變化規(guī)律相似,均表現(xiàn)為從0日齡上升到4周齡,隨后逐漸減少;②心臟組織中如皋雞在2周齡時表達量達到最高,之后逐漸下降;而隱性白羽肉雞出生時(0日齡)基因的表達量較高,隨后逐漸減少,在8周齡時到達最高;③肝臟組織中,如皋雞從出生后到2周齡時表達量一直上升至最大值,隨后逐漸下降,12周齡時又有所上升;而隱性白羽肉雞出生時的表達量較高,隨后逐漸減少;④胸肌組織中,如皋雞從出

10、生后到12周齡內(nèi)最高表達量出現(xiàn)在2周齡且如皋公雞的表達量明顯高于母雞;而隱性白羽肉雞的最高表達量出現(xiàn)在6周齡;⑤腿肌組織中,2個品種的公雞的表達量先上升后下降的趨勢,而母雞呈先下降后上升趨勢。
　　 6.如皋雞、隱性白羽肉雞GART基因的組織表達規(guī)律分析
　　 GART基因在如皋雞的肝臟和腿肌表現(xiàn)為高度表達,小腦、腺胃、胸肌、心和腎都表現(xiàn)為中度表達,大腸、小腸和大腦表現(xiàn)為低度表達。各組織的表達量如下:①在腿肌組織中,兩雞

11、種公雞GART基因的發(fā)育性表達規(guī)律相似,均表現(xiàn)從0日齡開始上升到2周齡到達最大值,隨后逐漸下降,但如皋雞公雞2周齡的表達量遠遠高于隱性白羽肉雞的公雞;且兩雞種母雞各個時期的表達量也相似。到12周齡時如皋公雞和母雞的表達量都具有上升的趨勢,而隱性白羽肉雞的公雞和母雞的表達量都具有下降的趨勢;②在胸肌中,兩雞種GART基因表達量均隨日齡的增加而降低;0～4周齡如皋雞表達量高于隱性白羽肉雞,4～8周齡則低于隱性白羽肉雞;之后的表達量又高于隱性