大蒜植株中蒜氨酸酶的分離及酶學(xué)特性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、大蒜植株中主要功能物質(zhì)是由蒜氨酸酶催化蒜氨酸產(chǎn)生的極不穩(wěn)定的大蒜素等含硫化合物。本試驗以大蒜植株為原料，依次采用Na+/K+磷酸緩沖溶液浸提法、PEG8000沉淀法、超濾濃縮法、SephadexG-75色譜柱層析法分離純化出蒜氨酸酶，并采用SDS-PAGE凝膠電泳鑒定其純度;以蒜氨酸為底物研究蒜氨酸酶的酶學(xué)特性;并對蒜氨酸酶解產(chǎn)物的抗氧化性及抑菌活性進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下:
　　蒜氨酸酶的分離純化工藝為:pH7.0的Na+/K+

2、磷酸緩沖溶液浸提蒜氨酸粗酶液，加入15％PEG8000去除部分雜蛋白，再在上清中加入PEG8000使其終濃度為25％，取沉淀;用截留分子量為30K的中空纖維膜，壓力為0.1MPa，緩沖溶液循環(huán)超濾兩次;通過/ephadexG-75色譜柱進(jìn)行純化。并經(jīng)過SDS-PAGE電泳顯示其純度得到提高。
　　蒜氨酸酶的酶學(xué)特性為:最適溫度50℃，最適pH6.5，米氏常數(shù)Km=2.38mmol·L-1，Vmax=1.05μmol·min-1;蒜

3、氨酸酶在溫度為30℃時相對穩(wěn)定，pH在6-9條件下相對比較穩(wěn)定;Mg2+、EDTA-Na、Fe3+、甘油、PLP、葡萄糖對酶促反應(yīng)有激活作用，Ba2+、Ca2+、Co2+、Cu2+、L-半胱氨酸對酶促反應(yīng)有抑制作用;蒜氨酸酶的糖含量為7.65％，且糖肽鍵連接方式是N-型連接。
　　不同活力單位的酶處理蒜氨酸的產(chǎn)物可提高蒜氨酸樣品的總抗氧化能力及對DPPH·、羥自由基的清除能力;酶處理的蒜氨酸樣品對DPPH·、羥自由基的清除能力與處

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