球孢白僵菌對(duì)斜紋夜蛾的高毒菌株篩選及制劑研發(fā).pdf

1、斜紋夜蛾Spodoptera litura(Fabric ius)屬鱗翅目(Lepidopetra)夜蛾科(Notcudiea)，具有食性雜、繁殖力強(qiáng)、暴發(fā)快等特點(diǎn)，是一種危害極大的農(nóng)業(yè)害蟲。長(zhǎng)期以來，斜紋夜蛾依賴于化學(xué)防治，抗藥性問題十分突出，研究探索斜紋夜蛾微生物防治的新技術(shù)是一項(xiàng)緊迫的任務(wù)。昆蟲病原真菌在害蟲生物防治中已被廣泛研究和應(yīng)用，但針對(duì)斜紋夜蛾的研究報(bào)道還十分有限。本研究以斜紋夜蛾為靶標(biāo)害蟲，篩選了對(duì)斜紋夜蛾二齡幼蟲高毒力

2、的菌株，優(yōu)化了基于當(dāng)選菌株孢子油劑的制劑配方，評(píng)價(jià)了當(dāng)選菌株孢子油劑與低劑量抑太保對(duì)斜紋夜蛾的協(xié)同作用效果，并進(jìn)行了斜紋夜蛾的田間藥效試驗(yàn)。主要內(nèi)容和結(jié)果分述如下：
　　 對(duì)斜紋夜蛾高毒力的球孢白僵菌株篩選比較測(cè)定了不同地理和寄主來源的12株球孢白僵菌Beauveria bassiana對(duì)斜紋夜蛾二齡幼蟲的毒力。用含0.02％吐溫80的無菌水將各菌株孢子粉配制成1×108個(gè)孢子/mL的高濃度懸液作為處理，以0.02％吐溫80作為

3、對(duì)照，每處理三次重復(fù)，自動(dòng)噴塔噴霧接種到斜紋夜蛾二齡幼蟲上，孢子沉降量為2500(2132-2807)個(gè)孢子/mm2，因菌株而異。幼蟲接種后在在25℃和12L:12D條件下用甘蘭葉片飼養(yǎng)，連續(xù)7天逐日定時(shí)觀察記錄死亡率，病死蟲尸保濕培養(yǎng)。各接菌處理在第7天的累計(jì)校正死亡率為33.9‰82.4％，不同菌株之間差異顯著(P<0.01)，但同一菌株的各重復(fù)之間無顯著差異（P>0.05）。其中，誘發(fā)幼蟲死亡率最低的菌株為Bb2336和Bb453

4、5，分別為33.9％(+1.1％)和33.9％(+5.9％)，而毒力最高的Bb2860菌株誘發(fā)幼蟲死亡率高達(dá)82.4％(+6．O％)。此外，生測(cè)中的大多數(shù)蟲尸在保濕培養(yǎng)的1～3天內(nèi)都能長(zhǎng)出菌絲，并在體表產(chǎn)生分生孢子。
　　 球孢白僵菌孢子制劑和貯存技術(shù)的改進(jìn)將球孢白僵菌Bb2860菌株的高純度孢子粉分別貯存于4℃和25℃下，孢子油劑貯存于25℃下。每月定期檢測(cè)孢子粉活孢率、耐熱能力和耐紫外輻射能力，油劑則只檢測(cè)孢子活孢率，持續(xù)貯

5、存檢測(cè)18個(gè)月。結(jié)果表明，孢子粉貯存期間的活孢率在不同溫度處理及不同貯存期之間差異極顯著。在25℃下貯存的孢子粉與油劑的活孢率也差異顯著。在第12個(gè)月時(shí)，貯存于4℃下的孢子活孢率為85％，貯存于25℃的孢子粉活孢率幾乎降為0，而此時(shí)油劑中活孢率仍維持在66％。同時(shí)，25℃下貯存的孢子粉耐熱能力和耐UV-B紫外輻射能力均比4℃貯存的孢子粉下降更快。兩因素方差分析表明，孢子粉耐熱能力和耐輻射能力在4"C和25℃之間以及不同貯存期之間均差異極

6、顯著。油劑的粘度會(huì)隨穩(wěn)定劑濃度的升高而增加，同時(shí)使得油劑中孢子沉降速度減緩。在10％穩(wěn)定劑濃度下，加入8％的乳化劑，可以使油劑稀釋液穩(wěn)定達(dá)到1.2x107個(gè)孢子/mL的田間適噴濃度。
　　 球孢白僵菌孢子油劑與低劑量抑太保對(duì)斜紋夜蛾的互作效果測(cè)定以球孢白僵菌Bb2860的不同孢子制劑對(duì)斜紋夜蛾二齡幼蟲進(jìn)行生物測(cè)定，各制劑的噴菌處理均包括低、中、高(106、107、108個(gè)孢子/mL)三個(gè)濃度。生測(cè)1為未劑型化孢子粉的吐溫80水懸

7、液；生測(cè)2為不含穩(wěn)定劑的孢子油劑；生測(cè)3為含有穩(wěn)定劑的孢子油劑；生測(cè)4為抑太保對(duì)照生測(cè)，包括常規(guī)推薦用量(700 mL5％乳油/公頃，稀釋1000倍噴霧)及常規(guī)推薦用量的1/5和1/10三個(gè)劑量；生測(cè)5為油劑與低劑量抑太保的協(xié)同生測(cè)試驗(yàn)（即油劑3與抑太保1/10的推薦用量混用）。對(duì)生測(cè)結(jié)果按時(shí)間．劑量，死亡率模型進(jìn)行模擬分析，結(jié)果表明，不同制劑處理的幼蟲致死率差異極顯著(F4,2s=17.1，P<0.01)，同一制劑的不同劑量間也差異極

8、顯著(F2,2s=115.6，P<0.01)。根據(jù)相同孢子劑量處理的死亡率高低，生測(cè)2優(yōu)于生測(cè)1，而生測(cè)3則優(yōu)于生測(cè)2。油劑與低劑量的抑太保協(xié)同作用時(shí)，殺蟲速度和死亡率均顯著提高。
　　 球孢白僵菌孢子懸乳劑與低劑量抑太保混用對(duì)花菜地斜紋夜蛾的田間防效基于以上室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果，分別于2009年9月和2010年9月在安徽馬鞍山選取一塊花椰菜地進(jìn)行獨(dú)立的田間藥效試驗(yàn)，考察純菌劑（孢子油縣劑）、純藥劑（抑太保）及菌藥混用各處理對(duì)斜紋夜蛾的

9、田間防效。試驗(yàn)共包括5個(gè)處理，即純菌劑(I)、抑太保常規(guī)用量的1/10處理(Ⅱ)、抑太保常規(guī)用量處理(Ⅲ)、菌藥混用處理(Ⅳ=Ⅰ+Ⅱ)及清水對(duì)照(V)。菌劑處理的實(shí)際用菌量按1.5 L孢子油劑/公頃，即相當(dāng)于每公頃1.5～1.8xl013個(gè)孢子的用菌量，處理Ⅱ和Ⅲ中的抑太保實(shí)際用量分別為75 mL乳油/公頃和750mL乳油/公頃．除對(duì)照外各處理的孢子油懸劑在施用前先加入8％乳化劑(AEO-3)，混合均勻，然后用清水稀釋500倍。采用背負(fù)

10、式手動(dòng)噴霧器在0.2-0.4 mPa的工作壓力下噴霧。每處理4個(gè)小區(qū)（重復(fù)），每小區(qū)面積為15㎡，隨機(jī)區(qū)組排列。2009年的田間試驗(yàn)在初次施藥后，分別于第3、6、9天檢查蟲口情況。2010年的田間試驗(yàn)在初次噴藥后，分別于第3和第5天檢查蟲口，并于第5天第二次施藥。第二次施藥7天后檢查蟲口并進(jìn)行第3次施藥，7天后再次檢查蟲口。
　　 在2009年的田間試驗(yàn)中，施藥3天后抑太保常規(guī)用量處理對(duì)斜紋夜蛾的防效最好，相對(duì)防效達(dá)96.7％(

11、+2.7％)；菌藥混用和純菌劑的相對(duì)防效分別為95.2％(+4.6％)和91.6(+2.5％)，而低劑量抑太保的相對(duì)防效僅為52.4％(+9.0％)。藥后9天，各處理的蟲口均有所反彈，菌藥混用和常規(guī)用量抑太保處理的相對(duì)防效分別為91.1％(±2.O％)和89.7％(+3.8％)，純菌劑處理的防效降為77.6(±6.1％)，而低劑量抑太保的防效僅為49．O％(+10.5％)。兩因素隨機(jī)區(qū)組方差分析表明，相對(duì)防效在不同處理間差異極顯著(F3

12、,45=162.6，P

13、0.01)和抽樣日（用藥次數(shù)）之間(F4,57=1047.8，P　　 綜合以上結(jié)果，本研究的成果和創(chuàng)新點(diǎn)在于：一是利用本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有生測(cè)體系成功篩選到一株對(duì)斜紋夜蛾高毒力的球孢白僵菌菌株Bb2860，能夠直接侵染誘發(fā)較高的幼蟲死亡率。二是揭示了該菌株孢子油劑與低劑量抑太?；煊脤?duì)斜紋夜蛾二齡幼蟲的協(xié)同效應(yīng)，并在次基礎(chǔ)上進(jìn)行了田間試驗(yàn)，證明純菌劑