絲狀海洋真菌殺線蟲代謝物的性質(zhì)及發(fā)酵條件研究.pdf

1、海洋真菌因其種類的多樣性和遺傳背景的特殊性而具有產(chǎn)生新型生物活性物質(zhì)的巨大潛力。本文從渤海水域分離得到并證實(shí)具有殺線活性的3株絲狀真菌MTJ5-3-1、MTJ4-2-1、MTJ5-1-4出發(fā),選擇殺線活性最高的MTJ5-3-1為試驗(yàn)菌;利用線蟲致死率作為指標(biāo),通過發(fā)酵條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)對(duì)發(fā)酵影響較大的pH值、接種量、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間等培養(yǎng)條件和碳氮源及其含量進(jìn)行優(yōu)化,確立了優(yōu)化培養(yǎng)條件;并對(duì)海洋真菌MTJ5-3-1的殺線蟲活性代謝物質(zhì)進(jìn)行了

2、理化性質(zhì)分析,研究結(jié)果如下:
　　1)MTJ5-3-1、MTJ4-2-1、MTJ5-1-43株海洋真菌的殺線活性測(cè)定測(cè)定結(jié)果顯示,MTJ5-3-1菌株殺線活性最高,殺線活性達(dá)到A級(jí)。
　　2)MTJ5-3-1菌的發(fā)酵條件優(yōu)化通過優(yōu)化試驗(yàn),得到改進(jìn)后培養(yǎng)條件為:去皮馬鈴薯150g/L煮汁,葡萄糖10g/L,酵母膏1g/L,海水含量600m1/L。接種量2×106的孢子懸液,轉(zhuǎn)速120r/min,初始pH6.5~pH7.0,24

3、~26℃發(fā)酵96h。
　　3)MTJ5-3-1菌殺線蟲活性代謝產(chǎn)物定性分析MTJ5-3-1菌的10倍濃縮發(fā)酵液,超濾去掉6000dalton以上的大分子,采用生物活性跟蹤檢測(cè)的方法,對(duì)水飽和乙酸乙酯及水飽和正丁醇萃取后的水相組分,結(jié)果顯示其殺線蟲活性達(dá)到97.85％;理化性質(zhì)分析結(jié)果表明,該產(chǎn)物為中性耐熱活性物質(zhì),進(jìn)一步的薄層層析、可見-紫外光譜分析、紅外檢測(cè),以及液相色譜分析結(jié)果顯示,MTJ5-3-1菌殺線蟲活性代謝產(chǎn)物包含4種

4、組分,具有含氮糖類或含氮糖類衍生物的分子特征。
　　4)菌種鑒定通過對(duì)MTJ5-3-1菌株經(jīng)典分類指標(biāo)的觀察鑒定,將其初步鑒定為枝頂孢霉。進(jìn)一步的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果顯示,該菌株ITS序列與Acremoniumsp.NJM0672和Acremonium sp.NJM0567的同源性為100%,形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果與Acremonium sp.NJM0567一致,可確定為Acremonium sp.。
　　結(jié)論:通過研究獲得一株能夠產(chǎn)