雞腺胃型IBV的分離、鑒定及部分生物學(xué)特性研究.pdf

1、本研究首先從河北疑似患傳染性腺胃炎(infectious proventriculitis，IP)的雞群中分離到5株病毒，通過(guò)血清學(xué)鑒定、對(duì)新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)的干擾試驗(yàn)及動(dòng)物試驗(yàn)等方法，初步確定分離病毒為傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)。病毒接種的雞胚尿囊液無(wú)直接血凝活性，經(jīng)1％胰酶處理后的尿囊液能凝集雞紅細(xì)胞，其血凝活性可被IBV陽(yáng)性

2、血清所抑制。分離毒均可干擾NDV在SPF胚內(nèi)的增殖。
　　 用RT-PCR的方法成功地?cái)U(kuò)增了部分分離毒的膜蛋白基因(M基因)全長(zhǎng)片段，測(cè)序獲得了2個(gè)分離毒株M基因的全長(zhǎng)核苷酸序列：其M基因均由681nt的核苷酸組成，均編碼226個(gè)氨基酸。將其與GenBank中注冊(cè)的19株IBV的M基因核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行比較、系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析發(fā)現(xiàn)：2株腺胃型IBV分離毒之間的核苷酸序列同源性為100％，其相應(yīng)的氨基酸序列同源性為10

3、0％；分離毒與19個(gè)參考毒株M基因核苷酸序列同源性為86.8％～93.0％，其相應(yīng)的氨基酸序列同源性為87.5％～96.1％；其中2株腺胃型IBV分離毒株與腎型IBV BJ株、腺胃型IBV QX株和腎型IBV CK/CH/LSHHI/03 株的親緣關(guān)系較近；而與IBV CU-T2株的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。
　　 病毒性腺胃炎在實(shí)驗(yàn)室復(fù)制不易成功，故本研究進(jìn)行了雞腺胃型 IBV和NDV對(duì)雞的協(xié)同致病試驗(yàn)，通過(guò)臨床癥狀觀(guān)察及病理學(xué)檢查和病毒

4、抗原檢測(cè)，揭示病毒性腺胃炎的發(fā)病原因和致病機(jī)制。試驗(yàn)所用病毒為腺胃炎IBV分離毒和NDV強(qiáng)毒株。通過(guò)2種病毒的混合感染，成功復(fù)制出了腺胃炎病例。各感染組雞均見(jiàn)發(fā)病、死亡，其中a組、c組、d組的雛雞致死率都超過(guò)了自然病例病料造模組；c組雞的致死率最高，而b組雞的致死率最低。結(jié)果表明，NDV的加入明顯增強(qiáng)了病毒性腺胃炎的致死率。
　　 病理學(xué)檢查結(jié)果表明，各感染組的病變性質(zhì)基本相似：在感染早期，腺胃病變較輕；而到后期，腺胃病變逐漸顯

5、著，表現(xiàn)為腺胃腫大，壁增厚，腺胃固有層和（或）腺體內(nèi)出現(xiàn)數(shù)量不等的淋巴細(xì)胞增生，而對(duì)照組雞腺胃沒(méi)有病理變化，說(shuō)明腺胃是病毒性腺胃炎的一個(gè)重要的靶器官。但4種感染方式致腺胃大體病變和顯微病變的程度均不如自然病例病料造模組顯著。這可能是IP病例腫大腺胃的形成還有其他因素參與。
　　 本試驗(yàn)最早可從感染后第1d雞的腺胃黏膜上皮細(xì)胞及復(fù)管腺上皮細(xì)胞中檢測(cè)到病毒抗原，在感染后第35d的腺胃中仍能檢測(cè)到病毒抗原，表明該腺胃型IBV和NDV均