內蒙古甘草內生細菌多樣性研究.pdf

1、本文以甘草為研究材料，運用傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)方法并結合非培養(yǎng)方法PCR-DGGE技術，對采自內蒙古鄂爾多斯地區(qū)的野生及栽培甘草的不同部位內生細菌的多樣性進行了研究，比較了野生及栽培甘草不同部位內生細菌群落的多樣性差異，并獲得了一批內生細菌菌株資源。 對野生及栽培甘草根、莖、葉組織中的內生細菌進行分離和計數(shù)，發(fā)現(xiàn)野生及栽培甘草根、莖、葉部位的內生細菌菌落數(shù)分布在3.10×102～1.37×106(單位：cfu/g鮮重)上，總體來說，野

2、生甘草內生細菌菌落數(shù)大于栽培甘草，內生細菌在甘草根、莖、葉部位的菌落數(shù)和種群數(shù)量均有差異，野生及栽培甘草均表現(xiàn)出根和葉部的內生細菌種類比莖部豐富。應用分子方法ERIC-PCR方法對分離內生細菌進行菌株水平的多樣性檢測，共得到內生細菌121株。對其中82株進行16SrDNA片段測序分析，結果表明這些內生細菌分別與Genbank中α、β、γ－Proteobacteria，F(xiàn)irmicutes、Actinobacteria五類細菌中的19個已

3、知屬相似性達到97-100％。其中γ-Proteobacteria和Firmicutes最多，分別占45.78％和42.17％，剩余的12.05％為其余三類。內生細菌的主要優(yōu)勢種群為芽孢桿菌屬(Bacillussp.)、假單胞菌屬(Pseudomonassp.)、泛菌屬(Pantoeasp.)和沙雷氏菌屬(Serratiasp.)。 對同一批甘草樣品進表面滅菌后，以CTAB法提取植物基因組DNA，用引物799f-1492r擴增細

4、菌16SrDNA片段，應用變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術對內生細菌菌群多樣行進行分析。DGGE指紋圖譜顯示野生及栽培甘草不同生長部位的優(yōu)勢內生細菌較為相似，個別部位有其特有的優(yōu)勢菌。對其中的1-9號亮度較高的條帶回收并克隆測序，顯示他們與Genbank中γ-Proteobacteria類細菌中的Enterobactersp.、Pantoeasp.、Klebsiellaoxytoca、Serratiasp.相似性達到97％-100％。

5、 采用變性梯度凝膠電泳(DGGE)方法對可培養(yǎng)內生細菌及非培養(yǎng)內生細進行比對分析，結果顯示可培養(yǎng)細菌的DGGE條帶未能與基因組內生細菌中的條帶產生很好的對應，可培養(yǎng)內生細菌樣品條帶分布在凝膠中較高濃度梯度區(qū)域，而非培養(yǎng)內生細菌條帶的范圍則分布在較低濃度梯度區(qū)域。在野生和栽培的根、莖、葉六組樣品中，僅有栽培莖(CS)中的分離菌株CS1b可以與其非培養(yǎng)內生細菌中的的9號條帶(Pantoeaagglomerans)很好的對應。