WSSV部分基因序列分析及防控WSS免疫增強(qiáng)劑的篩選.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是迄今為止對(duì)全球蝦類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)危害最為嚴(yán)重的一種雙鏈DNA病毒，自1992年我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)首次發(fā)生養(yǎng)殖的斑節(jié)對(duì)蝦感染該病毒大規(guī)模死亡事件，短短10多年間，該病毒席卷了全球的蝦類(lèi)養(yǎng)殖地區(qū)，給世界蝦類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)造成了不可估量的損失。近年來(lái)在江蘇地區(qū)爆發(fā)蝦病，養(yǎng)殖的脊尾白蝦大規(guī)模死亡，嚴(yán)重影響了該地區(qū)海水養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展。
　　 本實(shí)驗(yàn)用PCR的方法在基因水平上對(duì)

2、WSSV感染江蘇沿海養(yǎng)殖脊尾白蝦的分子流行病學(xué)進(jìn)行了研究。即以江蘇沿海典型發(fā)病的脊尾白蝦所攜帶的WSSV為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，提取其基因組，設(shè)計(jì)出了針對(duì)8個(gè)可變區(qū)的特異性PCR引物，研究了該分離株與GenBank上公布的3個(gè)WSSV全基因序列相關(guān)片段上的差異，檢測(cè)了該分離株在可變區(qū)中非同源重復(fù)區(qū)單向重復(fù)單元的數(shù)量差異以及重復(fù)單元中的SNP。結(jié)果顯示，該分離株的8個(gè)片段序列差異主要表現(xiàn)在重復(fù)單元數(shù)量的不同、單核苷酸變異、單核苷酸多態(tài)性和單核苷酸插入

3、，可變區(qū)在進(jìn)化上與中國(guó)株的序列有明顯差異，與臺(tái)灣株和泰國(guó)株的進(jìn)化關(guān)系較近。推測(cè)DY001株可能由其它分離株的共同的祖先通過(guò)序列的缺失、插入和單核苷酸變異進(jìn)化而來(lái)，在進(jìn)化過(guò)程中，某些片段基因與臺(tái)灣株和泰國(guó)株的片段基因出現(xiàn)很大的相似性，江蘇地區(qū)脊尾白蝦感染W(wǎng)SSV可能具有不同于其它分離株的流行病特點(diǎn)。
　　 通過(guò)養(yǎng)殖試驗(yàn)分析了4種添加劑對(duì)脊尾白蝦非特異性免疫功能的影響。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5％海藻糖、0.5％殼聚糖、1.0％蜂膠

4、和1.0％光合細(xì)菌配制成四種免疫實(shí)驗(yàn)飼料，以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照組飼料，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)2組平行，對(duì)體質(zhì)量為3.33±1.24g、體長(zhǎng)為3.50±1.21cm的脊尾白蝦進(jìn)行為期30d的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，分別在第3、6、9、12、15、18、21、24、27及30d進(jìn)行取樣，以肌肉組織中的過(guò)氧化物酶活性(POD)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)及超氧化物歧化酶(SOD)為免疫指標(biāo)，探討了這四種物質(zhì)作為免疫制劑對(duì)脊尾白蝦非特異性免疫效應(yīng)的影響

5、。AKP和ACP是磷酸單脂酶，參與磷酸單脂酶的水解反應(yīng)和磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，加速物質(zhì)的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)蝦類(lèi)蛻殼過(guò)程具有重要作用。POD和SOD都是抗氧化酶，其活性的高低直接反映了機(jī)體清除O2-的能力，作為氧的清除劑參與清除體內(nèi)自由基，在防御機(jī)體衰老及分子損傷等方面有極為重要的作用。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，海藻糖、殼聚糖、蜂膠和光合細(xì)菌在一定的時(shí)間段內(nèi)對(duì)脊尾白蝦組織中的AKP、ACP、SOD及POD等活性都有使其升高的作用;而蜂膠和光合細(xì)菌對(duì)脊尾白蝦