中藥學畢業(yè)論文三棱抗氧化活性成分提取工藝的優(yōu)化研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　　（20 屆）</b></p><p>　　三棱抗氧化活性成分提取工藝的優(yōu)化研究</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級 中藥學(中藥分析與

2、鑒定方向) </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　誠 信 聲 明</b><

3、;/p><p>　　我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設計）是本人在老師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文（設計）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。我承諾，論文（設計）中的所有內(nèi)容均真實、可信。</p><p>　　畢業(yè)論文（設計）作者（簽名）：</p><p>

4、<b>　　年月日</b></p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要Ⅰ–Ⅱ</b></p><p><b>　　1前言1</b></p><p>　　1.1自由基的研究1</p><p&g

5、t;　　1.2三棱研究概括2</p><p>　　2 三棱抗氧化活性成分提取工藝研究3</p><p>　　2.1材料與儀器3</p><p><b>　　2.2實驗方法3</b></p><p>　　2.3結果與分析5</p><p><b>　　2.4討論11</b

6、></p><p><b>　　2.5結論11</b></p><p><b>　　參考文獻13</b></p><p><b>　　綜述15</b></p><p><b>　　致謝23</b></p><p>　　

7、三棱抗氧化活性成分提取工藝的優(yōu)化研究</p><p>　　摘要:目的 以三棱為原料，對三棱抗氧化有效成分提取工藝進行優(yōu)化。方法 通過單因素實驗和響應面分析法對三棱的提取工藝進行優(yōu)化（1）考察乙醇體積分數(shù)（水、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇）、料液比（10:1、15:1、20:1）、提取時間（0.5h、1h、1.5h、2h）、提取次數(shù)（1、2、3次）得到相對最佳提取條件。（2

8、）在單因素試驗的基礎上，以清除率為指標，采用響應面分析法研究乙醇體積分數(shù)、液固比和提取時間對烏梅總黃酮提取率的影響。結果（1）單因素試驗中，乙醇體積分數(shù)70%，料液比15:1，提取時間1.5h，提取次數(shù)2次為相對最佳提取條件。（2）通過響應面分析法得出三棱抗氧化有效成分的最佳提取工藝條件：乙醇體積分數(shù)為72.44%，液固比為20:1 ml/g，提取時間為1.06 h，提取2次。在此條件下三棱清除率為56.59%，與理論值56.59%%基

9、本相符。結論 通過響應面分析法優(yōu)化三棱抗氧化有效成分提取工藝條件簡單可行，可用于三棱中抗氧化有效成分的提取。</p><p>　　關鍵詞：三棱；抗氧化；單因素實驗；響應面分析法；提取工藝優(yōu)化 </p><p>　　Optimization of the extraction process of Rhizoma sparganii antioxidative compo

10、nents</p><p>　　Abstract: Objective Rhizoma sparganii as raw material, the effective components of Rhizoma sparganii antioxidant extraction process was optimized. Methods single

11、factor experiment and response to optimize the extraction process. (1) Investigation of ethanol concentration (water, 50% ethanol, 60% ethanol, 70% ethanol, 80% ethanol, 90% ethanol, 95% ethanol), sol

12、id-liquid ratio (10: 1,15: 1,20: 1), extraction time (0.5h, 1h, 1.5h, 2h), extraction times (1,2,3) to obtain a relative optimum extractio</p><p>　　Keywords: Rhizoma sparganii; antioxidant; single factor; re

13、sponse surface methodology; Extraction Process Optimization</p><p><b>　　1前言</b></p><p>　　1.1 自由基的研究</p><p>　　隨著人類社會的發(fā)展和生物技術的不斷進步,人們對疾病的本質(zhì)加深了認識。自1956年Harman首次提出自由基衰老學說后,大

14、量研究證明,自由基及其誘導的氧化反應是導致生物衰老和人體多種疾病的主要起因之一[1]。</p><p>　　近年來關于中藥抗氧化劑的研究十分引人注目,中草藥是繼香辛料之后的另一個很有潛力的天然抗氧化劑資源。我國臺灣學者對195種中草藥的抗氧化性能進行了系統(tǒng)的篩選和評價,發(fā)現(xiàn)幾乎一半的中草藥表現(xiàn)出抗氧化作用。韓國的Kim[2]等對180種中藥的甲醇提取物進行試驗,發(fā)現(xiàn)其中44種對油酸有強抗氧化能力。郭江寧[3]從6

15、5種中藥中篩選高效天然抗氧化劑,發(fā)現(xiàn)補骨脂、厚樸等具有較強抗氧化活性。其他還有一些學者對蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、氨基酸以及美拉德(Malllard)反應產(chǎn)物的抗氧化性能進行了研究后發(fā)現(xiàn)它們也具有一定抗氧化性能。此外,一些學者還從細菌和酵母中提取抗氧化劑。中藥材富含的黃酮、酚酸類化合物具有明顯的抗氧化活性[4],臨床調(diào)查數(shù)據(jù)顯示,中藥治療一些疾病的療效被認為與其抗氧化活性密切相關[5]。黃酮類化合物具有消炎、抗癌、抑制微生物、清除自由基的功效,對

16、防治糖尿病,降血壓,治療心血管疾病、降低血液膽固醇及延遲衰老等有明顯作用[6]。中藥材中的黃酮化合物是一種天然的抗氧化劑，具有清除自由基的能力，如芹菜提取物具有清除DPPH自由基的作用[7]；金花茶茶花提取物對羥自由基和超氧陰離子具有清除作用[8]；銀</p><p>　　隨著近20年來抗氧化劑的蓬勃發(fā)展,目前已從單純的合成抗氧化劑和食品氧化劑逐漸發(fā)展成為天然抗氧化劑與體內(nèi)自由基清除劑。因此,對抗氧化劑的要求也越

17、來越高,而各種廣泛使用的合成抗氧化劑由于其潛在毒性和致癌作用等逐漸受到人們的排斥,因此從植物中尋找天然、高效、低毒抗氧化劑成為了目前抗氧化劑發(fā)展的一個必然趨勢,并且從天然植物中尋找體內(nèi)自由基消除劑也將是現(xiàn)代醫(yī)藥和保健行業(yè)的發(fā)展趨勢。</p><p><b>　　1.2三棱研究概況</b></p><p>　　三棱系黑三棱科植物黑三棱(Sparganium stolon

18、iferumBuch-Ham)削去外皮的干燥塊莖, 冬季至次年春采挖,除去殘莖及須根, 洗凈削去外皮, 曬干。此中藥味苦、性平, 入肝、脾經(jīng)。具有破血行氣、消積止痛等功能, 是活血化瘀的 常用中藥[3]。現(xiàn)代醫(yī)學研究表明, 三棱具有多種藥理作用和臨床應用,本研究主要是對三棱抗氧化方面的作用本研究的目標是通過單因素試驗確定各單因素最佳值，再利用響應面分析法優(yōu)化三棱抗氧化活性成分的提取工藝，選取三棱抗氧化活性成分提取最佳的工藝條件，為三棱

19、藥材資源的開發(fā)和綜合利用提供了研究依據(jù)。</p><p>　　長期以來,人們?yōu)榱吮ｕr和防止氧化,一直使用合成抗氧化劑如:丁基輕基茵香醚(BHA)、二丁基輕基甲醚(BHT)、沒食子酸丙酷(PG)及特丁基對苯二酚(TBHQ)等。近年來,人們對于這些人工合成抗氧化劑的安全性問題進行了廣泛的研究。世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)、歐共體兒童保護組織(HACSG)、英國生物工業(yè)協(xié)會(BIBRA)、日本、美國的政府和組織的研究

20、表明,合成抗氧化劑具有諸多副作用,如對人體的肝、脾、肺均有不利影響,會誘發(fā)惡性腫瘤等。所以美國食品藥品管理局(FDA)建議在一般認為安全的物質(zhì)中刪去BHT;日本有關衛(wèi)生部門經(jīng)研究曾做出禁止使用BHA的結論;對于TBHQ,雖然美國等少數(shù)國家批準了它在某些油脂中的使用,但歐盟、日本等國家認為它的毒理試驗資料不完善,尚未批準使用?？傊?人們對人工合成抗氧化劑存在不安心理。事實也證明,在人們長期食用的食品中,天然抗氧化劑成分的毒性遠遠低于人工合

21、成的抗氧化劑毒性。因此,近年來從自然界尋求天然抗氧化劑的研究已引起各國科學家的高度重視。</p><p>　　三棱系黑三棱科黑三棱屬植物黑三棱(Sparganiumstoloni ferum Buch.-Ham.)的干燥塊莖,冬季至次年春采挖,洗凈, 削去外皮,晾干,以塊莖入藥。三棱的化學成分復雜, 藥理作用和臨床應用廣泛.現(xiàn)代化學和藥理研究已部分闡明了化學成分和臨床應用之間的聯(lián)系.例如,三棱總黃酮具有抗血小板聚

22、集、抗血栓、鎮(zhèn)痛作用.但是還有很多活性成分未被找到,如抗腫瘤等成分.很多藥理研究也僅停留在提取物階段, 因此對其化學成分和藥理作用進行深入研究,進一步闡明化學成分和臨床應用間的聯(lián)系, 對于指導臨床用藥和新藥開發(fā)是非常有必要的.清除DPPH自由基法是一種快速、簡便、靈敏的評估植物抗氧化能力的可行方法,被廣泛應用到評價各種天然產(chǎn)物的自由基的清除[11]。本文以三棱提取物清除DPPH自由基能力為參考指標,通過考察溶劑乙醇體積分數(shù)、料液比、提取

23、時間、提取次數(shù)等因素,通過響應面分析法確定三棱抗氧化物的最佳提取條件,為三棱藥材的有效開發(fā)和利用提供依據(jù)。</p><p>　　2三棱抗氧化活性成分提取工藝的研究</p><p>　　2.1實驗儀器、材料與試劑</p><p>　　UV2450紫外可見分光光度計（日本島津公司）；HH-4恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市杰瑞爾電器有限公司）；FW100型高速萬能粉碎機（天津市

24、泰斯特儀器有限公司）；FA10048B電子天平（上海精密科學儀器有限公司）。</p><p>　　三棱藥材購于廣東至信中藥飲片有限公司、醋三棱（藥品生產(chǎn)許可證號：粵20110108。95%乙醇、鹽酸、1，1-二苯基-2苦肼基（DPPH）、水為超純水。</p><p>　　2.1.1藥材和試劑的處理</p><p>　　（1）三棱藥材的處理：將藥材于40℃干燥、用粉碎

25、機粉碎過40目篩,貯于干燥器中置暗處保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　?。?）95%乙醇的處理：將95%乙醇用酒精計分別配置成50%、60%、70%、80%、90%、100%濃度乙醇于容器中保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　　（3）1，1-二苯基-2苦肼基（DPPH）的處理：0.1mmol/LDPPH溶液的配制：精密稱定DPPH3.94mg，加95%乙醇使溶解，并用95%乙醇定容至100ml容量瓶

26、中，置于冰箱，備用。</p><p><b>　　2.2實驗方法</b></p><p>　　2.2.1對DPPH自由基的抑制實驗</p><p>　　分別量取各提取溶劑下的提取液2ml于試管中，分別加入2mlDPPH溶液，搖勻，置于陰暗處反應30min,后在517nm處測定吸光度值，記為Ai；再分別量取2ml提取液，分別加入2ml95%乙醇，

27、搖勻，置暗處30min測吸光度值，記為Aj；再分別量取2ml95%乙醇，分別加入2mlDPPH溶液，搖勻，置暗處30min后測吸光度值，記為A0。</p><p>　　清除率%=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%</p><p>　　2.2.2單因素實驗設計</p><p>　　（1）乙醇濃度的影響</p><p>　　精密稱取

28、1g三棱細粉,分別加入50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%濃度乙醇20ml，回流提取2h，抽濾,后用乙醇溶解定容于100mL容量瓶中搖勻備用。</p><p>　?。?）回流提取時間的影響</p><p>　　以70%乙醇為提取溶劑,其他條件同（1）,考察不同回流提取時間(0.5h、1h、1.5h、2h)對提取物清除DPPH自由基能力的影響。</p>&l

29、t;p><b>　?。?）料液比的影響</b></p><p>　　以1h為超聲提取時間,其他條件同（2）,考察不同料液比（l:10、1:15、1:20）對提取物清除DPPH自由基能力的影響。</p><p>　?。?）提取次數(shù)的影響</p><p>　　以1:15為料液比,其他條件同（3）,考察不同超聲提取次數(shù)（1、2、3）對提取物清除

30、DPPH自由基能力的影響。</p><p>　　2.2.3響應面實驗設計</p><p>　　在單因素實驗基礎上，固定提取2次，選取乙醇體積分數(shù)、液固比、提取時間為響應變量，根據(jù)Box-Behnken中心組合設計建立三因素三水平數(shù)學模型[12]，以DPPH清除率為響應值，利用Design Expert 8.05b軟件進行數(shù)據(jù)擬合，試驗因素及水平見表1，試驗設計見表2。</p>

31、<p>　　表1響應面實驗的因素和水平設計表</p><p><b>　　表2響應面法設計</b></p><p>　　試驗號乙醇濃度(%) 提取時間(h) 料液比（ml/g) 清除率（%）160.001.5015.00270.001.0015.00380.001.5015.00470.000.

32、5010.00570.001.0015.00680.001.0020.00760.001.0010.00860.000.5015.00970.001.0015.001070.001.5010.001170.001.0015.001270.001.5020.001380.000.5015.001470.000.5020

33、.001560.001.0020.001670.001.0015.001780.001.0010.00</p><p>　　2.3實驗結果與分析</p><p>　　2.3.1單因素實驗</p><p>　　（1）乙醇濃度的影響</p><p>　　不同濃度乙醇對提取物清除DPPH自由基的能力的測定結果如

34、圖1所示。</p><p>　　圖1乙醇濃度對提取物清除DPPH自由基能力的影響</p><p>　　從圖1可知,70%乙醇提取物抗氧化能力最強。50%濃度乙醇提取物抗氧化能力低,不適宜用作提取劑。乙醇體積分數(shù)大于70%時，清除率會隨濃度的增加而下降。所以應該選擇乙醇體積分數(shù)為70%。根據(jù)相似相溶的原理，乙醇體積分數(shù)的增大會使溶液黏度增加，從而影響黃酮類化合物的溶出，乙醇體積分數(shù)與提取液極

35、性最相似時，能使抗氧化活性成分達到最大值。另外，乙醇體積分數(shù)過高，會使一些醇溶性雜質(zhì)成分溶出增多，導致抗氧化活性物質(zhì)提取率下降。</p><p>　　（2）回流提取時間的影響</p><p>　　圖2回流提取時間對提取物清除DPPH自由基能力的影響</p><p>　　由圖2可知，當提取時間在0.5 h~1 h范圍內(nèi)時，清除率隨提取時間的增大而上升，提取時間為1h時

36、，提取率最高。之后，清除率隨時間增多而稍稍降低，這可能是隨著提取時間增多導致一些雜質(zhì)溶出從而影響抗氧化活性成分溶出導致，所以本實驗選擇提取時間為1h。</p><p><b>　　（3）料液比的影響</b></p><p>　　圖3料液比對提取物清除DPPH自由基能力的影響</p><p>　　由圖3可知，當料液比為15:1時，清除率最大，所以

37、選擇料液比在15:1為宜。清除率隨料液比增大到一定值后呈下降趨勢，這可能是隨著溶劑體積的增大，其他一些非抗氧化活性物質(zhì)溶解度也逐漸增大，進而致使清除率的下降。</p><p>　?。?）提取次數(shù)的影響</p><p>　　圖4提取次數(shù)影響提取物清除DPPH自由基能力</p><p>　　由圖4可知，當提取次數(shù)為3次時，三棱抗氧化活性物質(zhì)提取率最高，但第二次第三次清除

38、率相差不到1%，提取次數(shù)的增多并不會明顯提高清除率，考慮到節(jié)省試驗時間，所以確定最佳提取次數(shù)為2次，不再進行優(yōu)化。</p><p>　　2.3.2響應面實驗</p><p>　　表3響應面法設計與試驗結果</p><p>　　試驗號 乙醇濃度(%) 提取時間(h) 料液比（ml/g) 清除率（%）160.001.5015.002

39、8.65270.001.0015.0045.55380.001.5015.0028.36470.000.5010.0043.98570.001.0015.0053.93680.001.0020.0048.46760.001.0010.0014.06860.000.5015.005.41970.001.0015.0049.221070.0

40、01.5010.0015.191170.001.0015.0046.61270.001.5020.0048.71380.000.5015.0044.851470.000.5020.0048.71560.001.0020.0030.291670.001.0015.0052.361780.001.0010.0045.37</p><

41、p>　　由表4可知，回歸模型的P<0.01，表明該模型整體達到高度顯著水平，即用該回歸方程描述各因子與響應值之間的關系時，因變量與全體自變量之間的關系是顯著的，說明了該方法是可靠的。失擬項P=0.0657>0.05，差異不顯著，表明無失擬因素存在，因此可以用該模型分析和預測三棱抗氧化有效成分提取。各因素中一次項A（乙醇體積分數(shù)）和C（提取時間）對黃酮的提取影響差異高度顯著（P<0.01），二次項A2對黃酮的提取影

42、響差異顯著；而B、AB、AC、BC、B2、C2對黃酮的提取影響差異不顯著，表明各影響因素與黃酮提取率之間不是簡單的線性關系。此外，從P值可看出各因素對總黃酮提取率的影響次序為（從大到小排列）：A>C>B，即乙醇體積分數(shù)>料液比>提取時間。</p><p>　　表4響應面分析擬合回歸模型的方差分析結果</p><p>　　響應面坡度陡峭程度和等高線橢圓形狀反映出交互效

43、應的強弱趨勢，如果響應面坡度相對較為平緩，表示其可以忍受處理條件的變異，而不影響響應值大小；相反，如果坡度非常陡峭，表明處理條件的變異對響應值的影響非常大，即響應值對于處理條件的改變非常敏感[13]。如果等高線呈橢圓形表示兩因素交互作用顯著，而圓形則與之相反[14]。為確定乙醇體積分數(shù)、料液比、提取時間3個因素和交互作用對三棱抗氧化活性成分提取率的影響，根據(jù)回歸方程繪出響應面及等高線圖如下。從圖5-圖7可看出，3個因素之間的交互作用對三

44、棱抗氧化活性成分提取率的影響均不顯著，表現(xiàn)為曲線較平滑，與方差分析結果相一致。</p><p>　　圖5乙醇體積分數(shù)和料液比對清除率影響的響應面和等高線</p><p>　　圖6提取時間和乙醇體積分數(shù)對清除率影響的響應面和等高線</p><p>　　圖7料液比和提取時間對清除率影響的響應面和等高線</p><p>　　2.3.4 最佳提取工藝

45、及驗證 </p><p>　　表5響應面分析擬合回歸模型的最佳提取工藝結果</p><p>　　Number 濃度 時間 料液比 清除率 Desirability</p><p>　　1 72.44 1.06 20.00 56.5959 0.5412

46、 72.46 1.05 20.00 56.593 0.5413 72.75 1.03 20.00 56.5778 0.5414 73.15 1.01 20.00 56.5203 0.5405 73.13 1.07 20.00 56.514

47、 0.5406 71.48 1.04 20.00 56.4208 0.5397 78.90 0.50 10.00 52.7079 0.500</p><p>　　通過Design Expert 8.05b軟件得到的三棱總黃酮最佳提取工藝為乙醇體積分數(shù)72.44%，液固比20ml/g，提取時間為

48、1.06 h，提取2次，清除率理論值為56.5959%。考慮到實際操作的方便性，選擇最佳提取工藝參數(shù)為：乙醇體積分數(shù)為72.44%，料液比20:1 ml/g，提取時間1.06 h，提取2次，在此條件下，重復三次實驗，每次稱取三棱藥材粉末1.000 g，得到DPPH自由基清除率為57.2854%。與理論值相比，其相對誤差為1.218%，優(yōu)化結果可靠。</p><p><b>　　2.4討論</b&g

49、t;</p><p>　　響應面法的優(yōu)點是在試驗條件優(yōu)化過程中可以連續(xù)地對試驗因素的各個水平進行分析，而克服了正交試驗只能對一個個孤立的試驗點進行分析和不能給出直觀圖形的缺陷，所以響應面法被廣泛應用于試驗設計與工藝優(yōu)化研究[15]。本實驗選擇以乙醇溶液作為提取溶劑，是因為三棱抗氧化活性成分主要為黃酮類物質(zhì)屬于中等極性物質(zhì)，在乙醇溶液中比水更能溶解。實驗主要考察了乙醇濃度、液固比和提取時間這三個因素，結果顯示，對三

50、棱抗氧化活性成分影響最主要的因素是乙醇濃度，最小的因素是提取時間，所以在進行三棱抗氧化活性成分提取時，要特別注意乙醇濃度合不合適。</p><p>　　本人在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，三棱提取液多為淡黃色透明溶液，猜測提取液中的黃酮類物質(zhì)為三棱抗氧化活性成分中的主要成分。</p><p><b>　　2.5結論</b></p><p>　　本實驗初次采用

51、響應面分析法對烏梅總黃酮提取工藝進行優(yōu)化，得出三棱總黃酮提取的最佳工藝為乙醇體積分數(shù)為72.44%，液固比20:1 ml/g，提取時間1.06 h，提取2次。為方便提取操作，可進一步優(yōu)化為乙醇體積分數(shù)為72%，液固比20:1 ml/g，提取時間1h，提取次數(shù)為2次。本實驗優(yōu)化得出的工藝簡單，穩(wěn)定性好，操作容易。為三棱抗氧化活性成分的開發(fā)研究提供理論依據(jù)。</p><p><b>　　參考文獻</b

52、></p><p>　　[1]Cheng,F.C.,J.F.,Tsai,T.H.Hydroxyl radical in living systems and its separation methods [J]. Joumral of Chromatography B,2002,781:481-496</p><p>　　[2]Kim,S.Y., Kim,J.H.Antioxida

53、nt activities of seleeted oriental herb extracts. [J]Journal of the Ameriean Oil Chemists'Society,1994,71(60):5-57. </p><p>　　[3]戴仕林，吳啟南，殷婕。中藥三棱的現(xiàn)代研究進展[J]。中國民族民間醫(yī)藥，2011,17（1）：63-64.</p><p>　

54、　[4]陳季武等.天然黃酮化合物清除DPPH的構效關系[J].發(fā)光學報,2005,26(5):664.</p><p>　　[5]楊建雄,王麗娟,田京偉.槐米提取液對小鼠抗氧化能力的影響[J].陜西師范大學學報:自然科學版,2002,30(2):87.</p><p>　　[6]潘國慶,梁永欣.黃酮類化合物結構與抗氧化活性關系研究[J].青?？萍?2005,(3):28-30.</p

55、><p>　　[7]Kim Le, Francis Chiu, Ken NG. Identification and quantification of antioxidants in Fructus lycii [J].food chemistry,2007,105(1):353-363.</p><p>　　[8] 劉丹.芹菜黃酮類化合物的提取純化及其抗氧化性研究[D].華東：華東理工大學

56、，2014.</p><p>　　[9] 李石容.金花茶茶花黃酮類化合物的分離純化及抗氧化活性的初步研究[D].湛江：廣東海洋大學,2012.</p><p>　　[10]張鵬.銀杏葉黃酮的微波提取及其抗氧化性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科，,2009,37（12）：5496-5497.</p><p>　　[11]王喆, 張瑾峰,付桂芳.莪術、三棱對人肺癌細胞凋亡的影響[

57、J].首都醫(yī)科大學學報, 2001,18(2):4-7.</p><p>　　[12]侯淑珍, 王景媛, 王娜, 等. 響應面分析法優(yōu)化牛蒡根多糖提取工藝[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2012,18(11):21.</p><p>　　[13]陳莉,屠康,王海,等.采用響應面法對采后紅富士蘋果熱處理條件的優(yōu)化[J].農(nóng)業(yè)工程學報,2006,22(2):159-163.</p>

58、<p>　　[14]徐媛,王魯峰,徐曉云,等.響應面法優(yōu)化紅葡萄柚番茄紅素的提取工藝[J].食品科學,2010,31(22):255-259.</p><p>　　[15]徐秀泉, 虞倩, 徐穎. 趕黃草總黃酮超聲提取工藝的響應面法優(yōu)化及其體外抗氧化活性分析[J].中國實驗方劑學雜志, 2012,18(18):38.</p><p><b>　　綜述</b&g

59、t;</p><p>　　三棱的化學成分和藥理作用研究進展</p><p>　　1三棱的化學成分研究</p><p><b>　　（1）揮發(fā)油類</b></p><p>　　朱鳳妹[1]等利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用方法從三棱揮發(fā)油中分離并確認出32種化學成分。然后用峰面積歸一化法通過G1710BA化學站數(shù)據(jù)處理

60、系統(tǒng)得出各化學成分在揮發(fā)油中的百分含量, 其中主要成分為 3, 5, 6, 7,8, 8a- 六氫-4, 8a-二甲基-6- (11-methylethyenyl)-2 (1H)萘酮 (12.95%) , 2, 4, 6, 7, 8, 8a-六氫-5 (1H) -黃酮 (10. 72%) ,十氫-4a-甲基-1-萘(5. 78%) , 3H-3a , 7-甲撐苷菊環(huán)烴 (5. 69%) 。</p><p><

61、;b>　?。?）脂肪酸</b></p><p>　　三棱中所含有機酸主要為脂肪酸類。張淑運[ 2]應用GC-MS聯(lián)用色譜儀對混合脂肪酸進行了分析, 鑒定了21種脂肪酸, 占總脂肪酸含量97.7%, 其中十六酸、十八二烯酸、十八烯酸、十八酸含量較高, 占混合脂肪酸90%。張衛(wèi)東[3]等從三棱的乙醇提取物中分離得到了三棱酸,將其結構鑒定為6, 9, 10-三羥基-7-十八烯酸。</p>

62、<p><b>　?。?）皂苷類</b></p><p>　　張衛(wèi)東[ 3]等先后從三棱乙醇提取物中分得了β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、△5, 6膽酸甲酯-3-O-α-L-鼠李糖 (1→4) -β-D-吡喃葡萄糖苷、△5-膽酸甲酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸- ( 1→4) -α-L-鼠李糖苷、△5-膽酸甲酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。Shin , SooYo

63、ng[4]等分離得到β-谷甾醇-3-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。</p><p><b>　　（4）黃酮類</b></p><p>　　張衛(wèi)東[ 3]等從三棱的乙醇提取物中分離得到了3個黃酮類化合物, 分別為芒柄花素、山奈酚、5, 7, 3, 5-四羥基黃酮醇-3-O-β-D-吡喃葡糖糖苷, 后者為新的天然產(chǎn)物。</p><p><b>

64、;　?。?）苯丙素類</b></p><p>　　三棱中含有苯丙素類，主要以甘油酯和配糖體的形式存在。Shirota[ 4]等從三棱的甲醇提取物中分離得到了1,3-O-di-p-coumaroylglycerol等8個苯丙素類化合物;YingXiong[5]等乙醇提取物氯仿萃取部分分離得到2個苯丙素類化合物,β-D-(1-O-Acety-3-O-cis-feructo-furanosylα-D-2,

65、3, 6-O-triacetylg lucopyranoside 和1-O-cis-Feruloyl-3-O-trans-p-coumaroylglycer -ol 。 </p><p>　　2三棱的藥理學作用研究</p><p><b>　　（1）抗氧化作用</b></p><p>　　三棱的黃酮類能夠有效清除體內(nèi)的自由基(Free Radi

66、cal)及毒素，預防、減少疾病的發(fā)生；消炎、抗過敏、廣譜抗菌、抗病毒作用。解除醇中毒、保肝護肝。清熱解毒、祛風濕、強筋骨、抗婦女更年期綜合癥等功效。它們與維生素C有協(xié)同效應，可以使維生素C在人體組織中趨于穩(wěn)定。本文在單因素的基礎上通過響應面分析法得出三棱總黃酮提取的最佳工藝為乙醇體積分數(shù)為72.44%，液固比20:1 ml/g，提取時間1.06 h，提取2次，對DPPH自由基清除率為57.2854%。 </p>&l

67、t;p>　　（2）抗血小板凝集和抗血栓作用</p><p>　　胡旭光[ 6]等以凝血時間, 偏癱恢復數(shù)為指標,研究了關于不同三棱提取物的抗凝血、抗血栓作用。結果表明, 三棱總黃酮具有較強的抗血小板聚集和抗血栓作用, 提示總黃酮是三棱活血化瘀的有效活性成分。</p><p>　　（3）對血液流變性的影響</p><p>　　黨春蘭[7]等運用生物力學理論 ,

68、研究了中藥三棱對血液流變學指標的影響。 結果表明, 三棱組的全血粘度、血細胞壓積以及血沉速率與空白對照組相比有明顯減小 (P<0. 01)。所以作者認為三棱活血祛瘀的藥理作用機理為血細胞壓積和血沉速率的顯著減小導致全血粘度降低,起到了活血祛瘀的功效。</p><p><b>　?。?）鎮(zhèn)痛作用</b></p><p>　　邱魯嬰[8] 等采用小鼠扭體法、熱板法,

69、以阿司匹林為陽性對照,對三棱的鎮(zhèn)痛作用進行研究。結果表明,三棱總黃酮能明顯減少因醋酸刺激引起的扭體反應的次數(shù)，提高小鼠的痛閾值，有顯著鎮(zhèn)痛作用。鄧英君[9]采用小鼠扭體法、熱板法, 對三棱飲片的氯仿、醋酸乙酯、正丁醇等提取物進行了鎮(zhèn)痛及抗凝血作用的研究。 結果表明，三棱不同提取物均能明顯減少小鼠因醋酸刺激引起的扭體反應次數(shù),能顯著提高小鼠因熱刺激而引起疼痛反應的痛閾值，有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其中以醋酸乙酯提取物作用最強而持久。</p&

70、gt;<p>　　（5）對心腦血管的作用</p><p>　　于永紅[9] 等研究了三棱對培養(yǎng)的兔胸主動脈中膜平滑肌細胞 (SMC)DNA合成的影響。結果表明,三棱提取物可以抑制兔動脈SMC的增殖。 而SMC向內(nèi)膜的增殖是動脈粥樣硬化 (AS)和經(jīng)皮冠狀動脈(PTCA)術后再狹窄的主要原因。此研究為防治AS及PTCA術后再狹窄提供了依據(jù)。曾慶杏等在wistar鼠大腦中動脈阻塞的局灶性腦缺血模型上研究

71、了其對腦電圖的影響。結果表明, 復方三棱、莪術、黃芪能增加梗死側(cè)腦電圖波幅,減輕神經(jīng)功能缺損程度,減小梗死灶體積。于永紅[9]等研究了三棱對家兔實驗性AS病灶的消退作用及原癌基因 C-myc, C-fs, V-sis表達的影響。 結果表明, 三棱具有不同程度促進主動脈AS 病灶及冠狀動脈AS病灶消退的作用 (與對照組比較 P<0. 01);同時還具有不同程度抑制原癌基因 C-myc, C-fos, V-sis表達的作用 (與對照組

72、比較P<0. 01)。 </p><p><b>　?。?）抗腫瘤作用</b></p><p>　　王喆[10] 等人運用 EPICS-ELITE型流式細胞儀, 研究三棱對人肺癌A549細胞凋亡的誘導作用。結果顯示三棱對人肺癌細胞的凋亡具有顯著的誘導作用。徐立春[11]等用 S E(三棱、莪術)提取物對經(jīng)過絲裂霉素滅活處理后的K562腫瘤細胞進行修飾異構,

73、 修飾后的腫瘤細胞 ( K562)作為瘤苗免疫小鼠, 14天后再去接種B16小鼠惡性黑色素瘤細胞觀察抗瘤效應。而結果顯示, SE中藥修飾腫瘤細胞疫苗可以明顯增強對B16的抗瘤效應。陳平等[12]對三棱、莪術的揮發(fā)油成分進行生物修飾構建, 經(jīng)修飾SGC-7901瘤苗治療荷瘤小鼠, 能明顯阻止胃癌細胞轉(zhuǎn)移。</p><p><b>　?。?）其它作用</b></p><p&g

74、t;　　裘柱婷[13] 等研究發(fā)現(xiàn)三棱、莪術有保護肝細胞、 減輕肝細胞變性壞死, 恢復肝細胞結構及功能作用;減少纖維化發(fā)展, 促進纖維組織降解作用。邱頌平[ 14]等研究了三棱、莪術對肺纖維化大鼠的肺形態(tài)學影響。結果表明,三棱、莪術能有效地抑制博來霉素引起的肺纖維形成。XuLuMing[15]等研究了三棱提取物的降糖活性。結果表明,濃度為10μg/ml的三棱乙酸乙酯提取物,香草酸及對羥基苯甲醛的α-糖苷酶抑制率分別為72. 71%,20

75、. 13%和30. 42%?！?</p><p><b>　?。?）總結</b></p><p>　　三棱的化學成分復雜, 有多種藥理活性。黃酮類、皂苷類成分的抗凝血、鎮(zhèn)痛作用是研究的熱點。近年來, 三棱的新成分、新活性不斷被發(fā)現(xiàn), 如β-D-(6 -Otrans-feruloyl)fructofuranosyl-α-D-O-glu-copyranoisde等苯丙素類

76、化合物, 三棱乙酸乙酯提取物的降糖活性等。目前, 已經(jīng)闡明三棱總黃酮具有抗血小板聚集、抗血栓、鎮(zhèn)痛、抗氧化等作用, 但三棱的研究仍存在諸多問題: (1)有效成分不明確, 如抗腫瘤活性成分和降血糖活性成分;藥理研究仍處于提取物階段。(2)三棱中化學成分含量低,如何正確合理的評價三棱藥材品質(zhì)尚待研究。(3)三棱資源的減少。近年來, 隨著城市化的深入, 大量的土地被征用以及種植三棱收益不高等原因造成三棱產(chǎn)區(qū)減小甚至消失如河南鄭州產(chǎn)區(qū)。(4)水

77、污染對三棱品質(zhì)的影響。由于生長環(huán)境特殊, 三棱極易受到水污染的影響。因此對三棱化學成分和藥理活性的深入研究, 進一步闡明化學成分和臨床應用的關系;采取相關措施, 有效地保護三棱資源以及減少水污染對三棱品質(zhì)的影響對于指導臨床用藥和新藥研究具有重要意義。</p><p><b>　　總結</b></p><p>　　本文對三棱黃酮類化合物抗氧化性能進行了研究,為該資源的綜

78、合開發(fā)利用提供理論基礎。三棱的化學成分復雜, 含揮發(fā)油類、脂肪酸、皂苷類、苯丙素類。有多種藥理活性。黃酮類、皂苷類成分的抗凝血、鎮(zhèn)痛作用是研究的熱點。</p><p>　　近年來, 三棱的新成分、新活性不斷被發(fā)現(xiàn)。目前, 已經(jīng)闡明三棱總黃酮具有抗血小板聚集、抗血栓、鎮(zhèn)痛、抗氧化等作用, 但三棱的研究仍存在諸多問題: (1)有效成分不明確, 如抗腫瘤活性成分和降血糖活性成分;藥理研究仍處于提取物階段。(2)三棱中化

79、學成分含量低,如何正確合理的評價三棱藥材品質(zhì)尚待研究。(3)三棱資源的減少。近年來, 隨著城市化的深入, 大量的土地被征用以及種植三棱收益不高等原因造成三棱產(chǎn)區(qū)減小甚至消失如河南鄭州產(chǎn)區(qū)。(4)水污染對三棱品質(zhì)的影響。由于生長環(huán)境特殊, 三棱極易受到水污染的影響。因此對三棱化學成分和藥理活性的深入研究, 進一步闡明化學成分和臨床應用的關系;采取相關措施, 有效地保護三棱資源以及減少水污染對三棱品質(zhì)的影響對于指導臨床用藥和新藥研究具有重要

80、意義。</p><p>　　中藥三棱中的黃酮類化合物具有消炎、抗癌、抑制微生物、清除自由基的功效,對防治糖尿病,降血壓,治療心血管疾病、降低血液膽固醇及延遲衰老等有明顯作用。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1]朱鳳妹,杜彬,李軍,等.利用GC-MS技術分析三棱揮發(fā)油化學成分[J] .天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2

81、010(22):253-256.</p><p>　　[2]張淑運.三棱化學成分研究 [J] .中國中藥雜志, 1995, 20 (8) :486-487. </p><p>　　[3]張衛(wèi)東,王永紅,秦路平.中藥三棱水溶性成分研究[J].中草藥,1996, 27 (11):643-645.</p><p>　　[4] OsamuShirota, Setsuko a

82、nd Motoyoshi Satake. Chemical constituents of Chinese Folk medicine“SanLeng”, spaganium stoloniferum.JNatProd[J],1996, 59:1242-2451. </p><p>　　[5] YingXiong.New Chemical Constitu-ents from the Rhizomes of Sp

83、arganiums to loniferun[J].ArchPharmRes, 2009,32 (5):17-720.</p><p>　　[6]胡旭光,鄧小彗,李淑賢.不同三棱提取物藥理活性的比較研究[J].陜西中醫(yī), 2009, 30(8):1091-1093.</p><p>　　[7]黨春蘭,辛小南.三棱對家兔血液流變學的影響 [J].河南醫(yī)科大學學報, 1996, 31 (3):

84、31-32.</p><p>　　[8]邱魯嬰, 毛春琴, 陸兔林.三棱總黃酮鎮(zhèn)痛作用研究 [J].時珍國醫(yī)國藥, 2000, 11 (4) :291-292.</p><p>　　[9]于永紅,胡昌興,孟衛(wèi)國.茵陳、赤芍、三棱、淫羊藿對家兔實驗性動脈粥樣硬化病灶的消退作用及原癌基因C-myc、C-fos、V-sis表達影響[J].湖北民族學院學報 (醫(yī)學版), 2001, 18 (2)

85、:4-7.</p><p>　　[9]鄧英君.三棱不同提取物鎮(zhèn)痛及抗凝血作用研究 [J].時珍國醫(yī)國藥, 1999,10(12):882-883.</p><p>　　[10]王喆, 張瑾峰,付桂芳.莪術、三棱對人肺癌細胞凋亡的影響[J].首都醫(yī)科大學學報,2001, 18 (2):4-7.</p><p>　　[11]徐立春,孫振華,陳志琳等.三棱、莪術提取物修飾

86、的腫瘤細胞疫苗的非特異抗癌實驗研究 [J].癌癥, 2001, 20 (2):1380-1382.</p><p>　　[12]陳平,孫振華,陳志琳等.傳統(tǒng)中藥三棱、莪術修飾構建中西醫(yī)結合腫瘤細胞疫苗的研究 [J].中華實用中西醫(yī)雜志, 2004, 4 (17):3615-3617. </p><p>　　[13]裘柱婷,單長民, 姜學連等.三棱、莪術抗大鼠免疫性肝纖維化研究[J].中國中

87、藥雜志, 2002, 27 (12):929-932.</p><p>　　[14]邱頌平,王英豪楊素芳.破血化瘀藥三棱、莪術對肺纖維化大鼠模型肺形態(tài)學及羥脯氨酸的影響 [J].福建醫(yī)科大學學報, 2007, 41 (5):412-414. </p><p>　　[15] MingLuXu .Antioxidant and α- Glucosidase In-hibitory Activi

88、ties of the Extract from Sparganium Stoloniferum Buch. -Ham.Root and Its Constituent Componds[J].J Food Sci and Nutr,2009, 14:354-357. </p><p><b>　　致 謝</b></p><p>　　本論文是在管老師的悉心指導