超敏pcr宣講張忠新

1、,高靈敏度病毒載量檢測(cè)在肝炎診療中的意義張忠新,HBV 感染是全球性衛(wèi)生問(wèn)題,33% 的人在一生中會(huì)感染HBV;成年感染者中5%-10%會(huì)轉(zhuǎn)為慢性乙肝, 全球約有3.5億慢性HBV感染者; 每年,有100萬(wàn)人死于與乙型肝炎相關(guān)的肝硬化或者肝癌;=> 每30s 奪走一個(gè)生命 感染率最高的區(qū)域在亞洲,非洲.,Lavanchy. J Viral Hepat 2004; World Health Organization,

2、 2008; Elgouhari, Cleve Clin J Med 2008,不同的標(biāo)志物提供不同的診斷以及治療監(jiān)控的信息,Modified from Pawlotsky et al. Gastroenterol 2008,慢性乙型肝炎,干擾素或口服核苷（酸）類(lèi)似物,口服核苷（酸）類(lèi)似物或干擾素,觀察，如ALT升高，或肝組織炎癥壞死≥G2,或纖維化≥S2,無(wú)肝硬化,有肝硬化,HBeAg+HBV DNA≥20000 IU/

3、mL,HBeAg-HBV DNA≥2000 IU/mL,ALT≥2ULN,ALT<2ULN,ALT≥2ULN,失代償期,代償期,HBeAg+HBV DNA≥2000 IU/mL,HBeAg-HBV DNA≥200 IU/mL,HBV DNA可檢測(cè)到,口服核苷（酸）類(lèi)似物,中國(guó)慢性乙型肝炎防治指南（2010版）,高靈敏度HBV DNA檢測(cè)能更準(zhǔn)確判斷治療起點(diǎn),啟動(dòng)治療,<60 IU/mL完全應(yīng)答,>2000

4、 IU/mL不充分應(yīng)答,60-2000 IU/mL部分應(yīng)答,Week 12: 鑒別原發(fā)性無(wú)應(yīng)答,Week 24: 療效早期預(yù)測(cè),,Keeffe et al Clin Gastroenterol Hepatol 2007,高靈敏度HBV DNA檢測(cè)能更準(zhǔn)確判斷應(yīng)答情況,QL=檢測(cè)下限 (聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)-檢測(cè)不到 <300 copies/mL 用 COBAS® Amplicor?) ?從鎖定數(shù)據(jù)

5、庫(kù)來(lái)的初步數(shù)據(jù),Di Bisceglie et al. 2006,24周HBV DNA, copies/mL,2 年時(shí)PCR陰性（%）,高精準(zhǔn)HBV DNA檢測(cè)能更準(zhǔn)確預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期療效,高靈敏度HBV DNA檢測(cè)比普通試劑能更準(zhǔn)確判定病毒學(xué)突破,,,,HBV DNA (log10 IU/mL),,5.0,4.0,3.0,2.0,1.0,6.0,病毒學(xué)突破,Antiviral drug,Months,6,0,12,,,,18,,

6、16,,,普通試劑,COBAS Taqman,檢測(cè)靈敏度,,,,,,,,南方醫(yī)院用67例治療前為HBV DNA強(qiáng)陽(yáng)性樣本，治療24周后采用cobas TaqMan HBV檢測(cè)與普通檢測(cè)試劑結(jié)果對(duì)比,67例患者: HBeAg(+)，ALT≥2ULN，HBV DNA＞ 6.0 log10 IU/mL--治療前用cobas檢測(cè)結(jié)果為7.90±0.73 log10 IU/mL--治療前用普通試劑檢測(cè)結(jié)果為7.11±0

7、.44 log10 IU/mL,普通PCR法 “假陰性”率高達(dá)44% (26/59),cobas高靈敏度HBV DNA檢測(cè)能更準(zhǔn)確判斷治療終點(diǎn)，有效防漏檢（實(shí)例1）,,COBAS HBV,430例血漿Realtime PCRHBV<1000 copies/mL,222例（51.6%）>20 IU/mL,208/430(48.4%)<20 IU/mL,,,,,,,,64/222（28.38%）E+02 copie

8、s/mL,,,2.0 test,107/222（48.20%）E+03 copies/mL,35/222（15.77%）E+04copies/mL,7/222（3.15%）E+05 copies/mL,2/222（0.9%）E+07copies/mL,7/222（3.15%）E+06copies/mL,,,經(jīng)cobas TaqMan HBV 檢測(cè)后，共有158/430（36.7%）病毒載量> 1000 copies/mL,C

9、obas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV病毒載量系統(tǒng)對(duì)慢性乙型肝炎抗病毒治療監(jiān)測(cè)的意義李敏偉 沃健兒 倪淑君 王 靜 李蘭娟浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院傳染病診治國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室Data on file,cobas高靈敏度HBV DNA檢測(cè)能更準(zhǔn)確判斷治療終點(diǎn)，有效防漏檢（實(shí)例 2）,高靈敏度HBV DNA檢測(cè)的意義,更準(zhǔn)確判斷治療起點(diǎn)更準(zhǔn)確判斷應(yīng)答情況更準(zhǔn)確預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期療效更早發(fā)現(xiàn)病毒學(xué)突破更準(zhǔn)確預(yù)測(cè)耐藥發(fā)生

10、更準(zhǔn)確判斷治療終點(diǎn),,正確的臨床決策,全球有2億人感染HCV流行率2.2–3.0%1–31.7億慢性攜帶者2HCV相關(guān)的肝臟疾病每年奪取超過(guò)25萬(wàn)人的生命 1~80% 的感染者沒(méi)有任何的臨床癥狀5,640–85% 的感染著未得到診斷7–12,HCV臨床背景,1Chevaliez. Clin Microbiol Infect 2011; 2WHO 2003; 3Lavanchy. Liver Int 2009; 4Wiessi

11、ng et al. Eurosurveillance 2008; 5Hoofnagle. Hepatology 2002; 6Lemon et al. Field’s Virology 2007; 7http://www.thewellingtonliverunit.com/treatments-hepatitis-c.asp; 8Schlosser et al. EASL 2009; 9Vermehren et al. DGVS

12、2010; 10Gane. New Zealand Doctor 2007; 11Wild. Gastroenterology and Endoscopy News 2010; 12http://www.hepatitiscmsg.org/hep-c-facts--stats.html.,國(guó)際指南明確提出高檢測(cè)靈敏度要求,HCV RNA檢測(cè)應(yīng)使用高靈敏度的試劑（最低檢出限＜15 IU/mL）,APASL指南,“治療HCV感染的期望臨床

13、終點(diǎn)是清除病毒，即采用最敏感的方法也無(wú)法檢測(cè)到血清HCV病毒RNA，因此實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部檢測(cè)應(yīng)采用real-time PCR的方法對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)”,,,,持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(SVR),,無(wú)應(yīng)答,基線(xiàn),治療,復(fù)發(fā),,部分應(yīng)答,UndetectableHCV RNA,HCV RNA,,,,反彈,HCV RNA 檢測(cè)限,,,療效判定時(shí)間點(diǎn),高靈敏度HCV RNA檢測(cè)能更有效執(zhí)行RGT策略,RVR (Rapid Virus Response ,快速病

14、毒學(xué)應(yīng)答), EVR (Early Virus Response ,早期病毒學(xué)應(yīng)答)DVR (Delayed Virus Response, 延遲病毒學(xué)應(yīng)答), NR (Null Response無(wú)應(yīng)答), PR (Partial Response,部分應(yīng)答),cobas高靈敏度HCV RNA檢測(cè)更準(zhǔn)確判斷應(yīng)答模式,中國(guó)基因1型患者RGT治療方案基于中國(guó)現(xiàn)有平臺(tái)檢測(cè)（不全是高靈敏度HCV RNA檢測(cè)）,,HCV RNA 陰性,

15、HCV RNA 陽(yáng)性,HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽(yáng)性 (>2 log10),Peg-IFN/RBV治療48周,Peg-IFN/RBV治療48周,停止治療,,基線(xiàn),Wk 4,Wk 12,Wk 24,HCV RNA 陽(yáng)性,Peg-IFN/RBV治療72周,HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽(yáng)性 (<2 log10),HCV 基因1型,,HCV 基因 2/3型,HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽(yáng)性,

16、HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽(yáng)性 (>2 log10) 此后陰性,停止治療,,基線(xiàn),Wk 4,Wk 12,Peg-IFN/RBV for 48 weeks,HCV RNA 陽(yáng)性 (<2 log10)或者24周陽(yáng)性,Peg-IFN/RBVfor 24 weeks,Wk 24,中國(guó)基因2/3型患者RGT治療方案基于中國(guó)現(xiàn)有平臺(tái)檢測(cè)（不全是高靈敏度HCV RNA檢測(cè)）,治療時(shí)間（周）,普通試劑的HCV RNA

17、檢測(cè)易引起pEVR誤判為cEVRcobas高靈敏度 HCV RNA檢測(cè)可有效防止因不當(dāng)縮短療程引起的復(fù)發(fā),,,0周,12周,24周,48周 (EOT),,HCV RNA (IU/mL),,,,,,,誤判為cEVR,,HCV RNA下降值>2 log10 (IU/mL),,,,72周 (SVR),,,,終止治療,,復(fù)發(fā),由于pEVR被誤判為cEVR，未延長(zhǎng)療程，導(dǎo)致出現(xiàn)所謂的“復(fù)發(fā)”,,Cobas Taqman檢測(cè)下限 (

18、<15 IU/mL),普通試劑檢測(cè)下限 (<1000 IU/mL),,cobas,普通檢測(cè),魏來(lái)、陳新月等 ，傳染病信息 2012年第25卷第3期,223例HCV患者,非RVR 33.63%(75/223),RVR 66.37%(148/223),,,,4周,,,,,陽(yáng)性 62.67%（47/75）,假陰性 37.33%（28/75）,,,,,cobas,cEVR 89.24%(199/223),,,,非cE

19、VR 89.24%(24/223),普通檢測(cè),,,,,陽(yáng)性 79.17%（19/24）,假陰性 20.83%（5/24）,高靈敏度HCV RNA檢測(cè)指導(dǎo)正確的臨床決策靈敏度較差的檢測(cè)可能導(dǎo)致不正確的治療決策,普通檢測(cè)試劑可能導(dǎo)致不當(dāng)?shù)目s短療程，增加復(fù)發(fā)可能,12周,cobas高靈敏度HCV RNA檢測(cè)的意義,更有效執(zhí)行RGT策略更準(zhǔn)確判斷應(yīng)答模式有效防止pEVR與cEVR的誤判，正確指導(dǎo)用藥,,正確的臨床決策,羅氏coba

20、s TaqMan病毒載量檢測(cè)系統(tǒng),+,全自動(dòng)病毒載量平臺(tái), sample-in, result-out 專(zhuān)利的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品定量，保障結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度流程靈活方便：試劑即拿即用，實(shí)驗(yàn)中隨時(shí)添加樣本、試劑及耗材實(shí)驗(yàn)條碼自動(dòng)掃描設(shè)計(jì),方便實(shí)驗(yàn)記錄及追蹤有效避免污染,羅氏cobas TaqMan病毒載量卓越的檢測(cè)性能,,1.2 x 108 IU/mL HBV,,NC,LPC,HPC,-,+,-,-,+,-,,陰性質(zhì)控品,低濃度陽(yáng)性質(zhì)控

21、品,高濃度陽(yáng)性質(zhì)控品,正常人血漿,,,,,,SK24Rack 1,,NC,LPC,HPC,+,-,+,+,-,+,,SK24Rack 2,,NC,LPC,HPC,-,+,-,-,+,-,,SK24Rack 3,,NC,LPC,HPC,+,-,+,+,-,+,,SK24Rack 4,每批4架重復(fù)檢測(cè)5批,,樣本棋盤(pán)放置研究顯示零交叉污染,*Roche Internal Studies – Data on File,,羅氏coba

22、s TaqMan 病毒載量有效防交叉污染,WHO 標(biāo)準(zhǔn)品,Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver Annual Meeting.,Mean log difference,COBAS Taqman HBV DNA 普通試劑 1普通試劑 2,,,,病毒學(xué)應(yīng)答,治療起始濃度,

23、,,Expected level (IU/mL),多中心評(píng)估: WHO標(biāo)準(zhǔn)品溯源性對(duì)比,,正確的臨床決策需要可靠的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果,只有cobas TaqMan 全部結(jié)果符合溯源性要求,,,Genotype C,Genotype B,Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver An

24、nual Meeting.,Mean log difference,COBAS Taqman HBV DNA 普通試劑1普通試劑2,,,,Virologicresponse NAs,Decision to treat,,Virologicresponse NAs,Decision to treat,,,,Expected level (IU/mL),Expected level (IU/mL),只有cobas TaqMan HB