單抗制劑在內(nèi)分泌疾病的應(yīng)用

1、單抗制劑在內(nèi)分泌科領(lǐng)域的應(yīng)用 葉小珍,,概述,1890年Behring和北里柴三郎 發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素,建立了血清療法,開創(chuàng)了抗體制藥。 1937年Tiselius用電泳法將 血清蛋白分離為白蛋白、α、β、γ球蛋白，并證明抗體活性主要 存在于γ球蛋白組分。,,抗體是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。 抗體的產(chǎn)生：機(jī)體

2、免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞被活化增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白。,,20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤是漿細(xì)胞癌變形成的惡性增殖性疾病。病人血清中出現(xiàn)同抗體結(jié)構(gòu)類似的球蛋白， 統(tǒng)稱為免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。所以Ig是化學(xué)結(jié)構(gòu)的概念，而抗體是生物學(xué)功能的概念。,,多克隆抗體：病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)，因此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體。,,1975年Kohler

3、和Milstein首先利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備出單克隆抗體（monoclonal antibody McAb）。 單克隆抗體具有高度特異性、均一性、來源穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)等特點，為抗體制備和應(yīng)用提供了全新的手段，還促進(jìn)了基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展。,,單克隆抗體作為抗體制劑，在臨床上主要用與疾病的診斷和治療。 單克隆抗體檢測與某些疾病有關(guān)的抗原，輔助臨床診斷。用放射性核素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行腫瘤顯像，做免疫定位診斷。,,

4、單克隆抗體用于臨床治療，CD3單克隆抗體作為免疫抑制劑對器官移植免疫排斥有抑制作用。 以單克隆抗體作為載體的藥物對腫瘤進(jìn)行定向治療。,單克隆抗體,單克隆抗體是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞相融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而產(chǎn)生的。,,,一、人鼠嵌合抗體,抗原抗體結(jié)合功能—抗體可變區(qū)（V） 同種性免疫源性—抗體穩(wěn)定區(qū)（C） 在基因水平上將鼠源單抗的H 和L鏈可變區(qū)基因分離

5、出來，分別與人Ig的H 和L鏈的穩(wěn)定區(qū)（C）基因連接成人-鼠嵌合抗體的H 和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)完整人-鼠嵌合抗體。,二、改形抗體（CDR移植抗體）,Ig 分子中參與構(gòu)成抗原結(jié)合部位的區(qū)域是H和L鏈V區(qū)中的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR區(qū)），而不是整個可變區(qū)。 H和L鏈各有三個CDR，其它部分稱框架區(qū)。 用鼠源單抗的CDR序列替換人Ig 分子中CDR序列，則可使人的Ig 分子具有鼠源單抗的抗原結(jié)合特異性。可消除免疫源性。,三、

6、小分子抗體,基因工程小分子抗體僅表達(dá)鼠源單抗的V區(qū)片段，相對分子量為原抗體的1/80～1/3。即保留CDR區(qū)，而Ig 分子中的C區(qū)不表達(dá)。 小分子抗體類型有： 　①Fab片段抗體　 ②Fv抗體 ③單鏈抗體 ④單域抗體 ⑤最小識別單位,四、雙功能抗體,雙功能抗體就是雙特性抗體。它是一種非天然性抗體。其結(jié)合抗原的兩個臂具有不同的特異性。構(gòu)建方法：⒈化學(xué)交聯(lián)法⒉生物學(xué)方法（雜種-雜交瘤）⒊基因工程法

7、,五、抗體融合蛋白,抗體融合蛋白廣義屬雙功能抗體。 類型： ①配基-配基型融合蛋白； ②配基-Ig型嵌合蛋白； ③配基-Fv型融合蛋白； ④受體-Fv型融合蛋白； ⑤酶-抗體型融合蛋白；,GAD抗原肽抗體,1型糖尿病采用把耐受原基因GAD片段移植在IgG重鏈N端的融合子——GAD抗原肽抗體通過逆轉(zhuǎn)錄病毒對NOD小鼠進(jìn)行基因治療。初步實驗顯示，GAD抗原肽抗體通過逆轉(zhuǎn)錄病毒對NOD小鼠進(jìn)行基因治療能使NOD小鼠

8、糖尿病發(fā)病延遲并降低了其發(fā)病率。,小劑量抗CD3單克隆抗體,1型糖尿病---有效逆轉(zhuǎn)新發(fā)1型糖尿病 抗移植排斥藥 以體液免疫為主的重癥肌無力動物模型抗CD3單克隆抗體OKT3自1986年被FDA批準(zhǔn)用于臨床以來，在腎、心臟、骨髓等實體及非實體器官移植后的抗排斥反應(yīng)中有著廣泛的應(yīng)用.近年來在1型糖尿病等自身免疫病的治療中也取得了良好的臨床療效。但是抗CD3抗體與Fc受體相互作用引起的絲裂原活性以及鼠抗體的免疫原性給抗體的臨床應(yīng)用

9、帶來嚴(yán)重的毒副作用。,Th1或Th2型細(xì)胞因子或抗細(xì)胞因子單抗，IFN-γ單抗,自身免疫性糖尿病動物實驗中已證實用逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體構(gòu)建的IL一4基因疫苗、IL一10基因疫苗均能有效地防止糖尿病的發(fā)生。,抗CD22單克隆抗體,自身免疫性糖尿病動物實驗,抗CD20單克隆抗體,1型糖尿病與IL-10基因聯(lián)合免疫治療對胰島β細(xì)胞具有保護(hù)作用動物實驗,抗VEGF抑制劑,治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變、糖尿病性黃斑水腫、新生血管性老年黃斑水

10、腫/變性(AMD)、新生血管性青光眼、卵巢癌、胰腺癌作用：阻斷VEGF的作用，可以抑制白細(xì)胞淤滯、視網(wǎng)膜細(xì)胞問黏附分子一1的表達(dá)和血-視網(wǎng)膜屏障的破壞、減少視網(wǎng)膜微血管的滲漏，有效治療DR。,抗VEGF抑制劑,按作用途徑可以分為：VEGF受體嵌合蛋白、VEGF中和抗體、反義寡聚脫氧核苷酸和選擇性VEGF受體激酶抑制劑，其中選擇性VEGF受體激酶抑制劑可能為較有前途的抑制劑。目前，F(xiàn)DA批準(zhǔn)上市的VEGF抑制劑主要有3種：哌加他尼鈉

11、、蘭尼單抗和貝伐單抗，其中已被批準(zhǔn)用于眼科臨床的有哌加他尼鈉和蘭尼單抗。,抗VEGF抑制劑,文獻(xiàn)報道靜脈滴注bevacizumab治療直腸癌Ⅲ期臨床試驗中，22．4％的患者誘發(fā)了高血壓，全身靜脈滴注VEGF-A可明顯降低收縮壓，這說明抑制VEGF-A可提升動脈壓，有提高動脈血栓形成風(fēng)險系數(shù)的作用，而當(dāng)年齡大于65歲時，此風(fēng)險加倍。VEGF-A可以提高前列腺環(huán)素和一氧化氮水平，從而引起血管擴(kuò)張效應(yīng)，這對缺血性心臟病患者有保護(hù)作用，抗VE

12、GF藥物可以減少前列腺環(huán)素和一氧化氮水平，從而給患冠狀動脈硬化性心臟病患者的心血管事件的高發(fā)生率帶來負(fù)面影響。,抗VEGF抑制劑,因此，對年齡較大、較易發(fā)生心血管意外的新生血管眼病患者在應(yīng)用非選擇性VEGF—A抑制劑時，要充分考慮其全身效應(yīng)及可能誘發(fā)的副作用。眼部不良反應(yīng)可能有：角膜損傷、視網(wǎng)膜脫離、葡萄膜炎或炎癥反應(yīng)、晶狀體損傷、眼內(nèi)炎、白內(nèi)障進(jìn)展、視網(wǎng)膜動脈阻塞、視網(wǎng)膜下出血、急性視力下降、視網(wǎng)膜色素上皮脫離；全身不良反應(yīng)包括急

13、性缺血性心臟病發(fā)作、血壓增高、腦血管意外或死亡，但發(fā)生率均未超過0．21％。,抗VEGF抑制劑,抗VEGF治療是一把“雙刃劍”VEGF及其受體系統(tǒng)在眼血管形成過程中起著非常重要的作用，對于確保有足夠的血液供應(yīng)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和光感受器，維持和保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的功能至關(guān)重要，眼內(nèi)VEGF平衡失調(diào)會干擾正常眼血管生成和神經(jīng)生理功能。目前臨床應(yīng)用的非選擇性VEGF-A抑制劑治療新生血管性AMD可能需要持續(xù)數(shù)月或數(shù)年，對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)

14、胞的影響以及視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜正常血管生成的干擾究竟有多大，雖然真正的臨床關(guān)聯(lián)還不清楚，但需要我們在選擇這種治療方式時考慮到這些潛在風(fēng)險。,重組人源化IgGl一K單克隆抗體,ranibizumab： 治療糖尿病性黃斑水腫；濕性年齡相關(guān)性黃斑變性可通過與VEGF—A的結(jié)合，阻斷VEGF．A與其受體VEGFRl和VEGFR2的相互作用，從而減少內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管滲漏和新生血管的形成。該單抗于2012年8月獲美國FDA批準(zhǔn)用于DME的治療，商品

15、名為Lucentis（雷珠單抗）,促紅細(xì)胞生成素受體抗體,抑制小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成抑制VEGF通路后并不能完全抑制視網(wǎng)膜新生血管的產(chǎn)生。近來發(fā)現(xiàn)促紅細(xì)胞生成素是一個獨立的促視網(wǎng)膜新生血管形成的因子。使用Epo拮抗劑，應(yīng)能抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。,人源化單抗XOMA-052,2型糖尿病、痛風(fēng)可特異性地與人白細(xì)胞介素-1β結(jié)合，使之無法作用于IL-1受體，進(jìn)而干擾由IL-1β 介導(dǎo)的信號通路，現(xiàn)已被證實具有糖尿病治療作用。目前，X

16、OMA公司正在美國和歐洲進(jìn)行本品治療2型糖尿病的Ⅱ期臨床研究。值得一提的是，在所有的有核細(xì)胞上均有IL-1受體存在，因此本品對其他與該類細(xì)胞有關(guān)的疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病、白塞病以及痛風(fēng)的炎癥反應(yīng)等也具有治療作用。,抗IL-1單抗,痛風(fēng),甲狀腺癌,抗p21ras單克隆抗體：甲狀腺乳頭狀癌抗P T K（酪氨酸蛋白激酶）抗體：F D A 批準(zhǔn)的主要有Bevacizumab、Cetnximab、帕尼單抗及曲妥珠

17、單抗。它們抗癌的靶點分別為VEGF、EGFR及人類表皮生長因子受體等，主要用于人體多種癌腫，如肺、腎、頭頸、乳房及胃腸道腫瘤。Bevacizumab于2004年FDA批準(zhǔn)用于治療遷徙性結(jié)直腸癌，近年亦有報道將Bevacizumab用于治療甲狀腺癌。,甲狀腺癌,酪酸激酶抑制劑(TKI)：凡德他尼(vandetanib) ，口服的，多靶點，適應(yīng)癥為不適合手術(shù)治療的轉(zhuǎn)移性甲狀腺髓樣癌。抗CTLA-4或抗CTLA-4受體的單克隆抗體：前者是

18、直接對CTLA-4的單抗，如Ipilimumab、Tremelimumab，其主要用于惡性黑色素瘤的治療，并能改善晚期病例生存率，但它用于甲狀腺癌治療的報告較少。由于癌基因的突變，PTC與惡性黑色素瘤有相似之處，如BRAF及Ras突變，因此，本品亦可用于PTC（乳頭狀甲狀腺癌）的治療。,甲狀腺癌,抑制程序性死亡-1(PD-1)及其受體的單克隆抗體：前者如BMS-936558，后者如BMS-936559。一項納入207例多種晚期癌癥患者的

19、I期臨床研究發(fā)現(xiàn)使用BMS-936559 0.3～10mg/kg，6例患者疾病穩(wěn)定達(dá)24周。上述抗CTLA-4或抗CTLA-4受體的單克隆抗體及抑制PD-1及其受體的單克隆抗體又稱免疫關(guān)節(jié)阻斷劑。它與多靶點阻滯的TKI(小分子蛋白酪氨酸激酶抑制劑)不同點為單靶點抑制，其作用更具特異性。,甲狀腺癌,CD73抑制劑α,β-亞甲基二磷酸腺苷：已經(jīng)成功應(yīng)用于PTC腫瘤模型，能縮小腫瘤體積?？笴D73單克隆抗體(TY-23)：不僅僅抑制CD7

20、3酶活性，還能抑制腫瘤細(xì)胞的黏附，從而抑制腫瘤的侵襲。但總的來說分子靶向治療藥物的長期有效性、安全性還待臨床研究進(jìn)一步證實。,甲狀腺未分化癌(ATC),單克隆抗體對ATC亦顯示一定作用。西妥昔單抗(cetuximab)是一種抗EGFR的嵌合單克隆抗體，能有效阻斷配體EGF、TGF．Ot與EGFR的結(jié)合，發(fā)揮抗腫瘤作用。貝伐單抗(bevacizumab)是一種重組人源化、人鼠嵌合抗VEGF的單克隆抗體。西妥昔單抗、第3代半合成的新

21、型長春堿類抗癌藥依立替康(irinotecan，CPT一11)及兩藥聯(lián)用在ATC異體動物模型體內(nèi)腫瘤抑制率分別為77％、79％、93％，較臨床常用的順鉑及阿霉素更有效，毒性低，應(yīng)用前景較好?？梢种颇[瘤細(xì)胞生長及血管生成，且西妥昔單抗單藥優(yōu)于貝伐單抗單藥，兩藥聯(lián)合療效優(yōu)于阿霉素。,自身免疫性甲狀腺疾病,抗CD52單抗(阿倫單抗,Alemtuzumab)_,抗ICAM-1單抗,Graves病小鼠實驗研究,抗人樹突狀細(xì)胞（DC）單抗,小

22、鼠自身免疫性甲狀腺炎,甲狀腺相關(guān)性眼病,抗細(xì)胞因子制劑：有研究證實腫瘤壞死因子 (TNF-α)在眼病的炎癥出現(xiàn)和維持中起重要作用。目前已有少數(shù)幾項以TNF-α為靶向的抗細(xì)胞因子制劑用于治療GO的報道。如依那西普單抗、英夫利昔單抗、阿達(dá)木單抗抗CD20單克隆抗體：利妥昔單抗單獨予利妥昔單抗治療，GD患者外周血及眼眶組織中的B細(xì)胞減少，且在血清低水平的促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)GD患者體內(nèi)能誘導(dǎo)長期緩解，但利妥昔單抗對TRAb水

23、平?jīng)]影響，可能對TRAb水平較高的GD患者無效。,甲狀腺相關(guān)性眼病,人類單克隆抗體(Monoclonal antibody，MAb)：對研究自身免疫反應(yīng)很有價值。到目前為止，只產(chǎn)生一種人類MAb，即可供使用的5C9抗體，其可與TsHR高親和力的結(jié)合，抑制TsH與甲狀腺素刺激人類MAb的受體激活環(huán)磷腺苷。5C9抗體可能為研制控制TsHR活動的新藥提供依據(jù)。,RANK配體（ RANKL ）抑制劑,地諾單抗（denosumab）：2010年