bfgf及其mab對侵襲性垂體腺瘤裸鼠皮下移植瘤作用的研究

1、Comment[Edit1]:如何隨機(jī)？需指明具體的隨機(jī)方法，如隨機(jī)數(shù)字表法，如果只是隨便分的，則請刪除隨機(jī)二字Comment[Edit2]:前言交代研究背景請引用至少引用一條文獻(xiàn)，注意文獻(xiàn)引用順序Comment[Edit3]:此處的寫法請與摘要中寫法一致（摘要第一句）Comment[Edit4]:如何隨機(jī)？需指明具體的隨機(jī)方法，如隨機(jī)數(shù)字表法，如果只是隨便分的，則請刪除隨機(jī)二字[基金項目]重慶市衛(wèi)生局科研基金面上項目(20082289

2、)婁四龍(1972)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事顱內(nèi)腫瘤方面的研究，電話：（02366193270），Email:lsl4b@.cn1bFGF及其及其Mab對侵襲性垂體腺瘤裸鼠皮下移植瘤作用的研究對侵襲性垂體腺瘤裸鼠皮下移植瘤作用的研究婁四龍1戴勤弼1毛德強(qiáng)1霍鋼2廖正步2（400030重慶重慶市腫瘤研究所神經(jīng)外科1；400010重慶重慶醫(yī)科大學(xué)附屬臨床學(xué)院神經(jīng)外科2）[摘要摘要]目的目的探討用bFGF及其不同濃度單克隆抗體（bFG

3、FMab）的方法對裸鼠人侵襲性垂體腺瘤移植瘤血管生成和腫瘤生長的影響及可能機(jī)制。方法方法建立50只人侵襲性垂體腺瘤裸鼠皮下移植瘤模型，按區(qū)組隨機(jī)排列方法分成bFGF組、30、20、lOμgml3個抗體濃度的bFGFMab組及生理鹽水對照組，每組10只，分別給予不同處理后8周終止實驗，每周測量腫瘤體積繪制移植瘤體積曲線；對移植瘤組織用免疫組化法檢測CD31的表達(dá)，以計算腫瘤組織微血管密度（microvesseldensity，MVD）。結(jié)

4、果結(jié)果與對照組、bFGF組比較，bFGFMab組對移植瘤的生長及腫瘤血管生成有明顯抑制作用，以30μgml組的抑瘤率（55.71%）最高（P0.01）；bFGFMab各濃度組腫瘤組織中MVD均明顯下降，30μgml組（3.361.26）下降最明顯（P0.01）。結(jié)論結(jié)論與bFGF組及對照組對比，bFGFMab處理后對裸鼠侵襲性垂體腺瘤皮下移植瘤具有較強(qiáng)的體內(nèi)抑瘤效應(yīng)，可能是通過抑制細(xì)胞增殖活性及腫瘤血管生成而達(dá)到抑制垂體腺瘤的侵襲性生長

5、的。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]侵襲性垂體腺瘤；bFGFMab；抑瘤效應(yīng)ExperimentalstudyoninhibityeffectofbFGFMabontheinvasivepituitaryadenomainnudemiceLouSilong1，DAIQinbi1，MAODeqiang1，HUOGang2，LIAOZhengbu2（1DepartmentofNeurosurgeryTheCancerInstituteofChongqing

6、Chongqing400030；2DepartmentofNeurosurgeryTheFirstAffiliatedHospitalChongqingMedicalUniversityChongqing400016China）[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheinhibityeffectofthemonoclonalantibodyofbasicfibroblastgrowthfact(bFGFMa

7、b)onnudemicetransplantedhumaninvasivepituitaryadenomaitspossiblemechanismofaction.Methodsweestablishednudemicetransplantedhumaninvasivepituitaryadenoma.Thenmicewereromlyinto5groups(10miceineachgroup).Eachgroupwastreatedi

8、nadifferentway.Thevolumeofthetumsweremeasuredweeklyf8weeksthenthegrowthcurvesoftransplantedtumsweredraw.EightweekslaterMVDwasmeasured.ResultsComparedwithcontrolbFGFgroupThegrowthoftumineachbFGFMAbgroupwasslowtheinhibitye

9、ffectoftumwassignificant（P0.01）TheMVDexpressionwerealldecreased（P0.01）.Theinhibityeffectof30μgmlbFGFMabgroupontumgrowthangiogenesiswasthemostsignificantinallgroups.ConclusionbFGFMabagenthasgoodtherapeuticeffectinthetreat

10、mentofnudetransplantedhumaninvasivepituitaryadenoma.Themechanismofactionmaybeitsinhibittheproliferationinvasionangiogenesisofinvasivepituitaryadenoma.[Keywds]InvasivepituitaryadenomabFGFMabInhibitioneffectSupptedbytheSci

11、enceFoundationofChongqingMunicipalHealthBureau(Proj.No.20082289)Crespondenceto:DAIQinbiEmail:qbdai@[基金項目]重慶市衛(wèi)生局科研基金面上項目(20082289)通訊作者：戴勤弼侵襲性垂體腺瘤在臨床上手術(shù)難以完全切除，治療效果差，復(fù)發(fā)率高，是垂體腺瘤治療的一大難題。堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basicfibroblastgrowthfact，b

12、FGF)在腎癌、肺癌、白血病等多種惡性腫瘤細(xì)胞中過度表達(dá)，并能促進(jìn)腫瘤新生血管生成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤生長、浸潤和轉(zhuǎn)移[1]。此處請簡要介紹一下bFGF因子，23句話。目前研究發(fā)現(xiàn)侵襲性垂體腺瘤中bFGF強(qiáng)烈表達(dá)，對垂體腺瘤侵襲能力具有十分重要的意義[2]，我們通過bFGF及其不同濃度單克隆抗體（Mab）對荷瘤裸鼠的皮下移植瘤抑瘤效應(yīng)的觀察，并探討其可能的作用機(jī)制，現(xiàn)報告如下。1材料與方法材料與方法1.1材料與重慶醫(yī)科大學(xué)病理教研室通過Tra

13、nswell系統(tǒng)挑選出可用于實驗室的高侵襲潛能的垂體腺瘤細(xì)胞株；雌性BULBc(nunu)裸小鼠50只，5周齡，體質(zhì)量（202）g，購于上海史萊克研究動物有限公司，由重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心在無特定病原菌（SPF）環(huán)境飼養(yǎng)；bFGF及其單克隆抗體(鼠單克隆IgG抗體)和兔抗鼠人CD31抗體（工作濃度為1:1000）購自SantaCruz公司；羊抗兔免疫組化試劑盒、DAB顯色底物購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。1.2方法1.2.1侵襲性垂

14、體腺瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立取培養(yǎng)中的處于對數(shù)生長的高侵襲性的垂體腺瘤細(xì)胞采用0.25%胰酶消化，以無血清1640液洗滌，收集細(xì)胞并計數(shù)，調(diào)整活細(xì)胞濃度為5107ml，于每只裸鼠右前肢靠背部皮膚松軟處接種0.2ml只，每只裸鼠皮下接種1點。次日記為接種第1天，待所有荷瘤鼠腫瘤長徑超過1cm時隨機(jī)分組開始進(jìn)行處理。1.2.2研究分組及處理將成功建立侵襲性垂體腺瘤裸鼠皮下移植瘤模型的50只裸鼠采用區(qū)組隨機(jī)排列方法隨機(jī)分成5組，每組l0只，

15、分為30、20、10μgml3個bFGFMab抗體濃度組：于每組瘤體周圍皮下分3點注射1mlbFGFMab，濃度依次為30、20、lOμgml，每3天注射1次；bFGF組：于瘤體周圍皮下分3點注射1mlbFGF（濃度為lOμgml）；對照組：以等量生理鹽水代替；期間均采用瘤周皮下注射給藥的方式，同組間注射濃度相同、異組間濃度不同，實驗干預(yù)后8周終止實驗，每周日Comment[Edit7]:作為論著發(fā)表，至少應(yīng)有12條文獻(xiàn)，請再增加一條近

16、三年內(nèi)的文獻(xiàn)[基金項目]重慶市衛(wèi)生局科研基金面上項目(20082289)婁四龍(1972)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事顱內(nèi)腫瘤方面的研究，電話：（02366193270），Email:lsl4b@.cn3現(xiàn)bFGF在侵襲性垂體腺瘤中高表達(dá)并與侵襲程度呈正相關(guān)［2］，bFGF作為一種較強(qiáng)的有絲分裂原，通過與靶細(xì)胞上的受體結(jié)合后，受體二聚化，啟動級聯(lián)信號傳遞，調(diào)控基因表達(dá)，發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖、細(xì)胞遷移和新生血管生成等作用［3］。近年研

17、究發(fā)現(xiàn)，垂體腺瘤細(xì)胞自身產(chǎn)生bFGF的同時，可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生bFGF，通過自分泌和旁分泌機(jī)制作用于腫瘤和內(nèi)皮細(xì)胞，引起腺瘤細(xì)胞快速增殖以及腫瘤新生血管的發(fā)生，是垂體腺瘤侵襲性增高的基礎(chǔ)。而bFGFMab不僅能逆轉(zhuǎn)腺瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，而且可以有效降低腺瘤組織中的游離bFGF以及阻斷bFGF細(xì)胞間的信息傳遞阻止腺瘤細(xì)胞的分裂增殖、侵襲及腺瘤新生血管生成的作用［45］。bFGF抗體藥物因其靶向性、特異性好而毒性低已被許多學(xué)者用于不同腫瘤

18、治療的研究，本研究表明在不同濃度bFGFMab組與對照組相比，bFGFMab能明顯抑制侵襲性垂體腺瘤裸鼠移植瘤的生長和血管生成，并呈一定濃度依賴性；bFGF對腫瘤增殖及腫瘤新生血管的形成起促進(jìn)作用。近年來隨著分子生物靶向藥物研究的發(fā)展，bFGF及其抗體已被許多學(xué)者用于許多惡性腫瘤治療的研究，而對于垂體腺瘤侵襲性的發(fā)生和腫瘤血管生成方面的影響的研究卻很少，我們通過動物實驗研究發(fā)現(xiàn)每周2次連續(xù)8周在荷瘤鼠瘤體周圍分3點注射1ml的bFGFM

19、ab，濃度依次為30、20、lOμgml；以及周圍分3點注射1mlbFGF（濃度為lOμgml）與對照組比較發(fā)現(xiàn)30μgmlbFGFMab組裸鼠移植瘤抑瘤最明顯，MVD也最少，分別為對照的55.71%和34.56%，bFGFMab的各不同濃度組和對照組在移植瘤生長和MVD上差異有統(tǒng)計學(xué)意義表明bFGFMab能明顯抑制垂體腺瘤的增殖和血管生成并呈濃度依賴，這一結(jié)果與在肺癌及卵巢癌的研究結(jié)果相似［67］。相反，lOμgmlbFGF組與對照組

20、比較，促進(jìn)腫瘤生長及MVD的增加，分別增加了47.04%和81.52%，bFGF能明顯促進(jìn)垂體腺瘤的增殖和MVD形成。這些研究結(jié)果均表明bFGF在垂體腺瘤侵襲性生長中可能起著非常重要的作用，bFGFMab能明顯抑制垂體腺瘤侵襲性生長和腫瘤血管發(fā)生。高濃度的bFGFMAb能明顯抑制侵襲性垂體腺瘤裸鼠移植瘤細(xì)胞增殖和腫瘤微血管的生成，其可能抑制垂體腺瘤侵襲的機(jī)制可能是：①bFGF是目前所發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)具有強(qiáng)烈的刺激細(xì)胞增殖分化和促進(jìn)表皮、內(nèi)皮細(xì)

21、胞再生，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)其從基底膜中脫離，同時與基質(zhì)金屬蛋白酶、粘合素分子、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)等多因子、多層次相互關(guān)聯(lián)、相互制約腫瘤侵襲性，高濃度bFGFMab能降低腫瘤細(xì)胞外游離的bFGF的濃度還能與已經(jīng)腫瘤細(xì)胞膜表面受體結(jié)合的bFGF受體復(fù)合物結(jié)合，從而阻斷bFGF在細(xì)胞間信息傳遞，抑制其腫瘤分裂增殖、新生血管生成形成的侵襲性［810］。②bFGFMab可以調(diào)節(jié)腫瘤血管新生的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)相互協(xié)同作用，從而提高腫瘤

22、內(nèi)新生血管的成熟度和減低其滲透性，這些是垂體腺瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲的物質(zhì)基礎(chǔ)［1113］。因此bFGFMab抑制侵襲性垂體腺瘤和細(xì)胞增殖和腫瘤微血管的生成過程可有效阻止腺瘤侵襲。本研究發(fā)現(xiàn)高濃度的bFGFMab可顯著地抑制侵襲性垂體腺瘤裸鼠移植瘤生長和腫瘤微血管密度，這可能是bFGFMab有效抑制垂體腺瘤侵襲性的主要原因綜上所述，本研究在裸鼠移植瘤模型上證實了bFGFMab對侵襲性垂體腺瘤的生長有較強(qiáng)的體內(nèi)抑瘤效應(yīng)，并且能實現(xiàn)與濃度有關(guān)的靶向

23、治療作用，使bFGFMab可能成為今后侵襲性垂體腺瘤生物治療的一種新方法，顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。bFGFMab抗體藥物可能成為今后侵襲性垂體腺瘤綜合治療中一種新的生物腫瘤手段。參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn):[1]RibattiDVaccaARusnatiMetal.Thediscoveryofbasicfibroblastgrowthfactfibroblastgrowthfact2itsroleinhaematologicalmalignan

24、cies[J].CytokineGrowthFactRev200718(324):3272334.[2]婁四龍霍鋼鄭履平等.PTTG、bFGF和P53的表達(dá)與垂體腺侵襲性的關(guān)系[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報200729(18):17901793.[3]PrestaMDellEraPMitolaSetal.Fibroblastgrowthfactfibroblastgrowthfactreceptsysteminangiogenesis［J］C

25、ytokineGrowthFactRev200516(2)：159178.[4]MarcoPPatriziaDStefaniaMetal.Fibroblastgrowthfactfibro2blastgrowthfactreceptsysteminangiogenesis[J].Cytokine&GrowthFactReviews200516(2)：159178.[5]夏鈺弘楊國儀洪建剛等.IGFBP3、bFGF、Ki67蛋白在非小細(xì)胞

26、肺癌組織中的表達(dá)及意義［J］.江蘇醫(yī)藥200935(1):4143.[6]向軍儉李丹王宏等.bFGF單克隆抗體抑制小鼠Lewis肺癌轉(zhuǎn)移及血管新生[J].中國癌癥雜志201020(6)：401405.[7]林衛(wèi)楊延林彭芝蘭等.bFGF單克隆抗體對卵巢癌移植瘤血管生成的抑制作用[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展200514(4)：281284.[8]KZhaoMGaoFHWangJYetal.JAK2STAT3signalingpathwayacti

27、vationmediatestumangiogenesisbyupregulationofVEGFbFGFinnonsmallcelllungcancer.LungCancer.2011VN.[9]PardoOEWellbrockCKhanzadaUKetal.FGF2protectssmallcelllungcancercellsfromapoptosisthroughacomplexinvolvingPKCεBRafS6K2［J］.

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