第二章 實驗室設置及一般技術(2學時)

1、第二章第二章植物細胞工程實驗室設置及一般技術植物細胞工程實驗室設置及一般技術一實驗室設置細胞工程實驗室它必須滿足三個基本的需要，即：實驗準備，包括培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌等；無菌操作；控制培養(yǎng)。1基本實驗室（1）準備室：準備室的功能就是進行一切與實驗有關的準備工作。要求寬敞明亮，通風條件好。（2）接種室：接種室的功能是進行無菌操作。要求封閉性好，干燥清潔，能較長時間保持無菌。房間一般不宜過大，其規(guī)模根據實驗需要而定。接種室除了出入口和通氣

2、口外，應行密閉。（3）培養(yǎng)室培養(yǎng)室的功能是對離體材料進行控制培養(yǎng)。其首要要求是要能控制光照和溫度，其次為防止微生物感染，有的還需要有可調節(jié)的空氣濕度。培養(yǎng)室應保持干燥和清潔。準備室準備室寬敞明亮寬敞明亮通風效果好通風效果好.無菌室無菌室封性好封性好干燥清潔干燥清潔保持無菌保持無菌應防空氣對流應防空氣對流培養(yǎng)室培養(yǎng)室控溫控溫控光控光空氣干燥清潔空氣干燥清潔2輔助實驗室（1）細胞學實驗室：其功能是對培養(yǎng)材料進行細胞學鑒定和研究。要求清潔、明

3、亮、干燥，使各種光學儀器不受潮濕和灰塵污染。（2）攝影室及暗室：其功能是進行培養(yǎng)材料的攝影記錄和膠片沖印。在有條件的情況下可建立此實驗室。（3）生化分析室在以培養(yǎng)細胞產物為主要目的的實驗室中，應建立相應的分析化驗實驗室，以便于對培養(yǎng)物的有效成分隨時進行取樣檢查。細胞工程實驗室布局的其基本要求是：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀察。二實驗室所需的設備、用具實驗室所需的設備、用具1基本設備：冰箱、天平、酸度計、純水器、電爐、培養(yǎng)基分裝器

4、、攪拌器。2滅菌設備：蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。3無菌操作設備：凈化工作臺、接種箱。4光溫控制設備：時間程序控制器、空調及溫度感應器。5細胞培養(yǎng)設備：培養(yǎng)設備根據需要而定，包括培養(yǎng)架、培養(yǎng)箱、搖床、生物反應器等。（1）使用過的玻璃器皿應立即浸入清水，避免干涸難洗。（2）洗滌劑洗凈后，浸酸性洗液過夜。（3）從酸性洗液撈出后自來水洗凈，蒸餾水刷洗3次，涼干后高壓滅菌。2.3塑料用品洗滌塑料用品一般用合成洗

5、滌劑洗滌，因其附著力較強，因此沖洗時必須反復多次，最后用蒸餾水沖洗。2.4橡膠用品的清洗：浸泡，2%NaOH煮沸15分鐘，流水沖洗，1%HCl浸泡30min，流水沖洗，蒸餾水煮沸20min，三蒸水沖洗2~3次，晾干或烘干。2.5金屬用品洗滌金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌，需要清洗時，一般用酒精擦洗，并保持干燥。（二）滅菌、消毒技術我們所指的菌，包括細菌、真菌、放線菌、藻類及其它微生物，這些東西很小，肉眼是根本看不見的，在條件適宜時它們

6、大量孳生，這時能看到它們的集合體或形成的菌落，飄散的孢子等等。菌的特點是無孔不入，無處不有，在自然條件下忍耐力強，生活條件要求簡單，繁殖無孔不入，無處不有，在自然條件下忍耐力強，生活條件要求簡單，繁殖能力極強，不采用適當的方法很難除滅它能力極強，不采用適當的方法很難除滅它。但是它們也有自身的弱點，我們就采用適當的辦法消滅它們，這些方法我們就叫做滅菌或消毒。物理方法：干熱、濕熱（最有效的一種滅菌方法，主要應用范圍是布類、橡膠類、金屬器械、

7、玻璃器皿、某些塑料制品、加熱后不發(fā)生沉淀的無機溶液。濕熱滅菌時，滅菌鍋應留有30%的空間，不可裝得太滿，否則因壓力與濕度不對應，造成滅菌不徹底。如三角瓶等間隙較大，可以多放一點。）、射線處理（60Co、X射線）、紫外線消毒、過濾、離心沉淀等化學方法：消毒劑、抗菌素滅菌1培養(yǎng)基滅菌：植物細胞與組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基采用高壓滅菌和過濾滅菌兩種，高壓滅菌通常為121℃，30min。動物細胞與組織培養(yǎng)由于用到小牛血清、胰酶和一些生物制劑是有機溶液，均

8、不能高壓滅菌（如TdR，秋水仙素、谷氨酰胺、異硫氰酸胍等）。只能用濾過除菌。培養(yǎng)基要求比較嚴格，既要保證滅菌徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質或效力降低，因此不能隨意延長時間和增加壓力。瓊脂在長時間滅菌后凝固力會下降，以致不凝固。2玻璃器皿滅菌：玻璃器皿可任選濕熱和干熱滅菌方法滅菌。濕熱滅菌條件與培養(yǎng)基滅菌條件一致，但要適當延長滅菌時間，一般以25～30分鐘為宜。濕熱滅菌后器皿和包裝表面常常有水蒸氣覆蓋，如果不及時干燥常常容易微生物的再侵