藥物的雜質(zhì)檢查藥物分析學(xué)習(xí)考試

1、1,,,第三章 藥物的雜質(zhì)檢查,第一節(jié) 概述第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,第三章,2,,,第一節(jié) 概述,第三章,一. 藥物的純度概念與要求,藥物的純度與雜質(zhì)藥物的純度：指藥物的純凈程度。藥物的雜質(zhì)：任何影響藥品純度的物質(zhì)。,3,,2 .控制藥物中雜質(zhì)的意義研究發(fā)現(xiàn)，藥物在臨床使用中產(chǎn)生的不良反應(yīng)除了與藥品本身的藥理活性有關(guān)外，有時(shí)也藥品中存在的雜質(zhì)也有很多關(guān)系。例如：青霉素類抗生素-聚合物-引起的

2、過(guò)敏反應(yīng)所以規(guī)范地進(jìn)行雜質(zhì)的研究，并將其控制在一個(gè)安全，合理的限度范圍之內(nèi)，將關(guān)系到藥品的質(zhì)量可控性和安全性,4,第三章,評(píng)定藥物的純度：綜合考慮藥物的性狀、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定。雜質(zhì)檢查 是控制藥物純度非常重要的方面。藥物的純度檢查也稱為雜質(zhì)檢查。,5,第一節(jié) 概 述,3. 藥用規(guī)格與試劑規(guī)格,共同點(diǎn)：均規(guī)定所含雜質(zhì)的種類和限量. 不同點(diǎn)：符合純度要求的藥品為藥用規(guī)格,主要從 用藥安全、有效和對(duì)藥物穩(wěn)定性等方面 考慮

3、,只有合格品和不合格品.,6,,,第三章,第一節(jié) 概 述—藥物的純度要求,b.化學(xué)試劑的規(guī)格——是從雜質(zhì)可能引起的化學(xué)變化對(duì)使用的影響加以規(guī)定,它不考慮雜質(zhì)對(duì)生物體的生理作用及毒副作用.化學(xué)試劑——一般分為4個(gè)等級(jí)〔基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級(jí)純或特種試劑(光譜純、色譜純)、分析純和化學(xué)純〕,7,,,第三章,例如：硫酸鋇（BaSO4）試劑規(guī)格 對(duì)酸溶性鋇鹽不做檢查. 檢查：氯化物、鐵、灼燒失重等藥用規(guī)格 如存在酸溶性鋇鹽則導(dǎo)致

4、 醫(yī)療事故. 檢查：酸溶性鋇鹽、重金屬、砷鹽等,化學(xué)試劑不能代替藥品使用,8,,,第三章,二. 雜質(zhì)的來(lái)源與種類,藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)系指在按照國(guó)家有關(guān)藥品監(jiān)督管理部門依法批準(zhǔn)的規(guī)定工藝和規(guī)定原輔料生產(chǎn)的藥品中，由其生產(chǎn)工藝或原料帶入的雜質(zhì)，或者貯存過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)。雜質(zhì)的主要來(lái)源：生產(chǎn)過(guò)程中引入 貯存過(guò)程中產(chǎn)生,9,5. 合成工藝中使用的設(shè)備、器皿可能

5、引入重金屬、砷鹽等。,1.合成工藝中未反應(yīng)完全的原料、 合成中間體、副產(chǎn)物等；2. 生產(chǎn)制劑中原輔料帶入的雜質(zhì),3.低效、無(wú)效以及有毒異構(gòu)體和多晶型4.殘留的試劑及有機(jī)溶劑；,（一） 生產(chǎn)過(guò)程中引入的雜質(zhì),10,第三章,例： 阿斯匹林由水楊酸乙?；频?11,,,第三章,制劑過(guò)程中可能產(chǎn)生新物質(zhì),如： 制備過(guò)程中加熱滅菌鹽酸普魯卡因注射劑 進(jìn)一步脫羧轉(zhuǎn)化

6、對(duì)氨基苯甲酸 苯胺 引起毒性反應(yīng),,,,12,第三章,(1)貯存的條件不當(dāng),(2)包裝不當(dāng),(二） 貯藏過(guò)程中引入的雜質(zhì),13,,第三章,14,,第三章,例2： 四環(huán)素在酸性條件下可發(fā)生差向異構(gòu)化反應(yīng), 生成差向四環(huán)素(毒性高、活性低),15,,第三章,藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)不包括變更生產(chǎn)工藝或變更原輔料而產(chǎn)生的新的雜質(zhì)；不包括摻入或污染的外來(lái)物質(zhì),注意的幾點(diǎn)問(wèn)題,16,

7、,第三章,按來(lái)源可分為,一般雜質(zhì) ——指在多種藥物的生產(chǎn)和貯存過(guò)程中容易引入的雜質(zhì).如：酸、堿、水分、氯化物、砷鹽等。,特殊雜質(zhì) ——指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中引入的雜質(zhì)，包括：化學(xué)反應(yīng)的前體、中間體、付產(chǎn)物和降解產(chǎn)物等。,（三）雜質(zhì)的種類,17,,第三章,必須重視異構(gòu)體和多晶型對(duì)藥物有效性和安全性的影響. 控制藥物中低效、無(wú)效以及具有毒性的異構(gòu)體和多晶型。,18,按理化性質(zhì)分為,1.有機(jī)雜質(zhì)工藝中引入的雜質(zhì)

8、和降解產(chǎn)物等，可能是已知的或未知的、揮發(fā)性的或不揮發(fā)性的。由于這里雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)一般與活性成分相似或具淵源關(guān)系，故通常又稱為有關(guān)物質(zhì)。2. 無(wú)機(jī)雜質(zhì)指在原料藥劑制劑生產(chǎn)或傳遞中產(chǎn)生的雜質(zhì)，這些雜質(zhì)通常是已知的，主要包括：反應(yīng)試劑、配位體、催化劑、重金屬、其他殘留的金屬、無(wú)機(jī)鹽、助濾劑、活性碳等。,19,3. 殘留溶劑指在原料藥及制劑生產(chǎn)過(guò)程中使用的有機(jī)溶劑。4. 對(duì)映異構(gòu)體,20,,第三章,1 雜質(zhì)限量,——在不影響藥物療效、穩(wěn)

9、定性及不發(fā)生毒性的前提下,藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量.,百分之幾表示( %)百萬(wàn)分之幾表示( ppm),限量表示方 法,三. 雜質(zhì)的限量,21,,第三章,2 雜質(zhì)限量檢查方法,對(duì)照法靈敏度法比較法,雜質(zhì)限量的控制方法分為：限量檢查法，雜質(zhì)含量測(cè)定法（外標(biāo)法）,22,操作:平行原則.,管2（對(duì)照管）,,管1（樣品管）,,第三章,取一定量被檢雜質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液與一定量供試品在相同條件下處理后, 比較反應(yīng)結(jié)果, 判斷供試液中所含雜質(zhì)是

10、否符合規(guī)定.,（1）對(duì)照法,23,在供試品溶液中加入一定量的試劑,在試驗(yàn)條件下反應(yīng),不得出現(xiàn)正反應(yīng)，判斷供試品中雜質(zhì)是否符合規(guī)定。,,第三章,如：純化水中氯化物的檢查,5滴 1mL,（2）靈敏度法,24,,取一定量供試品,在規(guī)定條件下測(cè)定待檢雜質(zhì)的參數(shù)（吸光度，薄層斑點(diǎn)，峰面積等） 與規(guī)定限量比較, 判斷供試品中雜質(zhì)限量是否符合規(guī)定.,第三章,（3）比較法,25,,例：腎上腺素中酮體的檢查,第三章,,供試

11、品液(2.0mg/ml),鹽酸溶液,樣品,,(0.05mol/L),,A310nm,規(guī)定：A310nm≯0.05,26,例如：對(duì)照法寫成：,,3 限量計(jì)算公式,第三章,27,對(duì)于制劑，雜質(zhì)限量表示為標(biāo)示百分含量，如鹽酸普魯卡因注射液中，對(duì)氨基苯甲酸的限量是不低于標(biāo)示量的1.2%。,28,注意: ①單位是否統(tǒng)一 ②供試品取量部分還是整體 ③已知其中三個(gè)量可計(jì)算另一個(gè)量,,第三章,29,,例1. 對(duì)乙酰氨基酚中

12、氯化鈉的檢查,,,,對(duì)照品溶液: 標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液(10?gCl-/ml),方法：取5.0ml?同法操作比較,濁度不得更大.計(jì)算：氯化物限量是多少(% )？,第三章,30,規(guī)定：含重金屬≯百萬(wàn)分之五(5ppm)計(jì)算：應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液(10?gPb/ml)多少ml？,例2. 葡萄糖中重金屬的檢查,第三章,方法：,31,一氯化物檢查法,1. 原理　 利用氯化物在硝酸酸性條件下與硝酸銀反應(yīng), 生成氯化銀白色渾濁液,

13、與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下產(chǎn)生的氯化銀渾濁程度比較, 濁度不得更大. Cl-+Ag+ H+ AgCl,,,第三章,32,2．操作方法,樣品管,對(duì)照管,第三章,葡萄糖中氯化物檢查,1.0mL,用水稀釋至50mL,6.0mL,0.60g,0.01%,(濃度：10?gCl－/ml),一氯化物檢查法,33,3. 結(jié)果觀察方法,,黑色的背景上 自上而下的觀察,,對(duì)照管,樣品

14、管,34,4．注意事項(xiàng)及討論,,平行試驗(yàn)加稀硝酸的目的氯化物的最適檢測(cè)濃度范圍放置5min的目的供試品溶液有色時(shí)的處理方法有機(jī)藥物中有機(jī)氯雜質(zhì)排除主藥的干擾,第三章,35,⑤ 供試品溶液有色時(shí)的處理方法,內(nèi)消色法如氯法齊明（棕紅色）中氯化物的檢查.,第三章,,,除去樣品中的氯,36,在堿性溶液中加熱使水解，使有機(jī)氯雜質(zhì)形成氯化物，再依法檢查。,⑥藥物中有機(jī)氯雜質(zhì),37,⑦排除主藥的干擾,碘中氯化物和溴化物的檢查

15、取本品1.0g，置乳缽中，分次加水40ml研細(xì)后，過(guò)濾，過(guò)濾中加少量鋅粉使褪色；分取溶液10ml，依次緩緩加氨試液5ml與硝酸銀試液5ml，放置5分鐘，過(guò)濾，濾液移至50ml納氏比色管中，加水使成40ml，滴加硝酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng)后，再加硝酸1ml與水適量使成50ml，與對(duì)照液比較，不得更濃。,38,二重金屬檢查法,重金屬系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì). 如：Ag、Pb、Hg等.

16、 重金屬存在影響藥物的穩(wěn)定性及安全性. 鉛易在體內(nèi)積蓄中毒,以Pb為代表.,第三章,1.重金屬的概念,39,二重金屬檢查法,適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物.,第三章,第一法 硫代乙酰胺法,40,二重金屬檢查法,1 原 理,,41,甲管,乙管,丙管,2 操作方法,42,判斷結(jié)果：當(dāng)丙管的顏色不淺于甲管時(shí)，乙管的顏色不得深于甲管。當(dāng)丙管的顏色淺于甲管時(shí)，應(yīng)取樣按第二法重新檢查。如在甲管中滴加稀焦糖

17、溶液或其它無(wú)干擾的有色溶液，仍不能使顏色一致時(shí)，應(yīng)取樣按第二法檢查。,43,,3.結(jié)果觀察：,,對(duì)照管,樣品管,44,二重金屬檢查法,①  標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度②  硫代乙酰胺試液③  溶液的pH④  供試品溶液有顏色時(shí)的處理⑤  干擾物的排除方法,第三章,4．討論,45,二重金屬檢查法,①  標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度,適

18、宜目視比色的濃度范圍:每27ml溶液中含10μg~20 μg相當(dāng)于：鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液含Pb2+ 10?g/ml ： 1~2ml,第三章,46,二重金屬檢查法,②  硫代乙酰胺試液,H2S試液：惡臭和毒性；不穩(wěn)定；易被空氣氧化而析出硫；濃度難以控制.,第三章,改用硫代乙酰胺為顯色劑（95版藥典）硫代乙酰胺在實(shí)驗(yàn)條件下水解產(chǎn)生H2S,與重金屬離子反應(yīng).,47,二重金屬檢查法,pH在3.0~3.5時(shí),

19、呈色較完全.酸度增大, 呈色變淺甚至不呈色.,第三章,溶液的pH對(duì)于金屬離子與硫化氫呈色影響較大.,③  溶液的pH,48,二重金屬檢查法,④ 供試品溶液有顏色時(shí)的處理,第三章,a.外調(diào)色法 b.內(nèi)消色法,49,二重金屬檢查法,⑤ 干擾物的排除方法,干擾：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,產(chǎn)生混濁影響檢查.,供試品中微量高價(jià)Fe3+存在,第三章,如：葡萄糖酸亞鐵中重

20、金屬的檢查.,排除：加入抗壞血酸使Fe3+還原為Fe2+.,50,二重金屬檢查法,,1.原理 　　供試品先熾灼破壞后,使有機(jī)結(jié)合的重金屬游離, 再按第一法檢查.,第三章,第二法 熾灼后硫代乙酰胺法,適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇的有機(jī)藥物.,51,二重金屬檢查法,2. 操作,第三章,緩緩熾灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供試品 炭化

21、 加熱 HNO3 500-600℃H2SO4 除盡 放冷 完全灰化 蒸干HCl 2ml 水15ml

22、 中性 甲管 蒸干 氨試液按照第一法操作,,,,,,,,,,52,供試品試液 蒸干 加醋酸鹽緩沖液+水 微熱溶解后 移至乙管 加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液+水 乙管甲管顯示的顏色不得深于乙管,,,,,,,53,二重金屬檢查法,a. H2SO4炭化使有機(jī)結(jié)合的金屬釋放；并成硫酸鹽,第三章,3. 討　論,b. HNO3使得

23、到殘?jiān)M(jìn)一步氧化，破壞完全；要除盡氧化氮。c. 熾灼溫度嚴(yán)格控制：500-600℃；,d. HCl使重金屬變成可測(cè)定的鹽酸鹽。,54,二重金屬檢查法,e. NH3 T.S （用酚酞）中和多余的鹽酸；,第三章,3. 討　論,f. 含鈉鹽或氟的有機(jī)藥物在熾灼時(shí) 改用鉑坩堝或硬質(zhì)玻璃 (瑪瑙) 蒸 發(fā)皿.如：鹽酸氟奮乃靜中重金屬檢查,55,二重金屬檢查法,,,第三章,第三法 硫化鈉法,顯色劑

24、,1. 原理,56,二重金屬檢查法,,適用于難溶于稀酸但能溶于堿性溶液的藥物 如：磺胺類與巴比妥類藥物,第三章,57,二重金屬檢查法,,3. 討論,Na2S 對(duì)玻璃有腐蝕性,久置產(chǎn)生絮狀物, 應(yīng)臨用新配.,第三章,2. 方法,58,(二) 白田道夫法,(一) 古蔡氏法,(三) Ag-DDC法,第三章,三砷鹽檢查法,59,三砷鹽檢查法,(一) 古蔡氏法（Gutzeit）,1. 原 理,60

25、,第三章,C,三砷鹽檢查法,61,3　操作,供≯標(biāo),62,4. 討 論,1)試劑的作用,a. KI的作用——還原劑：As5+→As3+,,第三章,三砷鹽檢查法,63,第三章,三砷鹽檢查法,Ⅰ. (As5+→As3+) 加快反應(yīng)速度,b.酸性SnCl2的作用,64,Ⅱ. 將I2再還原為I-，促進(jìn)AsH3不斷生成,65,第三章,三砷鹽檢查法,Ⅲ. SnCl2與Zn粒表面形成Zn-Sn齊

26、 ——起去極化作用,使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生.,66,第三章,三砷鹽檢查法,c.PbAc2棉花的作用,——排除硫化物的干擾,67,a. 供試品是硫化物,亞硫酸鹽,硫代硫酸鹽,排除方法：加入濃硝酸處理,第三章,干擾物的排除,三砷鹽檢查法,68,Fe3+能消耗還原劑(KI、SnCl2), 并能氧化砷化氫.,排除方法：先加酸性SnCl2試液使 Fe3+ → Fe2+,第三章,三

27、砷鹽檢查法,b. 供試品是鐵鹽(Fe3+),69,c. 供試品是環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物 形成共價(jià)鍵結(jié)合的砷化物,解決方法：進(jìn)行有機(jī)破壞 ——酸破壞法或堿破壞法,第三章,三砷鹽檢查法,70,堿破壞法　　a 加入氫氧化鈣 500-600 ?C灼燒 　例：酚磺酞　　b 加入無(wú)水碳酸鈉堿融 　　　　例：苯甲酸鈉,第三章,三砷鹽檢查法,酸破

28、壞法 加稀硫酸與溴化鉀溴試液 例：葡萄糖中砷鹽檢查,71,古蔡氏法特點(diǎn),第三章,三砷鹽檢查法,72,第三章,三砷鹽檢查法,(二) 白田道夫法,對(duì)含銻藥物中砷鹽的檢查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.,73,第三章,三砷鹽檢查法,1. 原 理,SnCl2在HCl中能將砷鹽還原為棕褐色的膠態(tài)砷, 與一定量的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液按同法處理后進(jìn)行比較, 判斷供試品中砷鹽的限量.,74,2. 白田

29、道夫法的特點(diǎn),優(yōu)點(diǎn)：不受Sb干擾,缺點(diǎn)：靈敏度低 ——20?gAs2O3/10ml 加入少量HgCl2,靈敏度提高至2 ?gAs2O3（1.5 ?gAs）/10ml.,第三章,三砷鹽檢查法,75,(三) 二乙基二硫代氨基甲酸銀法 (Ag-DDC法) silver diethyldithiocarbamate,第三章,本法不僅用于砷鹽

30、的限量檢查, 而且可用作微量砷鹽的含量測(cè)定.,76,第三章,1. 原 理,Ag－DDC溶液,77,2. Ag-DDC法的特點(diǎn),a 靈敏度高 0.5 ?gAs/30ml b 可目視或儀器測(cè)定,還可定量 c Sb干擾?。?00μg）,第三章,三砷鹽檢查法,78,四鐵鹽檢查法,第一法 硫氰酸鹽法,1. 原理 鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配離子,與一

31、定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后所呈的顏色進(jìn)行比較.,,第三章,79,四鐵鹽檢查法,,,,,第三章,2. 操作,?,?,?,供試液管與對(duì)照液管顏色不一致怎么辦?,80,六熾灼殘?jiān)鼨z查法,1、熾灼殘?jiān)x,81,2. 方法,,82,恒重：兩次熾灼的重量差異≯0.3mg,熾灼至恒重的第二次稱重應(yīng)在繼續(xù)熾灼30分鐘后進(jìn)行。,灰分= 殘?jiān)佰釄逯?- 空坩堝重,83,,問(wèn)題：如果殘?jiān)柽M(jìn)行重金屬檢查需加熱溫度是多少？,84,七

32、干燥失重,1、定義：藥物在規(guī)定條件下，經(jīng) 干燥后所減失的量。,,干燥至恒重：兩次干燥后的重量差異≯0.3mg,第二次稱重應(yīng)在實(shí)驗(yàn)條件下繼續(xù)干燥1hr后進(jìn)行。,85,七干燥失重,2、干燥失重的內(nèi)容物：水分、揮發(fā)性物質(zhì)等。,3、測(cè)定方法,常壓恒溫干燥法：一般烘箱，105℃干燥至恒重。適用于受熱穩(wěn)定的藥物。,86,七干燥失重,,干燥劑干燥法：常用干燥劑：變色硅膠、P2O5 、硫酸

33、適用于受熱分解或易揮發(fā)的藥物。,減壓干燥法與恒溫減壓干燥法：用減壓干燥器、恒溫減壓干燥箱。 適用于mp較低，受熱不穩(wěn)定，水分難除掉。,87,,,,在程序控制溫度的情況下,測(cè)定物質(zhì)的物理、化學(xué)變化與溫度關(guān)系的一類儀器分析方法. 研究藥物的多晶型、純度、熱穩(wěn)定性等,七干燥失重,熱分析法,88,(一) 熱重分析法（TGA） (二) 差示熱分析法（DTA） (三) 差示掃描量熱法（DSC）,89,,,八水

34、分測(cè)定法,Ch.P收載測(cè)定藥物水分方法有：費(fèi)休氏法和甲苯測(cè)定法 費(fèi)休氏法可準(zhǔn)確測(cè)定藥物中的結(jié)晶水、吸附水和游離水。 應(yīng)用具有β－內(nèi)酰胺和酰胺結(jié)構(gòu)的藥物及有引濕性的藥物。,90,1. 原理：,2. 計(jì)算,供試品水分的含量％,91,A-----供試品所消耗費(fèi)休氏試液的體積（ml）B-----為空白所消耗費(fèi)休氏試液的體積（ml）F-----為每1ml費(fèi)休氏液相當(dāng)于水的重量（mg）W----為

35、供試品的重量,92,討論：費(fèi)休氏試液中無(wú)水吡啶、無(wú)水甲醇的作用。 加入無(wú)水吡啶能定量地吸收產(chǎn)物HI和SO3使反應(yīng)向正方向進(jìn)行;無(wú)水甲醇使硫酸酐吡啶穩(wěn)定,93,2. F值用一定量的水標(biāo)定;3. 終點(diǎn)指示:碘顏色的變化（淡黃→紅棕色），永停滴定法,94,,,,九殘留溶劑測(cè)定法,藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過(guò)程使用的，但在工藝過(guò)程中未能除去的有機(jī)溶劑。,Ch.P2005采用GC

36、法檢查殘留有機(jī)溶劑,95,對(duì)三類有機(jī)溶劑規(guī)定了限量1、色譜條件：采用的色譜柱：填充柱 毛細(xì)管柱,96,檢測(cè)器： 火焰離子化檢測(cè)器（FID) 電子捕獲檢測(cè)器(ECD)前者是常用的，對(duì)含碳?xì)涞挠袡C(jī)化合物；后者對(duì)含鹵素的殘留溶劑。,97,2. 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)理論板數(shù)：填充柱大于1000 毛細(xì)管柱大于5000分離度大于1.5重復(fù)性:n=5，內(nèi)標(biāo)法 RSD

37、≤ 5％ 外標(biāo)法 RSD ≤ 10％,98,,,,八有機(jī)殘留溶劑,溶液直接進(jìn)樣法毛細(xì)管頂空進(jìn)樣法毛細(xì)管頂空進(jìn)樣程序升溫法,適用于揮發(fā)性大的組分；樣品處理簡(jiǎn)單，可避免供試品中非揮發(fā)性組分對(duì)色譜柱的污染。,3. 進(jìn)樣方法：,99,100,,,第三章,特殊雜質(zhì),是指在該藥物生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中,根據(jù)其生產(chǎn)方法、工藝條件及藥物本身結(jié)構(gòu)性質(zhì)可能引入的特有雜質(zhì). 阿司匹林——水楊酸

38、 鹽酸普魯卡因注射液——對(duì)氨基苯甲酸,101,特殊雜質(zhì)的檢查法,二、光譜分析法,一、色譜分析法,三、物理分析法,四、化學(xué)分析法,102,色譜法 (一) 薄層色譜法(TLC) (二) 高效液相色譜法(HPLC) (三)氣相色譜法(GC) （四）毛細(xì)管電泳法（HPCE）,一色譜法,103,根據(jù)藥物與雜質(zhì)對(duì)吸附劑的吸附或?qū)φ归_(kāi)劑的解析能力不同(Rf值的差異), 加以分離和檢查.,一色譜法,(一)薄層

39、色譜法(TLC),104,一色譜法,本法靈敏、簡(jiǎn)便、快速； 不需特殊的設(shè)備、費(fèi)用低； 分離和鑒定同步進(jìn)行.,1. TLC法特點(diǎn),105,一色譜法,我國(guó)藥典2005年版一部 1146 個(gè)品種中薄層色譜鑒別方法 1532項(xiàng)。,106,2.薄層色譜法應(yīng)用1) 雜質(zhì)對(duì)照品法,——適用于雜質(zhì)已知并有雜質(zhì)對(duì)照品的情況. 方法 根據(jù)雜質(zhì)限量, 取供試品溶液和一定濃度的雜質(zhì)對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)于同一

40、薄層板上展開(kāi),定位后進(jìn)行檢查.,一色譜法,107,,例：鹽酸左旋咪唑中的“噻唑鹽酸鹽”檢查,供試品溶液：取本品配成0.10g/ml 雜質(zhì)對(duì)照品溶液： 0.50mg/ml 吸取上述兩種溶液各0.5μl點(diǎn)于同一硅膠G板展開(kāi)劑：甲苯－甲醇－冰醋酸(45:8:4)顯色劑：碘蒸汽判斷：供試品中與對(duì)照品相應(yīng)的斑點(diǎn)≯對(duì)照品斑點(diǎn),一色譜法,108,一色譜法,——適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定或無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品的情況. 要求

41、供試品與所驗(yàn)雜質(zhì)對(duì)顯色劑所顯顏色相同，靈敏度接近。,2)供試品溶液自身稀釋對(duì)照法,109,例：雙氫青蒿素中“有關(guān)物質(zhì)” 檢查供試液:用三氯甲烷配成：20mg/ml對(duì)照液:0.4mg/ml(供試液稀釋50倍)判斷:供試液的雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)≯1個(gè),且供試液的雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色≯對(duì)照液主斑點(diǎn)顏色.,110,3). 雜質(zhì)對(duì)照法與供試品溶液自身稀釋對(duì)照法并用 當(dāng)藥物中存在多個(gè)雜質(zhì)，已知雜質(zhì)有對(duì)照品，未知雜質(zhì)可用供試品溶液自身稀釋對(duì)照法。,11

42、1,,——選用質(zhì)量符合規(guī)定的與供試品相同的藥物作為對(duì)照品.,4) 標(biāo)準(zhǔn)藥物對(duì)照法,一色譜法,無(wú)適合的雜質(zhì)對(duì)照品；雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與主成分斑點(diǎn)的顏色有差異，難以判斷限量。,112,113,,(二) 高效液相色譜法(HPLC),特點(diǎn) 分離效能高、應(yīng)用范圍廣，能準(zhǔn)確、快速、分離分析同時(shí)進(jìn)行.,114,高效液相色譜儀簡(jiǎn)圖,115,,,,慢中等快,色譜分離,116,,1. 峰面積歸一化法2. 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法3.

43、加校正因子的主成分自身對(duì)照法4. 加校正因子的內(nèi)標(biāo)法5. 外標(biāo)法,117,1.不加校正因子的主成分自身對(duì)照法,本法的前提是假定雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子基本相同。一般情況下，如雜質(zhì)與主成分的分子結(jié)構(gòu)相似，其響應(yīng)因子差別不會(huì)太大（0.9~1.1)S-供試品的對(duì)照品R-雜質(zhì)的對(duì)照品,118,,不加校正因子的主成分自身對(duì)照法,例：醋酸氫化可的松中“有關(guān)物質(zhì)”的檢查,供試品溶液：本品約17mg →50ml對(duì)照溶液：精密吸取1ml →1

44、00ml取對(duì)照溶液20μl進(jìn)樣，調(diào)節(jié)靈敏度，使主峰為滿量程的40％精密量取上述二溶液，分別進(jìn)樣20 μl,119,,記錄色譜圖三倍主峰的tR最大單個(gè)雜質(zhì)峰面積≯對(duì)照溶液主峰面積其他單個(gè)雜質(zhì)面積≯對(duì)照溶液主峰面積的1/2各雜質(zhì)峰面積的和≯對(duì)照溶液主峰面積的2倍,120,2.加校正因子的主成分自身對(duì)照法,相對(duì)響應(yīng)因子超出0.9-1.1范圍時(shí)，宜用雜質(zhì)對(duì)照品法計(jì)算含量，也可用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。理想的定量方法為已知雜質(zhì)對(duì)照

45、品法與未知雜質(zhì)不加校正因子的主成分自身對(duì)照法兩者的結(jié)合。,121,,（1）建立方法按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算校正因子，直接載入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測(cè)峰面積。(2)雜質(zhì)的測(cè)定按雜質(zhì)限量要求配制對(duì)照溶液，調(diào)劑檢測(cè)靈敏度，使對(duì)照液的主成分峰為滿量程的10～25%，取供試品分析，時(shí)間為主峰保留時(shí)間的2～3倍。,122,,(三)氣相色譜法(GC),檢查方法:同高效液相色譜法.,——用于藥物中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查, 如藥物中殘留溶劑等.,123,,

46、(一) 紫外分光光度法 （二）紅外光譜法 （三）原子吸收分光光度法,二、光譜法,124,腎上腺素,腎上腺酮,紫外分光光度法——利用藥物和待檢雜質(zhì)對(duì)光選擇吸收性質(zhì)的差異進(jìn)行.,例1: 腎上腺素中酮體的檢查,125,例：腎上腺素中腎上腺酮的檢查,126,規(guī)定：A310nm≯0.05,2. 方法,3. 限量計(jì)算 腎上腺酮的,127,紅外分光光度法,主要用于藥物中無(wú)效或低效晶型的檢查甲苯咪唑有三種晶型：A,B,CA為無(wú)效

47、晶型，C為有效晶型用含A晶型10%的甲苯咪唑?yàn)閷?duì)照品控制A晶型的量 ≯對(duì)照品,128,原子吸收分光光度法,主要用于金屬雜質(zhì)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)加入法對(duì)照液：供試品+限度量的待測(cè)元素溶液供試品：讀數(shù)b對(duì)照液：讀數(shù)ab＜（a-b）合格,129,,例：乙醇中不揮發(fā)物的檢查.,三物理分析法,1、 臭味差異,2、揮發(fā)性差異,130,,根據(jù)藥物與雜質(zhì)溶解度的差異　　　例