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文檔簡(jiǎn)介
1、色譜法色譜法介紹介紹色譜分離技術(shù)是通過樣品組分在固定相和流動(dòng)相兩相中的分布差異進(jìn)行分離的技術(shù)。其中固定相可以是固體、有固相支持的液體或凝膠。固定相可以填充于柱、分散成層、分布為膜或者應(yīng)用于其他技術(shù)中。流動(dòng)相可以為氣態(tài)、液態(tài)或超臨界流體。分離可以基于吸附性、質(zhì)量分布(分配)或離子交換,也可以基于分子物理化學(xué)性質(zhì)的差異,如大小、質(zhì)量和體積。本章節(jié)包括了基本步驟、定義和對(duì)一般參數(shù)的計(jì)算并描述了對(duì)于系統(tǒng)適應(yīng)性的基本要求。在USP中應(yīng)用于定量和定
2、性分析的色譜方法類型有柱色譜法、氣象色譜法、紙色譜法、薄層色譜法(包括高效薄層色譜)和加壓液相色譜法(一般稱作高壓或高效液相色譜)?;静襟E基本步驟本部分描述了使用某種色譜方法的基本步驟。除另有各論規(guī)定外,以下色譜分離方法的步驟將會(huì)被遵循。紙色譜法紙色譜法固定相固定相:固定相為一張適當(dāng)質(zhì)地和厚度的紙。色譜圖的形成過程可以是上行的,這樣溶劑被毛細(xì)管作用力支撐著沿著紙向上,這個(gè)過程也可以是下行的,在此情況下溶劑流動(dòng)也受到重力的影響。與溶劑流
3、動(dòng)有關(guān)的紙張紋理定向應(yīng)該在一系列色譜圖中保持恒定。(纖維方向通常由制造商在色譜紙的包裝上標(biāo)出。)儀器儀器:紙色譜法的必備儀器包括裝有添加溶劑的入口的氣密室和短于該室內(nèi)部高度5cm的耐腐蝕材料支架。該支架作為用于溶劑槽以及用于抗虹吸棒的支撐,這些抗虹吸棒依次撐起色譜紙。氣密室的底部以規(guī)定的容積系統(tǒng)或流動(dòng)相覆蓋。使用以規(guī)定溶劑系統(tǒng)潤濕的紙張襯托于氣密室的內(nèi)壁,以增加氣密室的溶劑蒸汽飽和度。斑點(diǎn)斑點(diǎn):將待分析的一個(gè)或多個(gè)物質(zhì)溶解于適當(dāng)溶劑中。
4、以微量吸管吸取適當(dāng)體積的溶液,其中通常含有120g該化合物,點(diǎn)樣為610mm大小斑點(diǎn)且斑點(diǎn)間的間隔不小于3cm。下行色譜法步驟下行色譜法步驟1.帶斑點(diǎn)的色譜紙以抗虹吸棒懸掛在氣密室內(nèi),該棒將該色譜紙的上端固定在溶劑槽中。(注:確保色譜紙掛在抗虹吸棒下的部分自由的懸掛在氣密室中,沒有接觸到支架、室壁或室內(nèi)的液體。2.氣密室被密閉,以便使該室與色譜紙達(dá)到溶劑蒸汽平衡(飽和)釋放任何多余壓力。3.在氣密室平衡后,將配制好的流動(dòng)相溶劑通過入口添
5、加到溶劑槽中。4.關(guān)閉入口,且讓流動(dòng)溶劑相沿著色譜紙向下行進(jìn)需要的距離。5.從氣密室內(nèi)取出色譜紙。6.迅速標(biāo)注溶劑前沿的位置,并干燥色譜紙。7.直接或用適當(dāng)措施顯示被分離出來的一個(gè)或多個(gè)藥物的斑點(diǎn)位置之后,觀察并測(cè)量該色譜圖。上行色譜法步驟上行色譜法步驟1.將流動(dòng)相加入氣密室底部。固定相固定相:載體通過添加各論中規(guī)定的固定相做出修改。如果液體混合物要用作固定相,應(yīng)在加入載體物前要預(yù)先混合好。流動(dòng)相流動(dòng)相:流動(dòng)相在各論中分別進(jìn)行規(guī)定。如果
6、固定相是一種水溶液,用水使其平衡。如果固定相是一種極性有機(jī)液體,用該液體使其平衡。儀器儀器:除非在具體各論中另有規(guī)定,色譜柱的內(nèi)徑為約22毫米,長度為200至300毫米。附內(nèi)徑約4毫米、長度約50毫米、不帶旋塞的導(dǎo)管。儀器準(zhǔn)備:將一縷玻璃棉填充在色譜柱底部。將規(guī)定體積的固定相與指定數(shù)量的載體相混合成一個(gè)均質(zhì)、蓬松的混合物。轉(zhuǎn)移該混合物至色譜柱,并用輕柔壓力搗實(shí),以獲得一個(gè)均勻結(jié)塊。如果指定數(shù)量的載體多于3克,將此混合物以約2克每份轉(zhuǎn)移至
7、色譜柱,并搗實(shí)每個(gè)部分。如果定量測(cè)定或檢驗(yàn)需要每段指定不同的固定相的多段柱,則在加入并搗實(shí)一段后,直接在此前的段上加入下一個(gè)連續(xù)部分。將一縷玻璃棉填充在裝好的色譜柱上?!咀ⅲ毫鲃?dòng)相適度地流過,或者在反相色譜法中緩慢滴過一個(gè)適當(dāng)填充柱。】如果被分析物的溶液被混合到固定相中,使用約1克載體和若干滴用于配制供試溶液的溶劑組成的混合物來擦洗用于制備供試混合物的燒杯,以完成向色譜柱的定量轉(zhuǎn)移。將一團(tuán)細(xì)玻璃棉裝填在已裝柱的柱填料上。步驟步驟:1.將
8、流動(dòng)相轉(zhuǎn)移至柱內(nèi)置于柱填料上面,并使其在重力影響下沿柱流下。2.在每次變更流動(dòng)相組成之前和洗脫完成之后,以約1毫升流動(dòng)相沖洗色譜柱頂端。3.如果被分析物作為在流動(dòng)相中的溶液被加入到色譜柱中,則使其徹底滲入柱填料中,然后在加入大量流動(dòng)相之前,加入若干小份流動(dòng)相,使每一份徹底滲下去。4.如定量測(cè)定或檢驗(yàn)需要使用連續(xù)安裝的多重色譜柱并且已規(guī)定流動(dòng)相分成幾份加入,則讓每一份徹底滲入每個(gè)色譜柱,并在加入后續(xù)部分之前以流動(dòng)相沖洗每個(gè)色譜柱頂部。氣象
9、色譜法氣象色譜法液體固定相:液體固定相:此類型的固定相可見于填充柱或毛細(xì)管柱中。氣象填充柱:氣象填充柱:在填充柱中,液體相置于一種精細(xì)分割的惰性載體上,例如硅藻土、多孔聚合物、石墨化碳,而該載體裝填到通常內(nèi)徑2至4毫米、長度1至3米的色譜柱中。氣象毛細(xì)管柱:氣象毛細(xì)管柱:在毛細(xì)管柱中,此類色譜柱不含填料,液體相涂于色譜柱的內(nèi)表面上并且可能用化學(xué)鍵合于其上。固體固定相:固體固定相:此類型固定相僅適用于填充柱。在此類型的柱中,固體相是填充于
10、色譜柱中的一種活性吸附劑,如鋁、硅或碳。聚芳烴多孔樹脂,時(shí)常用于填充柱中,不涂布液相。(注:填充柱和毛細(xì)管柱在使用前要調(diào)整至基線和其他性質(zhì)穩(wěn)定。色譜柱和填充材料的供應(yīng)商要對(duì)建議的調(diào)整步驟提供介紹。)儀器:儀器:氣相色譜儀包含載氣源、氣化室、色譜柱、檢測(cè)器和記錄設(shè)備。氣化室、色譜柱、檢測(cè)器都是溫度受控的,且溫度的變動(dòng)亦作為分析的一部分。常見載氣有氦氣、氮?dú)?、或氫氣,根?jù)使用的色譜柱和檢測(cè)器進(jìn)行選擇。檢測(cè)器輸出的數(shù)據(jù)記錄為時(shí)間函數(shù),并且設(shè)備
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