usp法定方法驗(yàn)證

1、USP法定方法驗(yàn)證,Validation of Compendial Procedures,QC·方法驗(yàn)證2009.12,目錄,法定方法的驗(yàn)證,USP與ICH Q2（R1）之間的關(guān)系,鑒別測(cè)試的方法驗(yàn)證,雜質(zhì)測(cè)試的方法驗(yàn)證,含量測(cè)定的方法驗(yàn)證,方法驗(yàn)證匯總,課程目的,明確驗(yàn)證的目的區(qū)分驗(yàn)證和確認(rèn)的區(qū)別描述不同分析方法驗(yàn)證需考慮的條件能夠開展鑒定各種所需性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚴褂肊xcel分析驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)理解新方法驗(yàn)證與替

2、代正式方法的驗(yàn)證這兩者之間統(tǒng)計(jì)學(xué)上的本質(zhì)差別,法定方法的驗(yàn)證,PART I,“驗(yàn)證”的定義,“分析方法驗(yàn)證是一個(gè)通過(guò)實(shí)驗(yàn)室研究來(lái)證明程序的性能參數(shù)符合期望的分析應(yīng)用要求的過(guò)程”—USP“分析方法驗(yàn)證的目的是顯示分析方法適用于它所期望的應(yīng)用目的” —ICH“方法驗(yàn)證是一個(gè)闡述分析方法適合于其使用目的的過(guò)程”

3、 —FDA“…適合于它的使用目的” —關(guān)于驗(yàn)證共同的主題,驗(yàn)證：關(guān)鍵的第一步,在驗(yàn)證開始階段將待驗(yàn)證方法目的清晰的表達(dá)出來(lái)是十分必要的，例如：無(wú)菌測(cè)試：“下列程序適用于確定醫(yī)藥產(chǎn)品是否如所宣稱的那樣是無(wú)菌的，并符合各論中設(shè)定的無(wú)菌測(cè)定要求”下段中表述“這些藥典方法不是設(shè)計(jì)用來(lái)保證各批產(chǎn)品無(wú)菌或已滅菌。相關(guān)產(chǎn)品滅菌或無(wú)菌過(guò)程的驗(yàn)證才是從根本上實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)的”“分析程序

4、的目標(biāo)應(yīng)能被很清晰地被理解，因?yàn)樗鼘⒅鲗?dǎo)哪些驗(yàn)證參數(shù)需要被評(píng)估。” —ICH,驗(yàn)證實(shí)施條件的闡明,提供驗(yàn)證實(shí)施所需的條件是必要的，如果發(fā)現(xiàn)條件與方法所要求條件不一致時(shí)，應(yīng)指出。例如：生物技術(shù)—衍生產(chǎn)品—測(cè)試 全蛋白質(zhì)測(cè)試（Bradford測(cè)試）一節(jié)中提到硅玻璃因和染料結(jié)合而不能使用。同樣不同蛋白在相同量的條件下也會(huì)表現(xiàn)出不同的響應(yīng)值。,驗(yàn)證參數(shù),Accuracy 準(zhǔn)確性Precision 精密度Specificit

5、y 專屬性Detection Limit 檢測(cè)限Quantitation Limit 定量限Linearity 線性Range 范圍,“確認(rèn)”的定義,:“…USP-NF所收載方法的使用者不需要驗(yàn)證這些方法的準(zhǔn)確性和可靠性，但需要確認(rèn)這些方法在實(shí)際使用條件下的適應(yīng)性”。:“確認(rèn)包括所涉及方法的性能參數(shù)，如那些在中描述的，是產(chǎn)生相關(guān)數(shù)據(jù)而不是重復(fù)驗(yàn)證目的”

6、 ——USP“出現(xiàn)在USP中的方法被認(rèn)為已驗(yàn)證，對(duì)于法定方法，廠家必須闡明該方法在實(shí)際使用情況下的狀態(tài)” ——FDA,確認(rèn)的一般要求,“盡管在確認(rèn)法定方法在真實(shí)條件下使用時(shí)的適應(yīng)性不要求進(jìn)行完整的再驗(yàn)證過(guò)程，列在表2中的一些分析參數(shù)可以在確認(rèn)過(guò)程中使用”“特定方法的確認(rèn)僅需要對(duì)被認(rèn)為適宜的參數(shù)進(jìn)行評(píng)估”,小結(jié)

7、,驗(yàn)證：“必須闡明方法適合于它使用目的的一個(gè)過(guò)程”確認(rèn)：“闡明通過(guò)已驗(yàn)證方法進(jìn)行產(chǎn)品測(cè)試的條件確實(shí)適合于該已驗(yàn)證方法的過(guò)程”待驗(yàn)證方法的目的應(yīng)被清晰明確的闡述驗(yàn)證實(shí)施的條件應(yīng)明確提出確認(rèn)包括使用者決定哪些條件將被評(píng)估，選擇適宜數(shù)據(jù)元素進(jìn)行檢查。,USP與ICH Q2（R1）之間的關(guān)系,PART II,概述,方法提交,方法種類,驗(yàn)證參數(shù),準(zhǔn)確性,精密度（1）,精密度（2）重現(xiàn)性,精密度（3）,專屬性的定義（1）,專屬性的定義（

8、2）,檢測(cè)限的定義,定量限的定義,線性的定義,范圍的定義,其余的差別,指導(dǎo)原則的差別,各指導(dǎo)原則的差異：1、 鑒別：中檢所（生物藥）指導(dǎo)原則：專屬性，耐用性通常需要驗(yàn)證；FDA指導(dǎo)原則：耐用性通常不需要驗(yàn)證，只需要驗(yàn)證專屬性；中檢所（化藥）指導(dǎo)原則，ICH指導(dǎo)原則：專屬性需要驗(yàn)證，耐用性的驗(yàn)證無(wú)明確指示。2、 雜質(zhì)檢查（定量實(shí)驗(yàn)）：FDA和ICH指導(dǎo)原則：檢測(cè)限度在有些情況下是需要驗(yàn)證的；中檢所（生物藥）指導(dǎo)原則：檢測(cè)限度

9、通常是不需要驗(yàn)證的；中檢所（化藥）指導(dǎo)原則：無(wú)明確指示。3、雜質(zhì)檢查（限度實(shí)驗(yàn)）：FDA指導(dǎo)原則：耐用性在有些情況下是需要驗(yàn)證的；中檢所（生物藥）指導(dǎo)原則：耐用性通常是需要驗(yàn)證的；中檢所（化藥）指導(dǎo)原則，ICH指導(dǎo)原則指出對(duì)于耐用性的驗(yàn)證并沒(méi)有明確指示。4、含量測(cè)定：各指導(dǎo)原則基本統(tǒng)一，除了檢測(cè)限度和定量限度外，其他各驗(yàn)證項(xiàng)目均需要驗(yàn)證。,鑒別測(cè)試的方法驗(yàn)證,PART III,鑒別實(shí)驗(yàn)評(píng)估的要求,,Specificity

10、 專屬性,ICH,,Specificity 專屬性,USP,專屬性 [1],“適當(dāng)?shù)蔫b別測(cè)試應(yīng)該能夠區(qū)分可能共存的結(jié)構(gòu)相似的化合物。需確證被分析的供試品呈正反應(yīng)（可與已知的對(duì)照品比較），而不含被測(cè)成分的樣品呈負(fù)反應(yīng)。此外，結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。選擇這些潛在的干擾物質(zhì)應(yīng)該基于合理的科學(xué)判斷，考慮有哪些干擾可能出現(xiàn)?！?[Q2(R1)],專屬性 [2],有些分析方法不具備足夠的專屬性 - 滴定法含量測(cè)定

11、- 對(duì)映體含量的非手性方法測(cè)試 - 通過(guò)紫外吸收進(jìn)行的鑒別測(cè)試推薦結(jié)合使用兩種或更多的分析方法以達(dá)到充分的專屬性,專屬性 [3],對(duì)于闡述穩(wěn)定性指示的方法來(lái)說(shuō)，專屬性有其重要。,穩(wěn)定性指示分析,“是能檢測(cè)出原料藥或制劑的性質(zhì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)變化的驗(yàn)證過(guò)的定量分析方法。它可以精確檢出有效成分，而不受降解產(chǎn)物、工藝雜質(zhì)、輔料或其他可能雜質(zhì)的干擾。” FDA工業(yè)指導(dǎo)原則-分析步驟和方法驗(yàn)證，2000,鑒別實(shí)

12、驗(yàn) [1],正反應(yīng)結(jié)果-比較已知的對(duì)照品與包含被分析成分的樣品 - 已建立的測(cè)試方法 - 特征明顯的標(biāo)準(zhǔn)品負(fù)反應(yīng)結(jié)果-不含被測(cè)組分的樣品,鑒別實(shí)驗(yàn) [2],對(duì)于結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物呈負(fù)反應(yīng)。選擇這些潛在的干擾物質(zhì)應(yīng)該基于合理的科學(xué)判斷，考慮有哪些干擾可能出現(xiàn)。,鑒別實(shí)驗(yàn) [3],USP各論中常采用多個(gè)方法進(jìn)行鑒別測(cè)試 例如：雙氯芬酸鈉A: 紅外吸收B: 色譜純度測(cè)試中，雙氯芬酸峰在測(cè)試溶

13、液圖譜中的保留時(shí)間與分離度溶液圖譜中的一致C: 灼燒殘?jiān)难嫔磻?yīng)與鈉一致,紅外吸收光譜（摘自）,“待測(cè)樣品紅外譜圖的最大吸收峰與經(jīng)相似處理過(guò)的USP標(biāo)準(zhǔn)品的最大吸收峰波數(shù)一致。待測(cè)樣品干燥條件需與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)定的干燥條件一致，除非標(biāo)準(zhǔn)品另有規(guī)定或不需干燥?！?保留時(shí)間,需要注意以下重要的兩點(diǎn)（摘自）“色譜保留時(shí)間是化合物表現(xiàn)的性質(zhì)但不是特有的。待測(cè)品和標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間一致可用作結(jié)構(gòu)鑒定的一個(gè)特征，但僅靠此一點(diǎn)不足以確認(rèn)?！蓖?/p>

14、一個(gè)給定化合物的絕對(duì)保留時(shí)間在不同的譜圖里可能是不一樣的。,鈉（摘自）,“含鈉的化合物在無(wú)色的火焰中顯示亮黃色”,如果一切順利,若待測(cè)樣品中包含適當(dāng)?shù)南嗨频幕衔铮宜械臏y(cè)試結(jié)果一致（根據(jù)實(shí)際情況呈正反應(yīng)或者負(fù)反應(yīng)），則該鑒別測(cè)試方法的驗(yàn)證完成。注：相似化合物的選擇要基于良好合理的科學(xué)判斷。不管用何種方法，要確保在驗(yàn)證方法里描述清楚有哪些相似化合物需要參與驗(yàn)證。你不需要驗(yàn)證所有可能的污染物。若生產(chǎn)/合成路線發(fā)生本質(zhì)變化，鑒別測(cè)試部

15、分則需要重新驗(yàn)證。,假如進(jìn)展不順利,嘗試使用不同的條件，檢驗(yàn)這種方法是否有效。如果找不到使之有效的條件，就要嘗試其他的方法。對(duì)于微生物方法經(jīng)常性的事情就是改變所需微生物的生長(zhǎng)條件，使其能適合法定方法的應(yīng)用。,結(jié)束語(yǔ),謹(jǐn)記，鑒別測(cè)試的最終目的是確保識(shí)別出被測(cè)組分。無(wú)論最終采用了一系列怎樣的方法，必須能夠在其他組分可能存在的情況下，識(shí)別出樣品中被測(cè)組分。,雜質(zhì)檢查方法的驗(yàn)證,www.gensci.com.cn,雜質(zhì)定量檢查方法,,,IC

16、H：Specificity 專屬性Accuracy 準(zhǔn)確度Precision(all three aspects) 精密度（三個(gè)方面）Detection limit 檢測(cè)限Quantitation limit 定量限Linearity 線性Range 范圍 Robustness 耐用性,,,,,驗(yàn)證內(nèi)容,USP：Specificity 專屬性Accuracy 準(zhǔn)確度Precision(all thr

17、ee aspects) 精密度（三個(gè)方面）Detection limit 檢測(cè)限Quantitation limit 定量限Linearity 線性Range 范圍Robustness 耐用性,注：ICH、FDA，檢測(cè)限在有些情況下是需要驗(yàn)證的 ；SFDA指導(dǎo)原則，檢測(cè)限通常是不需要驗(yàn)證的,雜質(zhì)限度檢查方法,,,ICH：Specificity 專屬性Detection limit 檢測(cè)限Robustness

18、耐用性,,,,驗(yàn)證內(nèi)容,USP：Specificity 專屬性Detection limit 檢測(cè)限Accuracy(may be required) 準(zhǔn)確度(可能要求)Range(may be required) 范圍(可能要求)Robustness 耐用性,FDA指導(dǎo)原則：耐用性在有些情況下是需要驗(yàn)證的；SFDA指導(dǎo)原則：耐用性通常是需要驗(yàn)證的,專屬性 [1],專屬性： 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等

19、）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。 能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)受到干擾程度的度量。,專屬性 [2],雜質(zhì)檢查專屬性含義： ICH Q2A “純度檢查：確保采用的分析方法可檢出被分析物中雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、溶劑殘留量等” USP “純度檢查：確保實(shí)施的所有分析方法能夠準(zhǔn)確檢出被分析物的雜質(zhì)含量（如有關(guān)物質(zhì)檢查、重金屬限度、

20、有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)）” SFDA《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》 “作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機(jī)溶劑等”,專屬性 [3],色譜法和其他方法：附代表性圖譜說(shuō)明專屬性，并應(yīng)恰當(dāng)?shù)貥?biāo)明諸成分在色譜方法中，應(yīng)在一等程度上考察關(guān)鍵性的分離。關(guān)鍵性的分離-可通過(guò)兩個(gè)洗脫程度最接近的化合物的分離度來(lái)證明,專屬性 [4],非專屬性的含量測(cè)定方法可采用其他分析方法予以支持

21、 例：rh-GH HPLC分子排阻法測(cè)定rh-GH含量，HPLC反相法測(cè)定相關(guān)物質(zhì),專屬性 [5],有兩種基本途徑用來(lái)確定雜質(zhì)檢查方法的專屬性有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品沒(méi)有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品,專屬性 [6],雜質(zhì)獲得 - 可從歷史數(shù)據(jù)獲得降解物和雜質(zhì)的信息 - 建立雜質(zhì)和降解產(chǎn)物庫(kù)并對(duì)其定性 - 可以獲得足夠的量,專屬性 [7],當(dāng)雜質(zhì)可以獲得時(shí) - 雜質(zhì)檢查向原料藥或制劑中加入適量

22、的雜質(zhì)證明雜質(zhì)之間以及雜質(zhì)和樣品中其它物質(zhì)能夠得到分離,專屬性 [8],當(dāng)雜質(zhì)不能獲得時(shí) 破壞性試驗(yàn) 高溫、高濕、光照、酸破壞、堿破壞、氧化破壞 注意觀察降解產(chǎn)物生成情況，分離度是否符合要求。注意掌握破壞條件，應(yīng)使主成分產(chǎn)生10-30%降解。10%左右個(gè)案研究：破壞試驗(yàn)條件溶液置于0.05M鹽酸（8小時(shí)）溶液置于0.02M氫氧化鈉（8小時(shí)）溶液置于0.15%H2O2 （1.5小時(shí)）將樣品溶液加熱至100

23、度（9小時(shí)）紫外光照射（14天）,專屬性 [9],破壞實(shí)驗(yàn) 應(yīng)將破壞前后檢出的雜質(zhì)情況進(jìn) 行比較，比較前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量；證明雜質(zhì)之間以及雜質(zhì)和樣品中其它物質(zhì)能夠得到分離 峰純度檢測(cè)是很有用的，它顯示被測(cè)物色譜峰是單個(gè)還是多個(gè)成分(如二極管陣列、質(zhì)譜)。,雜質(zhì)檢查的準(zhǔn)確性 [1],準(zhǔn)確性：對(duì)于雜質(zhì)定量檢查（非限度檢查），有必要確定方法的準(zhǔn)確性定義USP – “用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值的接近的程度” IC

24、H – “用該方法測(cè)定的結(jié)果與被認(rèn)可的常規(guī)真實(shí)值或參考值之間接近的程度”SFDA (化藥) – “準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。有時(shí)也稱真實(shí)度。SFDA(生物藥) – 分析方法的準(zhǔn)確性是指測(cè)定值與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值的一致性或接近程度。,雜質(zhì)檢查的準(zhǔn)確性 [2],準(zhǔn)確性 - 當(dāng)雜質(zhì)可獲得時(shí)在試樣中加入雜質(zhì) - 當(dāng)雜質(zhì)不能獲得時(shí)與參考方法比較采用藥品的回收率,雜質(zhì)檢查的準(zhǔn)確

25、性 [3],參見(jiàn)A.“準(zhǔn)確性可通過(guò)加入已知量的被測(cè)物的回收率（%）計(jì)算得到B. 準(zhǔn)確性可通過(guò)計(jì)算平均值和被認(rèn)可的真實(shí)值的偏差得到，結(jié)果應(yīng)含置信區(qū)間?！?雜質(zhì)檢查的準(zhǔn)確性 [4],回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M）、空白、已知量A的對(duì)照品測(cè)定,回收率：,加樣回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M）、背景值（P） 、 已知量的加入的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）的值（A）,59,回收率：,雜質(zhì)檢查的準(zhǔn)確性 [5],回收實(shí)驗(yàn),雜質(zhì)檢查的準(zhǔn)確性 [6],加樣回收實(shí)驗(yàn),雜質(zhì)檢查的準(zhǔn)確

26、性 [7],“ICH推薦，準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)應(yīng)涵蓋所規(guī)定的范圍，至少用3個(gè)不同濃度，并至少測(cè)定9次（例如，3個(gè)不同濃度樣品，各測(cè)定3次）”雜質(zhì)檢查準(zhǔn)確性參考接受標(biāo)準(zhǔn)：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80.0%-120.0%之間，RSD應(yīng)不大于10%。,精密度[1],精密度雜質(zhì)定量測(cè)定要做精密度考察精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)CV）

27、表示,偏差(d):,標(biāo)準(zhǔn)偏差SD:,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD:,64,精密度[2],精密度[3],精密度應(yīng)在方法規(guī)定的定量范圍內(nèi)求得精密度可以從三個(gè)層次考察：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。方法的精密度應(yīng)包括從樣品準(zhǔn)備到最終測(cè)試結(jié)果中所有的變異來(lái)源,重復(fù)性,重復(fù)性 重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。 重復(fù)性測(cè)定可在規(guī)定范圍內(nèi)，用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，即

28、3×3水平或100％的濃度水平，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)雜質(zhì)檢查重復(fù)性接受標(biāo)準(zhǔn)：RSD＜15％,中間精密度,中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度（三人三機(jī)）。,接受標(biāo)準(zhǔn)：RSD＜20％,中間精密度,中間精密度試驗(yàn)變動(dòng)因素 - 分析人員 - 日期 - 設(shè)備 - （色譜柱）,中間精密度,由變動(dòng)因素影響的測(cè)試結(jié)果的重現(xiàn)性

29、 HPLC,重現(xiàn)性,重現(xiàn)性指不同實(shí)驗(yàn)室之間不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。,精密度和準(zhǔn)確度,,精密度和準(zhǔn)確度,準(zhǔn)確度一般以回收率（%）表示精密度一般以RSD表示,檢測(cè)限-雜質(zhì)[1],檢測(cè)限： 有些雜質(zhì)檢查方法用于限度檢查。這些方法的驗(yàn)證需要測(cè)定檢測(cè)限 ：“檢測(cè)限是指在實(shí)驗(yàn)條件下，被分

30、析物能夠被檢測(cè)到的最低量，但不必準(zhǔn)確定量。”,檢測(cè)限-雜質(zhì)[2],：“對(duì)于非儀器分析方法，檢測(cè)限一般通過(guò)對(duì)一系列有已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，確定能被可靠檢測(cè)出的最低濃度或量” “對(duì)于儀器分析法，也可采用非儀器分析方法中所描述的相似方法。但要注意這僅適用于沒(méi)有背景噪音的儀器”,檢測(cè)限 [3],在Q2(R1)中描述了兩種測(cè)定儀器檢測(cè)限的方法根據(jù)信噪比根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率 - 根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差 - 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線

31、,檢測(cè)限 [4],信噪比法：一般以信噪比為3：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。,檢測(cè)限 [5],根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率 檢測(cè)限（DL）可表示為: DL=3.3δ /S 其中，δ =標(biāo)準(zhǔn)偏差，S=斜率,檢測(cè)限[6],定量限 [1],定量限：某些雜質(zhì)檢查方法用于定量。這些方法的驗(yàn)證需要進(jìn)行定量限的測(cè)定“定量限是指在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中被

32、測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，并且結(jié)果應(yīng)具有可接受的精密度和準(zhǔn)確度?！?定量限 [2],在Q2(R1)中描述了兩種測(cè)定儀器定量限的方法根據(jù)信噪比根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率,定量限 [3],信噪比法：一般以信噪比為10：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定定量限。,可接受標(biāo)準(zhǔn)：保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%。,定量限 [4],根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率 定量限（QL）

33、可表示為 QL=10δ /S 其中，δ =標(biāo)準(zhǔn)偏差，S=斜率,定量限[5],雜質(zhì)-線性,線性：“分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi)，直接得到的或經(jīng)明確的數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)化得到的測(cè)試結(jié)果與被分析物的濃度成比例關(guān)系的能力?！?雜質(zhì)-線性,線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，雜質(zhì)定量試驗(yàn)需要驗(yàn)證線性。線性應(yīng)在分析需要的范圍內(nèi)進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)適宜的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法線性回歸（y =

34、mx + b）相關(guān)系數(shù)，y軸截距（b），斜率（m）,雜質(zhì)-線性,驗(yàn)收準(zhǔn)則應(yīng)權(quán)衡科學(xué)的嚴(yán)謹(jǐn)性和實(shí)際的需要線性- - r2最小值- ≥0.99到≥0.9999 - Y軸截距- 在標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)值的n%內(nèi)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上 不顯著,雜質(zhì)-線性,相關(guān)性- r2 ≥ 0.990Y軸截距- 小于標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)值的±20%，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著,范圍[1],范圍是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高、低限濃度或量的

35、區(qū)間。范圍是規(guī)定值，在試驗(yàn)研究開始前應(yīng)確定驗(yàn)證的范圍。,范圍[2],雜質(zhì)測(cè)定范圍： SFDA:應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)規(guī)定限度的±20% ICH: 應(yīng)為雜質(zhì)報(bào)告水平至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的120% - 對(duì)已知有異常功效、能產(chǎn)生毒性或不可預(yù)見(jiàn)的藥理作用的雜質(zhì)，檢測(cè)/定量限應(yīng)與雜質(zhì)需控制的水平相當(dāng)如果用一個(gè)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行含量和純度檢查，且僅用100%的標(biāo)準(zhǔn)品，線性范圍應(yīng)覆蓋報(bào)告水品至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的120%,范圍[3],90,耐用性,耐用性

36、系指測(cè)定條件發(fā)生小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。 耐用性主要考察方法本身對(duì)于可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力。開始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。,耐用性,液相色譜的典型變動(dòng)： ? 流動(dòng)相pH（±0.5) ? 流動(dòng)相組成(有機(jī)相±5%） ? 色譜柱（同一廠家的三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固 定相和填充物，尺寸） ? 溫

37、度和流速(±10%） ? 檢測(cè)波長(zhǎng)(±5nm)氣相色譜的典型變動(dòng)： ? 色譜柱（同一廠家的三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相 和填充物，尺寸） ? 溫度 ? 流速,耐用性,如果測(cè)試條件要求苛刻 ，則建議在方法中予以寫明。,www.gensci.com.cn,Thank You !,含量測(cè)定方法驗(yàn)證,PART V,USP Professional Education

38、 含量,概要：含量測(cè)定的定義含量測(cè)定方法驗(yàn)證所涉及的性能參數(shù)參數(shù)定義參數(shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)接受標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例分析,USP Professional Education 含量定義,USP眾多方法中，含量屬于第一類。更詳細(xì)的信息見(jiàn)： “含量是針對(duì)原料藥主成分或者成品制劑中活性成分（包括防腐劑）的定量

39、分析?！?含量測(cè)定目的:是得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果。,USP Professional Education 含量測(cè)試方法,,,ICH： 準(zhǔn)確度 精密度（重復(fù)性、 中間精密度、重現(xiàn)性） 專屬性 線性 范圍,,,,,驗(yàn)證內(nèi)容性能參數(shù),USP： 準(zhǔn)確度 精密度（重復(fù)性、 中間精密度、重現(xiàn)性） 專屬性 線性 范圍,USP Pro

40、fessional Education 專屬性,摘自ICH Q2(R1)專屬性是一種在其他成分（如雜質(zhì)，降解物，輔料等）可能存在下，采用的分析方法能夠正確鑒定，檢出被分析物的特性。驗(yàn)證目的能準(zhǔn)確地反映樣品中待測(cè)物的含量或效力的精確結(jié)果。,USP Professional Education

41、 專屬性,在雜質(zhì)可獲得的情況下對(duì)于主成分含量測(cè)定可在供試品中加入雜質(zhì)或輔料，并與未加雜質(zhì)和輔料的供試品比較測(cè)定結(jié)果，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾。 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下可采用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法進(jìn)行比較，對(duì)比兩種方法測(cè)定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗(yàn)（強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果。必要時(shí)進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含量測(cè)定成分的色譜峰中不

42、包含其他成分。,USP Professional Education Case Study [1],以HPLC含量測(cè)定法為例對(duì)以下色譜圖的比較：稀釋液藥品X標(biāo)準(zhǔn)溶液強(qiáng)制降解條件下的樣品溶液主峰峰純度測(cè)試和光譜分析,USP Professional Education Case Study [2],稀釋液色譜圖,接受標(biāo)準(zhǔn)：在主要物質(zhì)和雜質(zhì)的保留時(shí)間處，稀釋液不得有可檢測(cè)出的峰

43、,USP Professional Education Case Study [3],標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖,接受標(biāo)準(zhǔn)：已知雜質(zhì)須能相互并與主峰分離（分離度不低于1.5）,USP Professional Education Case Study [4],強(qiáng)制破壞實(shí)驗(yàn)溶于0.05M鹽酸中（8小時(shí)）溶于0.02M氫氧化鈉中（8小時(shí)）溶于0.15%雙氧水中（1.5小時(shí)）加熱樣品溶

44、液至100°C（9小時(shí)）加熱固體樣品至120°C（17小時(shí)）紫外光下（14天）,USP Professional Education Case Study [5],接受標(biāo)準(zhǔn)：降解產(chǎn)物須與主峰分離（分離度不低于1.5）,強(qiáng)制降解條件下的樣品溶液,USP Professional Education 專屬性,主峰峰純

45、度測(cè)試目的：主峰上有明顯的降解產(chǎn)物峰，測(cè)定方法不可行。如未對(duì)峰純度進(jìn)行有效分析，則無(wú)法判定主峰中是否包含著降解產(chǎn)物峰。對(duì)于制劑，如未對(duì)峰純度進(jìn)行有效分析，則無(wú)法判定輔料降解是否對(duì)測(cè)定結(jié)果有干擾。,USP Professional Education 專屬性,主峰峰純度檢測(cè)方法（雜質(zhì)結(jié)構(gòu)確認(rèn)）:紅外光譜核磁共振譜質(zhì)譜色譜,USP Profession

46、al Education Case Study [6],接受標(biāo)準(zhǔn)：在強(qiáng)降解實(shí)驗(yàn)中，主峰峰純度測(cè)試（相似度不低于980）,主峰峰純度測(cè)試結(jié)果,USP Professional Education 線性,線性是指響應(yīng)（測(cè)試結(jié)果）與試樣中被測(cè)物質(zhì)濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量試驗(yàn)和含量測(cè)定均需要驗(yàn)證線性

47、。 應(yīng)在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系。,USP Professional Education 線性,可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測(cè)物質(zhì)濃度進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)濃度。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，進(jìn)行線性回歸。 R2應(yīng)≥0.99到0.9999Y軸截距:在標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)值的n%內(nèi)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)

48、轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，并說(shuō)明依據(jù)。,USP Professional Education 線性,以HPLC方法為例：在測(cè)量濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，各濃度分別測(cè)定3次，每次做3個(gè)平行，分別測(cè)定其主峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。    可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R

49、2）不得小于0.99，Y軸截距應(yīng)在100％標(biāo)準(zhǔn)濃度響應(yīng)值的2％以內(nèi)。,USP Professional Education 范圍,范圍系指能達(dá)到一定的精密度，準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍是規(guī)定值，具體的范圍一般根據(jù)檢測(cè)的目的而設(shè)定，并通常從線性研究中得到。定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證范圍通常用與分析方法的測(cè)試結(jié)果相同的單位（如百分濃

50、度）表達(dá)。,USP Professional Education 范圍,驗(yàn)證時(shí)所設(shè)定的范圍應(yīng)至少包括了檢定標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的范圍，如標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定成品濃度應(yīng)為標(biāo)示量的80％～120％，則驗(yàn)證的范圍可設(shè)定為標(biāo)示量的70～130％。確定范圍的方法為：供試品濃度（含量）在范圍末端（最高和最低限）和范圍內(nèi)時(shí)，均能獲得滿意的線性、精密度和準(zhǔn)確性。,USP Professional Educat

51、ion 準(zhǔn)確度,USP- "該法測(cè)定所得的結(jié)果與真實(shí)值的接近程度?！盜CH- “該法測(cè)定所得的結(jié)果與認(rèn)可的常規(guī)真實(shí)值或標(biāo)準(zhǔn)值的接近程度。”,USP Professional Education 準(zhǔn)確度,一定的準(zhǔn)確度為定量測(cè)定的必要條件，因此涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)

52、目均需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度，如含量測(cè)定、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。方法：準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，對(duì)于制劑一般以回收率試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。也可在精密度，線性和專屬性被確認(rèn)后，推斷得出。與已知準(zhǔn)確性的方法進(jìn)行比較（標(biāo)準(zhǔn)方法）。,USP Professional Education 準(zhǔn)確度,試驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，即測(cè)定9次，報(bào)告已知加

53、入量的回收率（％）。 具體的驗(yàn)證方法案例為：驗(yàn)證時(shí)一般要求分別配制濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測(cè)定其含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率。    可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。,USP Professional Education

54、 精密度,USP：“重復(fù)性指在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，由同一個(gè)分析人員在較短時(shí)間間隔內(nèi)使用同一個(gè)分析方法?！薄爸虚g精密度指實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的偏差，在不同的時(shí)間，不同的分析人員，使用同一實(shí)驗(yàn)室的不同的儀器。”“在這里，重現(xiàn)性指在不同實(shí)驗(yàn)室使用同一個(gè)分析方法，如合作研究?！?USP Professional Education 精密度,同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行含量測(cè)定的結(jié)果之間

55、的接近程度。精密度應(yīng)在方法規(guī)定的定量范圍內(nèi)求得。精密度以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差（RSD）表示。,USP Professional Education 精密度（重復(fù)性）,ICH：目的：確定在同一個(gè)試驗(yàn)內(nèi)同一個(gè)供試品在測(cè)量范圍內(nèi)的不同濃度時(shí)測(cè)定的精密度。方法1：配制3個(gè)稀釋度的供試品（測(cè)量范圍內(nèi)的高、中、低濃度）每一個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定至少3次計(jì)算每一濃度測(cè)定結(jié)果的均值和SD計(jì)算每一濃度的RS

56、D值方法2：配制至少6份相同濃度的供試品溶液（100%濃度水平），計(jì)算至少6份樣品濃度測(cè)定結(jié)果的均值、SD和RSD值接受標(biāo)準(zhǔn)：所得含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD)應(yīng)不大于2.0%。,USP Professional Education 精密度（中間精密度）,目的：確定在不同試驗(yàn)間對(duì)測(cè)量范圍內(nèi)同一個(gè)供試品在不同濃度時(shí)測(cè)定的精密性。方法：配制3個(gè)稀釋度的供試品（測(cè)量范圍內(nèi)的高、中、低濃度）在3個(gè)試驗(yàn)中

57、對(duì)每一個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定3次分析人員設(shè)備日期不同批號(hào)或來(lái)源的實(shí)驗(yàn)材料計(jì)算每一試驗(yàn)中每一濃度測(cè)定結(jié)果的均值和SD計(jì)算試驗(yàn)間每一濃度的RSD值接受標(biāo)準(zhǔn)：所得含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD)應(yīng)不大于2.0%。,USP Professional Education 精密度（重現(xiàn)性）,當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。FDA公司內(nèi)至少兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室-參照FDA：色譜分析方法驗(yàn)證指南.1

58、994.FDA對(duì)于多實(shí)驗(yàn)室，按照“用于測(cè)定分析方法精確性的實(shí)驗(yàn)室間協(xié)作研究的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程”AOAC（美國(guó)官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)）8個(gè)樣品，8個(gè)實(shí)驗(yàn)室Statistical Manual of the AOAC W.J. Youden and E.H. Steiner,USP Professional Education 耐用性,耐用性分析方法的耐用性是指試驗(yàn)參數(shù)被有意進(jìn)行微小改

59、變時(shí)，測(cè)量結(jié)果不受影響的能力，用于說(shuō)明通常使用條件下該分析方法的可靠性。,USP Professional Education 耐用性,耐用性主要考察方法本身對(duì)于可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說(shuō)明小的變動(dòng)能否符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法有效。根據(jù)具體情況，可針對(duì)一個(gè)或幾個(gè)關(guān)鍵的參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。開始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予

60、以寫明。,USP Professional Education 耐用性,耐用性關(guān)鍵系數(shù)的選擇,方法驗(yàn)證匯總,PART VI,為什么進(jìn)行驗(yàn)證？,驗(yàn)證是闡述性能參數(shù)符合分析應(yīng)用目的的要求的過(guò)程通過(guò)適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和分析的文化記錄來(lái)闡明,驗(yàn)證方案起草,起草一個(gè)適合的驗(yàn)證方案，應(yīng)考慮：分析方法的目的性能參數(shù)的選擇基于以下方面考慮的適當(dāng)?shù)慕邮軜?biāo)準(zhǔn)使用目的（定量/定性）先前的要求來(lái)