分子生物學(xué)實驗-感受態(tài)的制備和轉(zhuǎn)化

1、實驗實驗三感受感受態(tài)的制的制備及轉(zhuǎn)化一、一、實驗實驗?zāi)康哪康?了解了解質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化原理化原理2熟悉感受熟悉感受態(tài)細態(tài)細菌的制菌的制備和轉(zhuǎn)化步化步驟二、二、實驗實驗原理原理1感受感受態(tài)細態(tài)細胞與胞與轉(zhuǎn)化感受感受態(tài)指受體（或者宿主）最易接受外源指受體（或者宿主）最易接受外源DNA片段并片段并實現(xiàn)實現(xiàn)其轉(zhuǎn)化的一種生理狀化的一種生理狀態(tài)，它是由受體菌的，它是由受體菌的遺傳遺傳性狀所決定的，同性狀所決定的，同時也受菌也受菌齡、外界、外界環(huán)境因子

2、的影響。境因子的影響。cAMP可以使感受可以使感受態(tài)水平提高一萬倍，而水平提高一萬倍，而Ca2也可大大促也可大大促進轉(zhuǎn)進轉(zhuǎn)化的作用?；淖饔谩＜毎母惺馨母惺軕B(tài)一般出一般出現(xiàn)在對數(shù)生數(shù)生長期，期，新鮮幼嫩的幼嫩的細胞是制胞是制備感受感受態(tài)細態(tài)細胞和胞和進行成功行成功轉(zhuǎn)化的關(guān)化的關(guān)鍵。制。制備出的出的感受感受態(tài)細態(tài)細胞暫時暫時不用不用時，可加入占，可加入占總體積15%的無菌甘油或的無菌甘油或70℃保存（有效期存（有效期6個月）。個月）。

3、轉(zhuǎn)化特指將化特指將質(zhì)粒DNA或以其或以其為載為載體構(gòu)建的重體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細菌體內(nèi)，使之體內(nèi)，使之獲得新的得新的遺傳遺傳特性的一種方法。受體特性的一種方法。受體細胞經(jīng)過經(jīng)過一些特殊方一些特殊方法（如：法（如：電擊電擊法，法，CaCl2等化學(xué)等化學(xué)試劑試劑法）法）處理后，使理后，使細胞膜的通透性胞膜的通透性發(fā)生變化，成化，成為能容能容許外源外源DNA分子通分子通過的感受的感受態(tài)細態(tài)細胞。胞。進入細胞的胞的DNA分子通分子通過復(fù)制、表

4、達復(fù)制、表達實現(xiàn)遺傳實現(xiàn)遺傳信息的信息的轉(zhuǎn)移，使受體移，使受體細胞出胞出現(xiàn)新的遺傳遺傳性狀。性狀。大腸桿菌的桿菌的轉(zhuǎn)化常用化學(xué)法（化常用化學(xué)法（CaCl2法），法），該法最先是由法最先是由Cohen于1972年發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)的。其原理是的。其原理是細菌處于0℃，CaCl2的低滲溶液中，菌的低滲溶液中，菌細胞中，是外源性中，是外源性DNA的插入位點。的插入位點。雖然使用然使用藍白篩選篩選的工程菌因的工程菌因為缺失了缺失了N端得端得146個氨基酸