產(chǎn)堿桿菌DN25降氰酶類型判斷及其分離純化.pdf

1、氰化物在工業(yè)中的廣泛應(yīng)用造成大量含氰廢水，環(huán)境污染問題嚴(yán)重。與傳統(tǒng)化學(xué)處理法相比，生物降解具有無害化、可資源化的優(yōu)點(diǎn)，是一種很有發(fā)展前景的污染治理方法。自然界中存在多種具有降氰能力的細(xì)菌、真菌和植物。本實(shí)驗(yàn)室篩選保藏的一株產(chǎn)堿桿菌Alcaligenes sp. DN25對(duì)無機(jī)氰具有較強(qiáng)降解活性，具有一定的工業(yè)應(yīng)用前景。
　　 本文通過分析菌株DN25催化氰降解的產(chǎn)物和氰降解反應(yīng)進(jìn)程，初步判定菌株的降解途徑是由氰水解酶、氰水合酶和

2、酰胺酶共同作用的水解途徑，其中氰水解酶起主要作用。同時(shí)添加氰化物對(duì)菌株降氰酶的生物合成無誘導(dǎo)作用。
　　 根據(jù)氰水解酶和氰水合酶的催化作用機(jī)理，在培養(yǎng)基中分別添加四種金屬離子和四種含硫物質(zhì)來考察其對(duì)培養(yǎng)物比活力的影響。Co2+對(duì)菌體生長(zhǎng)有抑制作用，而Zn2+、Mn2+、MoO42-對(duì)菌體生長(zhǎng)有促進(jìn)作用：Co2+、MoO42-的加入使菌體降氰活性顯著降低。DL-半胱氨酸對(duì)菌體產(chǎn)酶有明顯促進(jìn)作用，DL-甲硫氨酸可同時(shí)提高菌株的產(chǎn)酶水

3、平和細(xì)胞生長(zhǎng)量。在1L三角瓶中進(jìn)行放大培養(yǎng)優(yōu)化，得到最佳培養(yǎng)條件：在基本培養(yǎng)基中添加0.8％(W/V)的DL-甲硫氨酸，裝液量l00mL，pH9.0，接種量8％。培養(yǎng)物比活力平均值為2.18U·mL-1，是優(yōu)化前的3.46倍。菌株DN25的生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酶曲線趨勢(shì)基本一致，培養(yǎng)40h后生長(zhǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期。
　　 選用超聲波破碎法破碎細(xì)胞并提取粗酶，最適破碎條件為：超聲功率400W，每次工作時(shí)間4s，間歇時(shí)間7s，凈工作時(shí)間9min。采