植物乳桿菌發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽及分離純化研究.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(AngiotensinConveningEnzyme，ACE)在人體血壓調(diào)節(jié)過程中有著非常重要的作用，ACE抑制肽可有效地抑制ACE的活性，從而保持生物體的血壓穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn)，一些乳桿菌在其發(fā)酵過程中可產(chǎn)生ACE抑制肽，且食源性ACE抑制肽與傳統(tǒng)的降壓藥物相比，具有生產(chǎn)成本低、較易吸收、對患者毒副作用低等優(yōu)勢。近年來國內(nèi)外對ACE抑制肽的研發(fā)成為廣大科研工作者研究的新熱點，日本和芬蘭等國已有降壓產(chǎn)品上市，而國內(nèi)尚處于研

2、究階段。本課題以陜西豐富的羊乳為原料乳，利用益生菌發(fā)酵生產(chǎn)ACE抑制肽，為ACE抑制肽的制備開辟新的途徑。
　　本課題選用實驗室已選出的4株益生乳桿菌分別在復(fù)原羊乳中發(fā)酵，篩選出具有較高ACE抑制活性的植物乳桿菌L69，通過單因素試驗和響應(yīng)面設(shè)計分別優(yōu)化了L69發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽的發(fā)酵培養(yǎng)基和產(chǎn)肽條件，確定了L69產(chǎn)生ACE抑制肽的最適發(fā)酵條件。得到發(fā)酵乳經(jīng)超濾粗分離、DA201-C大孔吸附樹脂脫鹽精制及SephadexG-1

3、5凝膠層析等方法純化ACE抑制肽，獲得以下結(jié)論:
　　(1)Plackett-Burman試驗結(jié)果表明乳糖和酪蛋白是影響植物乳桿菌發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽的主要物質(zhì)。采用中心復(fù)合設(shè)計(CentralCompositeDesign)試驗得到優(yōu)化后的發(fā)酵條件為:乳糖0.49％，酪蛋白濃度0.23％。驗證試驗ACE抑制率高達(dá)89.16％，比對照組增加了17.83％。L69活菌數(shù)為9.00×108cfu/mL，也高于對照組。
　　(2

4、)單因素試驗考察了不同產(chǎn)肽條件在羊乳發(fā)酵的過程中對于ACE抑制率的影響，Plackett-Burman試驗篩選結(jié)果表明，影響植物乳桿菌L69發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽的顯著性因子是:溫度、氯化鈣和吐溫-80。采用爬坡試驗和Box-Behnken設(shè)計確定了最適的產(chǎn)肽條件為:溫度35℃、氯化鈣濃度為0.07％及0.04％的吐溫-80。驗證試驗ACE抑制率高達(dá)88.91％，較對照組增加了19.48％，將兩個響應(yīng)面試驗與空白組做對照試驗，結(jié)果表明，

5、L69產(chǎn)ACE抑制肽的最適生產(chǎn)條件是乳糖濃度為0.49％，酪蛋白濃度0.23％，此條件下產(chǎn)生的ACE抑制率最高。
　　(3)分離純化結(jié)果表明，超濾后分子量(M)＜1kDa樣品的IC50最小，DA201-C大孔樹脂吸附ACE抑制肽的最適pH值是2，最適解吸的乙醇濃度是75％，經(jīng)大孔吸附樹脂處理樣品后，其IC50為0.247mg/mL，降低了0.073mg/mL;最適的凝膠色譜條件是上樣濃度為150mg/mL的SephadexG-15