臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的設(shè)置質(zhì)量管理體系的建立及技術(shù)驗(yàn)收

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及質(zhì)量管理體系的建立,衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置,依據(jù)：衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)）,臨床標(biāo)本的接收,通常的工作流程：標(biāo)本采集 血清分離 編號(hào) 保存或檢測(cè)應(yīng)在四個(gè)測(cè)定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接收 接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中在核酸提取時(shí)帶入至標(biāo)本制備區(qū),,,,什么樣的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室

2、是最標(biāo)準(zhǔn)的？,,臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一般原則,各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作,“十六字口訣”,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立,質(zhì)量手冊(cè)質(zhì)量體系程序文件標(biāo)準(zhǔn)操作程序 (相關(guān)記錄表格),質(zhì)量管理的內(nèi)涵,寫(xiě)你所做的做你所寫(xiě)的記錄你已做的分析你已做的,怎樣編寫(xiě)SOP？,,實(shí)驗(yàn)室清潔SOP要點(diǎn),目的:為了使實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面和儀器設(shè)備在實(shí)用后，處于潔凈和無(wú)感染性狀態(tài)，以防止出現(xiàn)因儀器設(shè)備不潔影響檢測(cè)或儀器使用壽命；防止

3、因?qū)嶒?yàn)室臺(tái)面、地面和儀器設(shè)備的生物傳染危險(xiǎn)性造成實(shí)驗(yàn)室人員感染，以及防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果等。 適用范圍應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)室地面、臺(tái)面和儀器設(shè)備等的清潔。 按實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面和儀器設(shè)備分開(kāi)來(lái)寫(xiě)各自的具體清潔方法，要具體而又有可操作性 應(yīng)規(guī)定工作人員在清潔時(shí)，必須按試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?擴(kuò)增(及產(chǎn)物分析)區(qū)方向進(jìn)行，不得逆行 規(guī)定每一工作區(qū)域的清潔必須使用專(zhuān)用的清潔用具，不得混用 規(guī)定有潛在生物傳染危險(xiǎn)性材料濺出時(shí)的消毒清

4、潔方法,生物安全防護(hù)SOP要點(diǎn),明確規(guī)定實(shí)驗(yàn)室工作人員在進(jìn)行哪一類(lèi)接觸到有潛在生物傳染危險(xiǎn)性的物品和材料時(shí)，應(yīng)使用哪類(lèi)個(gè)體生物安全防護(hù)設(shè)備和用具 制定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)銳器物品的使用規(guī)則 制定發(fā)生意外如手指劃破、血清濺入眼內(nèi)等情況下的處理程序 明確有潛在生物傳染危險(xiǎn)性的廢棄物（包括廢棄臨床標(biāo)本）拿出實(shí)驗(yàn)室前的消毒方法如高壓或化學(xué)消毒,儀器設(shè)備的維護(hù)和校準(zhǔn)SOP,責(zé)任人維護(hù)和校準(zhǔn)的基本方面：光路、濾光片、波長(zhǎng)、加熱模塊的清潔、具體的校準(zhǔn)點(diǎn)選

5、擇（如加樣器的校準(zhǔn)體積點(diǎn)選擇、溫度計(jì)的校準(zhǔn)溫度點(diǎn)選擇等）、維護(hù)和校準(zhǔn)的具體方法包括用具 校準(zhǔn)合格的判斷標(biāo)準(zhǔn) 維護(hù)和校準(zhǔn)的間隔時(shí)間,儀器設(shè)備的操作 SOP,按照每臺(tái)儀器設(shè)備的使用說(shuō)明書(shū)，將其詳細(xì)操作步驟包括開(kāi)機(jī)關(guān)機(jī)次序、編程、調(diào)試、運(yùn)行、計(jì)算等按實(shí)際使用中的先后順序逐項(xiàng)列出，最后還應(yīng)有使用的注意事項(xiàng)。,臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收和保存 SOP,特定標(biāo)本采集的具體方法步驟 明確規(guī)定標(biāo)本的采集容器要求 明確標(biāo)本的采集量 明確標(biāo)本采集

6、后送到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)所能容許的最大時(shí)間間隔，亦即標(biāo)本采集后，應(yīng)在多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室 明確標(biāo)本采集后，在送至實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)前的保存方式和條件 明確標(biāo)本從采集處運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室過(guò)程中所要求的運(yùn)送條件 明確標(biāo)本接收時(shí)，簽收的程序、拒收的標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)本唯一編號(hào)的規(guī)則 規(guī)定標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的短期（應(yīng)有具體時(shí)間）和長(zhǎng)期（應(yīng)有具體時(shí)間）保存條件和要求 制定保證標(biāo)本安全，即如何防止標(biāo)本丟失、掉換、變質(zhì)的措施,試劑和消耗品的質(zhì)檢 SOP,試劑質(zhì)檢的基本方面，如

7、試劑的抗干擾能力（主要是針對(duì)提取試劑），即對(duì)溶血、脂血標(biāo)本擴(kuò)增抑制作用的了解?？赏ㄟ^(guò)自行制備含已知量病毒核酸的不同程度溶血或脂血的標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)檢。如為定量檢測(cè)試劑，還應(yīng)包括檢測(cè)的重復(fù)性、線性范圍等的質(zhì)檢，通常使用2-3份樣本進(jìn)行檢測(cè)即可。如為定性檢測(cè)試劑，則應(yīng)重點(diǎn)考察測(cè)定下限，可用系列稀釋的含已知量靶核酸的血清標(biāo)本進(jìn)行 核酸提取用離心管質(zhì)檢的基本方面 帶濾心吸頭的質(zhì)檢主要是濾心的密封性,項(xiàng)目檢測(cè)、結(jié)果判斷、解釋和報(bào)告 SOP,標(biāo)本進(jìn)入

8、實(shí)驗(yàn)程序后的操作編號(hào)方式 根據(jù)所用試劑盒確定的詳細(xì)操作流程 儀器編程及文件名的編寫(xiě)規(guī)則 結(jié)果判讀的流程和規(guī)則 結(jié)果分析解釋的流程 結(jié)果報(bào)告流程,實(shí)驗(yàn)記錄及其管理 SOP,日常檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)記錄的基本內(nèi)容的規(guī)定，如儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)過(guò)程及有關(guān)數(shù)據(jù)；檢驗(yàn)試劑來(lái)源和批號(hào)；檢驗(yàn)標(biāo)本的來(lái)源和唯一編號(hào)；試劑的配制；實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件的控制記錄；實(shí)驗(yàn)室清潔的記錄；質(zhì)控的記錄；原始檢測(cè)數(shù)據(jù)及其推導(dǎo)記錄等 對(duì)實(shí)驗(yàn)記錄者的簽名方式的規(guī)定和要求

9、實(shí)驗(yàn)記錄管理的基本方面：指定專(zhuān)門(mén)的管理人；有專(zhuān)門(mén)的保存處如柜子等；記錄的登記歸檔方法；記錄的借閱及銷(xiāo)毀記錄；記錄保存的時(shí)間；電子記錄的備份保存具體方法及保存時(shí)間等,室內(nèi)質(zhì)量控制 SOP,明確室內(nèi)質(zhì)控物的來(lái)源及濃度 明確所選用的質(zhì)控方法 明確失控的判斷標(biāo)準(zhǔn)或所采用的失控規(guī)則 明確失控后的分析及處理措施,參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià) SOP,明確規(guī)定室間質(zhì)評(píng)樣本的接收記錄方式、保存條件及實(shí)驗(yàn)編號(hào)規(guī)則 明確室間質(zhì)評(píng)樣本的檢測(cè)流程，要強(qiáng)調(diào)的是，室間

10、質(zhì)評(píng)樣本應(yīng)以與臨床標(biāo)本相同的方式處理和檢測(cè) 明確室間質(zhì)評(píng)樣本的報(bào)告流程，即填寫(xiě)、復(fù)核和簽發(fā)如何進(jìn)行，由誰(shuí)負(fù)責(zé) 明確對(duì)返回結(jié)果的分析流程和責(zé)任人 明確室間質(zhì)評(píng)檢測(cè)失敗的原因分析流程 明確如果測(cè)定準(zhǔn)確性出現(xiàn)問(wèn)題后，如何針對(duì)性采取措施的流程,投訴處理 SOP,明確投拆第一接觸人對(duì)投拆的處理流程，即如何記錄、如何針對(duì)相關(guān)投訴的進(jìn)一步處理程序、是否需要報(bào)告和如何報(bào)告、以及如何向投拆人返回處理意見(jiàn)等。可將投拆分為不同類(lèi)如對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果正確性、服

11、務(wù)態(tài)度、報(bào)告單填寫(xiě)錯(cuò)誤等分別編寫(xiě)處理流程 投拆有效時(shí)的如何改進(jìn)和采取何種措施的具體流程。應(yīng)非常具體并具有可操作性,臨床PCR檢驗(yàn)流程記錄表 檢驗(yàn)日期 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 擴(kuò)增儀中保存文件名： 使用說(shuō)明：1．本記錄表須嚴(yán)格遵循試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?擴(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）單一流向移動(dòng)，嚴(yán)禁逆向移動(dòng)。2．各項(xiàng)工作執(zhí)行后，在相應(yīng)敘述前的“?”內(nèi)打“?”。3．本記錄表最后與相應(yīng)

12、的標(biāo)本接收記錄等歸檔保存于擴(kuò)增區(qū)的專(zhuān)用文件柜內(nèi)，以備查找。,實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備? 試劑在有效期內(nèi) ? 擴(kuò)增儀、加樣器和溫度計(jì)在校準(zhǔn)的有效期內(nèi)? 生物安全柜的濾膜在使用有效期內(nèi) ? 消毒溶液在有效期內(nèi)? 沖眼器內(nèi)無(wú)菌生理鹽水在有效期內(nèi) ? 離心管、帶濾心吸頭已經(jīng)過(guò)質(zhì)檢合

13、 操作者：,試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）實(shí)驗(yàn)前 ： ? 打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備 ? 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭）? 冰箱溫度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷凍室（?18℃?2℃） ℃? 實(shí)驗(yàn)室溫度： ℃（允許范圍：10~30℃）；相對(duì)濕度： （允許范圍：30%~70%）PCR試劑來(lái)源： （可直接列出有關(guān)廠

14、家名稱(chēng)） 批號(hào)： 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 本次實(shí)驗(yàn)用量： 人份，剩余量： 人份。其他有關(guān)試劑配制：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制4％NaOH溶液 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列

15、出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制 毫升；? 其他： 儀器設(shè)備使用：離心機(jī)：? 正常 ? 不正常 振蕩器：? 正常 ? 不正常實(shí)驗(yàn)后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面、加樣器和離心機(jī)，并進(jìn)行紫外照射30分鐘以上。? 按XXX（將有

16、關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：,標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）實(shí)驗(yàn)前： ? 打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備 ? 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭）? 冰箱（柜）溫度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷凍室（?18℃?2℃） ℃? 實(shí)驗(yàn)室溫度：

17、℃（允許范圍：10~30℃）；相對(duì)濕度： （允許范圍：30%~70%）陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控物來(lái)源： 濃度及批號(hào)： 擴(kuò)增位置： 陰性室內(nèi)質(zhì)控物來(lái)源： 批號(hào)： 擴(kuò)增位置： 所取理的標(biāo)本（對(duì)應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號(hào)）及擬擴(kuò)增位置：19172521018263

18、11192741220285132129614223071523318162432核酸提取及加樣過(guò)程：按XXX（列出編號(hào)）SOP進(jìn)行。儀器設(shè)備使用： 生物安全柜：? 正常 ? 不正常 恒溫儀溫度校準(zhǔn)： ℃離心機(jī)：? 正常 ? 不正常 振蕩器：? 正常 ? 不正常實(shí)驗(yàn)后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出

19、）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面及儀器設(shè)備。? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：,實(shí)驗(yàn)室的日常工作管理,工 作 項(xiàng) 目 核 查 點(diǎn)水浴箱、微量恒溫器（加熱模塊）

20、 □校準(zhǔn)及記錄溫度 次氯酸鈉溶液 □新鮮配制生物安全柜 □先起動(dòng)運(yùn)行30分鐘后再開(kāi)始工作 室內(nèi)質(zhì)控 弱陽(yáng)性質(zhì)控（定性） □有 低、中、高濃度質(zhì)控（定量）

21、 □有 陰性質(zhì)控：原樣本 □有 經(jīng)歷提取過(guò)程的空管 □有 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液管 □有實(shí)驗(yàn)臺(tái)面

22、 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔 □紫外照射加樣器、離心機(jī)

23、 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔實(shí)驗(yàn)室各區(qū) □遵循單一工作流向