尼妥珠單抗不同給藥時間對人肺腺癌a549、calu6細胞放射增

1、尼妥珠單抗不同給藥時間對人肺腺癌A549、Calu-6細胞放射增敏作用的研究,第一作者：劉曉斌指導教師：袁智勇天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院放療科/肺癌診治中心,研究背景,★肺癌發(fā)病率高 ，非小細胞肺癌占80%， 總5年存活率低。★放療療效仍不理想 。★放射增敏劑可以提高放療療效。分子 靶向藥物：低毒、高效，表皮生長因 子受體（EGFR）成為治療肺癌靶點。,,,存在問題,？EGFR抑制劑聯(lián)合放療的最佳給藥時間尚不明確。

2、？ EGFR抑制劑聯(lián)合放療治療相同類型腫瘤時，療效差別較大，具體原因不明，尚缺乏預測放射增敏療效的相關指標。,研究對象和目的,★對象◆細胞系：人肺腺癌A549、Calu-6細胞系◆主要試劑：尼妥珠單抗◆主要儀器：醫(yī)科達直線加速器★目的●明確尼妥珠單抗聯(lián)合放療的最佳給藥時間。●兩種細胞采用相同實驗方案，觀察結果是否相同，并探討產(chǎn)生差異的原因。,實驗設計,放療,,細胞克隆形成實驗,SER,,,,流式細胞術,Western

3、 blot,細胞周期細胞凋亡,AktpAkt,BaxBCL-2,P21,,,p-DNA-PK,,放射損傷,下游通路,凋亡指標,關卡蛋白,,,,原因,MTT實驗計算A549、Calu-6各自的IC20 /IC50值,,同時加藥,24h后加藥,,,,,,,,,,,24h前加藥,Western blot檢測A549、Calu-6EGFR表達,,實驗結果,WESTERN BIOT檢測兩種細胞EGFR表達,A:A549或者Calu-6細胞

4、 B:陽性對照 C:陰性對照,MTT檢測尼妥珠單抗對兩種細胞的增殖抑制作用,24hIC20,克隆形成曲線,A549,Calu-6,克隆形成結果,,,O N R,N→R

5、NR R→N,A549細胞周期圖,O N R,N→R NR

6、 R→N,N→R NR R→N,N→R NR R→N,A549細胞周期結果,*表示與相同時相其它實

7、驗組比較P值均<0.05,,,,Calu-6細胞周期圖,O N R,N→R NR

8、R→N,Calu-6細胞周期結果,*表示與相同時相其它實驗組比較P值均<0.05,,O N R,N→R NR

9、 R→N,A549細胞各組凋亡圖,N→R NR R→N,Calu-6細胞各組凋亡圖,O N

10、 R,N→R NR R→N,A549、 Calu-6細胞凋亡結果,*表示與相同細胞系其它實驗組比較P值均<0.05,,WESTERN BLOT,各組Akt、pAkt灰度值,*與各個實驗組比較，p＜0.05,,,小結㈠,◆相同的結果

11、兩種細胞N→R組的SER最高。兩種細胞N→R組的G2/M期比例和凋亡率最高 。兩種細胞N→R組的Bax、 P21達最高值，Bcl-2 、phospho-DNA-PK達最低值。各組Akt表達無差異。 pAkt表達在N→R組表達減至最低 ?！钌鲜龈淖儽砻鲀煞N不同的細胞系，尼妥珠單抗放療協(xié)同效應最佳順序均為放療前24h給藥。,小結㈡,◆不同的結果尼妥珠單抗對A549細胞的抑制作用更強。尼妥珠單抗無論何時給藥均對A549細胞產(chǎn)生放射

12、增敏作用，而Calu-6細胞僅見于放療前給藥。Calu-6細胞N組的G0/G1期阻滯不明顯， NR組、R → N 組未見G2/M期比例和凋亡率升高。A549細胞EGFR表達較高，而Calu-6細胞Akt、 pAkt表達較高。,討論,⒈A549、Calu-6細胞實驗結果不同的潛在原因：⑴ EGFR單抗的放射增敏作用與腫瘤細胞表面的EGFR表達水平密切關系。⑵Akt、 pAkt可能是抗EGFR療法中的耐藥因子。 ⒉推測Calu-6